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一種食品中敵草快殘留量的測(cè)定方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種食品中敵草快殘留量的測(cè)定方法。本發(fā)明的樣品前處理是首先用甲醇水溶液提取食品樣品中的敵草快，再選擇C18和PSA分散固相萃取劑對(duì)提取液進(jìn)行凈化，最后結(jié)合高效液相色譜-四極桿飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜，通過化合物離子的精確質(zhì)量數(shù)實(shí)現(xiàn)食品中殘留敵草快的定性和定量測(cè)定。本發(fā)明有效降低食品中敵草快殘留檢測(cè)中的基質(zhì)干擾，敵草快的回收率可達(dá)80.8%～97.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.5%～7.8%，定量限為10μg/kg，其操作簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、靈敏度高及重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)，是對(duì)已有QuEChERS方法的補(bǔ)充和改進(jìn)。完全能滿足我國和歐盟、美國、日本對(duì)相應(yīng)產(chǎn)品安全檢測(cè)的技術(shù)要求，將為我國人民食品安全及出口貿(mào)易健康發(fā)展提供有力的技術(shù)支撐。
【專利說明】一種食品中敵草快殘留量的測(cè)定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于農(nóng)藥殘留量的測(cè)定【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地說涉及一種食品中敵草快殘留量的測(cè)定方法。
【背景技術(shù)】
[0002]在水果、蔬菜、糧谷等農(nóng)作物種植過程中，農(nóng)田雜草對(duì)農(nóng)作物產(chǎn)量和品質(zhì)產(chǎn)生重要影響。除草劑在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的使用，不僅節(jié)省了大量繁重的除草體力勞動(dòng)和機(jī)械除草作業(yè)，更重要的是減少了因草害造成的農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)量和品質(zhì)的損失，得到可觀的經(jīng)濟(jì)效益。但是隨著人們對(duì)食品安全問題的關(guān)注，除草劑殘留對(duì)人類健康的危害也倍受關(guān)注。如屬于中等毒性除草劑的敵草快(diquat)化學(xué)名1，1，_乙撐_4，4，-聯(lián)吡啶陽離子屬于有機(jī)雜環(huán)類非選擇性除草劑。廣泛用于馬鈴薯、棉花、大豆、玉米、高粱、亞麻、向日葵等作物催枯，當(dāng)作物成熟時(shí)殘余綠色部分和雜草迅速枯干，可以提早收割；用于農(nóng)田雜草防除:夏玉米免耕除草、果園雜草生長(zhǎng)旺盛期進(jìn)行雜草葉面處理。由于其對(duì)皮膚和眼睛有刺激作用。我國、美國、歐盟和日本等國家對(duì)敵草快均制定了殘留限量標(biāo)準(zhǔn)，在水果、蔬菜、魚、肉等多種食品中的最大殘留限量0.05?2mg/kg。顯然隨著敵草快的推廣和使用，建立食品中敵草快殘留量的檢測(cè)方法具有很重要的意義。
[0003]已有QuEChERS方法作為新發(fā)展起來的樣品前處理技術(shù)，是代表快速、簡(jiǎn)單、價(jià)廉、高效、穩(wěn)定和安全(Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged、Safe)的樣品前處理方法。具有回收率高，分析農(nóng)藥范圍廣，處理速度快，溶劑使用量少，操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。目前國際廣泛認(rèn)可使用的QuEChERS方法有歐盟制定的EN15662和美國官方分析化學(xué)師協(xié)會(huì)的A0AC2007.01標(biāo)準(zhǔn)方法。上述2個(gè)方法稍有不同，但是原理相同，都包括提取、凈化2個(gè)步驟:1用乙腈或含1%乙酸的乙腈提取樣品，通過加入緩沖鹽混合物進(jìn)行鹽析萃取實(shí)現(xiàn)乙腈和樣品所在水相的液-液分離；2用分散固相萃取劑和無水硫酸鎂對(duì)提取溶液凈化，分散固相萃取劑依據(jù)樣品基質(zhì)和待測(cè)化合物的性質(zhì)，可選擇PSA、GCB、C18EC等。但都必須加入無水硫酸鎂除以去中乙腈中殘留的水分。但是敵草快屬于強(qiáng)極性季銨鹽類化合物，極易溶于用水，難以用乙腈從水相中萃取，因此無法采用原有QuEChERS方法進(jìn)行樣品前處理。通常敵草快前處理采用固相萃取柱凈化，但是方法較復(fù)雜，回收率低，對(duì)操作人員要求較高；或不經(jīng)凈化直接檢測(cè)，基質(zhì)干擾大，對(duì)儀器污染嚴(yán)重。因此尋求和建立適應(yīng)敵草快殘留檢測(cè)的QuEChERS前處理方法是非常必要的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種食品中敵草快殘留量的測(cè)定方法，以彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足。
[0005]本發(fā)明的另一目的是提供一種樣品前處理方法，以彌補(bǔ)現(xiàn)有國際廣泛認(rèn)可使用的QuEChERS方法無法用于敵草快殘留檢測(cè)的不足。
[0006]本發(fā)明的樣品前處理是對(duì)已有QuEChERS方法的補(bǔ)充和改進(jìn)，由于敵草快極易溶于水的特性，致使現(xiàn)有QuEChERS方法用乙腈或含1%乙酸的乙腈從水相中鹽析萃取的提取敵草快的方法無法實(shí)用，本發(fā)明選用甲醇水溶液為提取溶劑從樣品中直接提取，保證了敵草快的提取效率。在凈化步驟，因?yàn)樘崛∪軇┲饕撬?，所以現(xiàn)有方法加入無水硫酸鎂除以去除提取液中殘余水分的方法并不可行，因此本發(fā)明僅使用分散固相萃取劑對(duì)提取液進(jìn)行凈化，而不加入無水硫酸鎂，且分散固相萃取劑只能選擇C18和PSA。
[0007]因此，本發(fā)明的敵草快樣品檢測(cè)，其前處理是首先用甲醇水溶液提取食品樣品中的敵草快，然后選擇C18和PSA分散固相萃取劑對(duì)提取液進(jìn)行凈化，最后結(jié)合高效液相色譜-四極桿飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜(LC-Q T0F)，通過化合物離子的精確質(zhì)量數(shù)實(shí)現(xiàn)食品中殘留敵草快的準(zhǔn)確定性和定量分析。
[0008]本發(fā)明的測(cè)定方法包括如下步驟:
[0009]( I)提取
[0010]稱取均質(zhì)化的食品樣品于具塞塑料離心管中，加甲醇水溶液渦旋振蕩，離心；
[0011](2)凈化
[0012]移取上述步驟(I)獲得的上清液于塑料離心管中，加入基質(zhì)分散固相萃取劑，渦旋振蕩，離心，吸取上清液過0.22 μ m濾膜，所得樣品液待測(cè)定；
[0013](3)配制基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液
[0014]將空白樣品按上述步驟(I)、(2)處理，用該空白樣品基質(zhì)溶液在10?1000 μ g/L范圍內(nèi)配制敵草快系列濃度標(biāo)準(zhǔn)工作液；
[0015](4)液相色譜一四極桿飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜(LC-Q T0F)測(cè)定
[0016]a)定量測(cè)定:將步驟(3)中的各濃度基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行LC-Q TOF測(cè)定，以各濃度基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液的色譜峰面積對(duì)其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)工作曲線；在相同條件下將步驟(2)得到的樣品液注入LC-Q TOF進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得樣品液中敵草快的色譜峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到樣品液中敵草快含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量計(jì)算得到樣品中敵草快殘留量。
[0017]b)定性測(cè)定:檢測(cè)步驟(2)得到的樣品液中目標(biāo)化合物，若其準(zhǔn)分子離子色譜峰保留時(shí)間與基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液一致；且其準(zhǔn)確質(zhì)量數(shù)與濃度相當(dāng)基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液中目標(biāo)化合物的準(zhǔn)確質(zhì)量數(shù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不超過5ppm時(shí)，則判斷該樣品中存在敵草快；若上述兩個(gè)條件不能同時(shí)滿足，則判斷不含敵草快。
[0018]上述步驟(2)中優(yōu)選甲醇水溶液的體積濃度為20%。
[0019]上述步驟(2)中基質(zhì)分散固相萃取劑由C18和PSA組成，每毫升提取液中C18和PSA加入量分別為50mg。
[0020]上述步驟(4)中液相色譜的流動(dòng)相為A:甲醇和流動(dòng)相B:含0.1%甲酸-5mmol/L甲酸銨水溶液，采用A:B體積比20:80等度洗脫，流速:0.2mL/min。
[0021]上述步驟(4)中液相色譜的色譜柱為親水色譜柱(HILIC)。
[0022]上述步驟(4)中質(zhì)譜檢測(cè)使用電噴霧源(ESI)正離子模式，毛細(xì)管電壓為+4000V，霧化氣壓力為275.8kPa，干燥氣為氮?dú)?，干燥氣溫度?50°C，干燥氣流速為10.0L/min，參比離子 m/zl21.050873 與 m/z922.009798，掃描范圍 50_1100m/z。
[0023]上述步驟(4)中質(zhì)譜檢測(cè)使用一級(jí)全掃描模式，敵草快準(zhǔn)分子離子的準(zhǔn)確分子量184.3322。[0024]上述步驟(1)和(2)中的渦旋振蕩時(shí)間是lmin。
[0025]上述步驟(1)和(2)中的離心5000r/min,離心時(shí)間3~5min。
[0026]上述步驟(1)~(4)中樣品接觸到的包括離心管在內(nèi)的容器均應(yīng)為塑料材質(zhì)制成。
[0027]本發(fā)明的有益效果在于:
[0028]本發(fā)明能有效降低食品中敵草快殘留檢測(cè)中的基質(zhì)干擾，將此前處理方法結(jié)合HPLC-QT0F應(yīng)用于食品中敵草快定性確證和定量檢測(cè)。本發(fā)明具有操作簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、靈敏度高及重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)，是對(duì)已有QuEChERS方法的補(bǔ)充和改進(jìn)。完全能滿足我國和歐盟、美國、日本對(duì)相應(yīng)產(chǎn)品安全檢測(cè)的技術(shù)要求，將為保障我國人民食品安全及對(duì)外出口貿(mào)易健康發(fā)展提供有力的技術(shù)支撐。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0029]圖1為10ng/mL基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)敵草快提取離子色譜圖。
[0030]圖2敵草快標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0031]現(xiàn)以以下實(shí)施例來詳細(xì)說明本發(fā)明，但并不是限制本發(fā)明的范圍。
[0032]本發(fā)明實(shí)施例中使用的儀器與試劑:
[0033]T18Basic 均質(zhì)器(IKA, Germany) ;CR21G III型高速冷凍離心機(jī)(Hitachi, Japan)；MS3型旋渦混合器(IKA, Ge rmany) ; 1200高效液相色譜-6520四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜(Agilent, USA) ；PSA 分散固相萃取劑(Agilent，USA)；C18 分散固相萃取劑(Agilent，USA)。
[0034]試劑:甲醇(HPLC級(jí),Merke, Germany )；甲酸銨(HPLC 級(jí)，CNW, Germany );甲酸(HPLC級(jí)，CNW, Germany)。
[0035]敵草快標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì):純度為99.0%,購自德國Dr Ehrenstorfer公司。
[0036]實(shí)施例1:蘋果中敵草快殘留量的檢測(cè)
[0037](I)樣品前處理
[0038]稱取均質(zhì)化的蘋果樣品10.0g于50mL具塞塑料離心管中，加入IOmL體積濃度20%的甲醇水溶液，潤旋lmin, 5000r/min離心5min。離心后,取2mL上清提取液至裝有IOOmgC18和IOOmg PSA的離心管中，潤旋lmin, 5000r/min離心3min。取上清液過0.22 μ m濾膜后，所得樣品液供液相色譜-四極桿飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜(LC-Q TOF)測(cè)定。
[0039](2)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制
[0040]稱取25±0.1mg標(biāo)準(zhǔn)品于25mL塑料容量瓶中，用乙腈溶解，定容得1000.0 μ g/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；移取1.0mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液置于IOOmL塑料容量瓶中，用乙腈定容得到10.0yg/HlL標(biāo)準(zhǔn)中間液；
[0041]用經(jīng)檢測(cè)不含敵草快的蘋果作為空白樣品，通過上述前處理步驟制備空白基質(zhì)溶液，將標(biāo)準(zhǔn)中間液用空白基質(zhì)溶液稀釋配制成10、20、50、100、200、500、1000叩/1^系列基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。
[0042](3)液相色譜-四極桿飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜(LC-Q TOF)測(cè)定
[0043]定量測(cè)定:將步驟(3)中的各濃度基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行LC-Q TOF測(cè)定，以各濃度基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液的色譜峰面積對(duì)其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)工作曲線；在相同條件下將步驟(2)得到的樣品液注入LC-Q TOF進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得樣品液中敵草快的色譜峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到樣品液中敵草快含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量計(jì)算得到樣品中敵草快殘留量。
[0044]其中色譜條件為HILIC色譜柱(2.1mmX 100mm, 1.7 μ m;美國Waters);流動(dòng)相:甲醇和含0.1%甲酸-5mmol/L甲酸銨水，以體積比20:80等度洗脫；流速:0.2mL/min ；柱溫:30°C ;進(jìn)樣量:2yL0
[0045]其中質(zhì)譜參數(shù)為:電噴霧源(ESI)正離子模式掃描；干燥氣溫度350°C，干燥氣流速10L/min，霧化氣壓力275.8kPa，毛細(xì)管電壓4kV，毛細(xì)管出口電壓190V，掃描方式:一級(jí)全掃描，參比離子 m/zl21.050873 與 m/z922.009798，掃描范圍 50_1100m/z。
[0046]定性鑒定:檢測(cè)步驟(2)得到的樣品液中目標(biāo)化合物，若其準(zhǔn)分子離子色譜峰保留時(shí)間與基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液一致；且其準(zhǔn)確質(zhì)量數(shù)與濃度相當(dāng)基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液中目標(biāo)化合物的準(zhǔn)確質(zhì)量數(shù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不超過5ppm時(shí)，則判斷該樣品中存在敵草快；若上述兩個(gè)條件不能同時(shí)滿足，則判斷不含敵草快。
[0047]標(biāo)準(zhǔn)工作曲線和檢出限:
[0048]以基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的色譜峰面積對(duì)其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。以3倍信噪比(S/N)對(duì)應(yīng)的樣品中待測(cè)物濃度作為檢出限(LOD)，10倍信噪比(S/N)對(duì)應(yīng)的樣品中待測(cè)物濃度作為定量限(LOQ)，獲得各待測(cè)物的檢出限和定量限。結(jié)果顯示(如表1所示)，相關(guān)系數(shù)大于0.999，定量限和檢出限分別為10 μ g/kg和5 μ g/kg。
[0049]表1敵草快的保留時(shí)間、回歸方程、相關(guān)系數(shù)、定量限和檢出限
[0050]
【權(quán)利要求】
1.一種食品中敵草快殘留量的測(cè)定方法，其特征在于包括如下步驟: (1)提取 稱取均質(zhì)化的食品樣品于具塞塑料離心管中，加甲醇水溶液渦旋振蕩，離心； (2)凈化 移取上述步驟(1)獲得的上清液于塑料離心管中，加入基質(zhì)分散固相萃取劑，渦旋振蕩，離心，吸取上清液過0.22 μ m濾膜，所得樣品液待測(cè)定； (3)配制基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液 將空白樣品按上述步驟(1)、(2)處理，用該空白樣品基質(zhì)溶液在10~1000 μ g/L范圍內(nèi)配制敵草快系列濃度標(biāo)準(zhǔn)工作液； (4)液相色譜一四極桿飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定 a)定量測(cè)定:將步驟(3)中的各濃度基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行LC-QTOF測(cè)定，以各濃度基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液的色譜峰面積對(duì)其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)工作曲線；在相同條件下將步驟(2)得到的樣品液注入LC-Q TOF進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得樣品液中敵草快的色譜峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到樣品液中敵草快含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量計(jì)算得到樣品中敵草快殘留量； b)定性測(cè)定:檢測(cè)步驟(2)得到的樣品液中目標(biāo)化合物，若其準(zhǔn)分子離子色譜峰保留時(shí)間與基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液一致；且其準(zhǔn)確質(zhì)量數(shù)與濃度相當(dāng)基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液中目標(biāo)化合物的準(zhǔn)確質(zhì)量數(shù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不超過5ppm時(shí)，則判斷該樣品中存在敵草快；若上述兩個(gè)條件不能同時(shí)滿足，則判斷不含敵草快。
2.如權(quán)利要求1所述的食品中敵草快殘留量的測(cè)定方法，其特征是上述步驟(2)中甲醇水溶液的體積濃度為20%。
3.如權(quán)利要求1所述的食品中敵草快殘留量的測(cè)定方法，其特征是上述步驟(2)中基質(zhì)分散固相萃取劑由C18和PSA組成，每毫升提取液中C18和PSA加入量分別為50mg。
4.如權(quán)利要求1所述的食品中敵草快殘留量的測(cè)定方法，其特征是上述步驟(4)中液相色譜的流動(dòng)相為A:甲醇和流動(dòng)相B:含0.1%甲酸-5mmol/L甲酸銨水溶液，采用A:B體積比20:80等度洗脫,流速:0.2mL/min。
5.如權(quán)利要求1所述的食品中敵草快殘留量的測(cè)定方法，其特征是上述步驟(4)中液相色譜的色譜柱為親水色譜柱。
6.如權(quán)利要求1所述的食品中敵草快殘留量的測(cè)定方法，其特征是上述步驟(4)中質(zhì)譜檢測(cè)使用電噴霧源正離子模式，毛細(xì)管電壓為+4000V，霧化氣壓力為275.8kPa，干燥氣為氮?dú)?，干燥氣溫度?50°C，干燥氣流速為10.0L/min，參比離子m/zl21.050873與m/ζ922.009798，掃描范圍 50_1100m/z。
7.如權(quán)利要求1所述的食品中敵草快殘留量的測(cè)定方法，其特征是上述步驟(4)中質(zhì)譜檢測(cè)使用一級(jí)全掃描模式，敵草快準(zhǔn)分子離子的準(zhǔn)確分子量是184.3322。
8.如權(quán)利要求1所述的食品中敵草快殘留量的測(cè)定方法，其特征是上述步驟(1)和(2)中的渦旋振蕩時(shí)間是Imin。
9.如權(quán)利要求1所述的食品中敵草快殘留量的測(cè)定方法，其特征是上述步驟(1)和(2)中的離心5000r/min,離心時(shí)間3~5min。
10.如權(quán)利要求1所述的食品中敵草快殘留量的測(cè)定方法，其特征是上述步驟(1)~(4)中樣品接觸到的包`括離心管在內(nèi)的容器均應(yīng)為塑料材質(zhì)制成。
【文檔編號(hào)】G01N30/88GK103823011SQ201410097199
【公開日】2014年5月28日 申請(qǐng)日期:2014年3月16日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月16日
【發(fā)明者】劉靖靖, 湯志旭, 張曉梅 申請(qǐng)人:山東出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心