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一種多色熒光免疫層析蛋白芯片的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種多色免疫層析蛋白芯片，屬于免疫診斷【技術(shù)領(lǐng)域】。該芯片包括粘性底板、樣品墊、結(jié)合墊、分析膜、吸水墊；所述樣品墊、結(jié)合墊、分析膜、吸水墊以適當(dāng)重疊關(guān)系置于粘性底板上；所述結(jié)合墊有若干種不同檢測(cè)探針-熒光物質(zhì)和示蹤物-質(zhì)控探針結(jié)合物；所述分析膜上有檢測(cè)區(qū)，檢測(cè)區(qū)包括若干檢測(cè)矩陣，每一檢測(cè)矩陣包含若干種不同檢測(cè)探針和質(zhì)控探針，每一檢測(cè)探針特異對(duì)應(yīng)一種被檢靶標(biāo)，每一質(zhì)控探針特異對(duì)應(yīng)一種被檢靶標(biāo)質(zhì)控流程。本發(fā)明將蛋白芯片、免疫層析和多色熒光技術(shù)相互融合，實(shí)現(xiàn)了增加檢測(cè)矩陣面積，提高檢測(cè)精密度和降低漏診概率的需求。
【專利說明】一種多色熒光免疫層析蛋白芯片

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于免疫診斷【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其是涉及一種多色熒光免疫層析蛋白芯片，將免疫層析技術(shù)、蛋白芯片和多色熒光技術(shù)相互融合，實(shí)現(xiàn)增加檢測(cè)矩陣面積，提高檢測(cè)精密度和降低漏診概率的需求。

【背景技術(shù)】
[0002]免疫層析法是近幾年來國(guó)外興起的一種快速診斷技術(shù)，其原理是將特異的抗體先固定于硝酸纖維素膜的某一區(qū)帶，當(dāng)該干燥的硝酸纖維素一端浸入樣品(尿液或血清)后，由于毛細(xì)管作用，樣品將沿著該膜向前移動(dòng)，當(dāng)移動(dòng)至固定有抗體的區(qū)域時(shí)，樣品中相應(yīng)的抗原即與該抗體發(fā)生特異性結(jié)合，若用免疫膠體金、免疫酶染色或熒光可使該區(qū)域顯示一定的顏色，從而實(shí)現(xiàn)特異性的免疫診斷。就現(xiàn)有技術(shù)來講，免疫層析技術(shù)是一種較成熟、簡(jiǎn)便、快捷的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)手段，但其通常只能對(duì)一種靶標(biāo)進(jìn)行分析，無法實(shí)現(xiàn)高通量檢測(cè)。
[0003]免疫層析蛋白芯片技術(shù)在申請(qǐng)?zhí)枮?01010257719.5等專利中有詳細(xì)的描述，可以克服免疫層析技術(shù)無法高通量檢測(cè)以及芯片技術(shù)操作復(fù)雜無法現(xiàn)場(chǎng)使用的缺點(diǎn)。能夠?qū)崿F(xiàn)一次加樣同步檢測(cè)多種目標(biāo)物。當(dāng)樣品加入樣品墊位置，經(jīng)過樣品墊的過濾和緩沖作用進(jìn)入分析膜區(qū)域，相應(yīng)的抗原與分析膜與樣品墊交接處相應(yīng)的特異性免疫熒光微球結(jié)合后，沿著分析膜向前層析移動(dòng)，各免疫熒光微球移動(dòng)至膜上固定有抗體的不同區(qū)域后各自發(fā)生特異性結(jié)合，在不同的區(qū)域呈現(xiàn)出與樣本中檢測(cè)物濃度相關(guān)的不同顏色、光、電、磁信號(hào)的強(qiáng)度。特定波長(zhǎng)激發(fā)下檢測(cè)熒光強(qiáng)度即可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線定量計(jì)算得需分析指標(biāo)的濃度值。
[0004]傳統(tǒng)的免疫層析蛋白芯片技術(shù)是在分析膜上不同的區(qū)域固定不同的抗體，為實(shí)現(xiàn)數(shù)十種不同指標(biāo)的檢測(cè)，只能將結(jié)合抗體在分析膜上以很小的面積區(qū)域固定，該區(qū)域被稱為檢測(cè)矩陣。而在樣品層析時(shí)，難免會(huì)出現(xiàn)濃度不均勻的現(xiàn)象，即需要和某一特定檢測(cè)矩陣特異性結(jié)合的組分的主濃度峰并未通過相對(duì)應(yīng)的檢測(cè)矩陣，因?yàn)闄z測(cè)矩陣面積太小。這樣會(huì)導(dǎo)致試紙條的精密度變差，甚至引起漏檢。故在實(shí)際開發(fā)中，傳統(tǒng)的免疫層析芯片上難以支撐足夠多指標(biāo)的同時(shí)檢測(cè)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為了克服傳統(tǒng)的免疫層析蛋白芯片技術(shù)難以支撐足夠多指標(biāo)的同時(shí)檢測(cè)的不足，本發(fā)明提供一種免疫層析蛋白多色熒光芯片，該免疫層析蛋白多色熒光芯片采用免疫層析蛋白多色熒光芯片技術(shù)，該芯片大幅增加檢測(cè)矩陣的面積，降低上述因?qū)游龅牟痪恍砸鸬木芏茸儾钜约奥┰\的概率，更好的符合了多指標(biāo)同時(shí)準(zhǔn)確檢測(cè)的需求。
[0006]本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是:在粘性底襯上，樣品墊、結(jié)合墊、分析膜、吸水墊按照適當(dāng)?shù)闹丿B關(guān)系固定。
[0007]其中，粘性低襯是單面涂有壓力敏感膠的硬質(zhì)物質(zhì)；
其中，結(jié)合墊是具有較大床體積且微觀結(jié)構(gòu)勻稱的物質(zhì)，結(jié)合墊中有若干種檢測(cè)結(jié)合物和質(zhì)控結(jié)合物，檢測(cè)結(jié)合物由若干種熒光物質(zhì)和檢測(cè)探針連接而成，并與被檢靶標(biāo)特異性的一一對(duì)應(yīng)，質(zhì)控結(jié)合物由示蹤物和質(zhì)控探針連接而成，質(zhì)控層析過程正常與否；
其中，分析膜是微觀結(jié)構(gòu)勻稱的物質(zhì)，分析膜設(shè)有一個(gè)檢測(cè)區(qū)，每個(gè)檢測(cè)區(qū)包括若干檢測(cè)矩陣，每個(gè)檢測(cè)矩陣包含三種及三種以上不同的檢測(cè)探針，并且每個(gè)檢測(cè)矩陣所含的檢測(cè)探針都不相同，在同一檢測(cè)矩陣(本芯片檢測(cè)矩陣可以和質(zhì)控矩陣可以相互重疊)中包含若干種的檢測(cè)探針或質(zhì)控探針，檢測(cè)矩陣的每一種檢測(cè)探針一一對(duì)應(yīng)被檢靶標(biāo)中每一種特異性檢測(cè)，檢測(cè)矩陣的質(zhì)控每一種質(zhì)控探針一一對(duì)應(yīng)被檢靶標(biāo)每一種質(zhì)控流程；
其中，吸水墊是具有較大床體積的物質(zhì)；
其中，結(jié)合墊中的檢測(cè)結(jié)合物含有的不同熒光物質(zhì)和不同的檢測(cè)探針，一種特定的熒光物質(zhì)只和一種特定的檢測(cè)探針結(jié)合，并且只針對(duì)性的和每個(gè)檢測(cè)矩陣中的某一種特定的檢測(cè)探針發(fā)生特異性反應(yīng)(如有結(jié)合墊上有六種檢測(cè)結(jié)合物:檢測(cè)探針『熒光八、檢測(cè)探針13-突光8、檢測(cè)探針突光 ?:、檢測(cè)探針(1-突光八、檢測(cè)探針6-突光8、檢測(cè)探針突光〇，分析膜上有兩個(gè)檢測(cè)矩陣，檢測(cè)矩陣I有123檢測(cè)矩陣II有456，共有六種檢測(cè)探針，共有六個(gè)檢測(cè)探針，則檢測(cè)探針3 -熒光八只針對(duì)檢測(cè)矩陣I中檢測(cè)探針1結(jié)合，檢測(cè)探針6 -熒光8只針對(duì)檢測(cè)矩陣I的檢測(cè)探針2結(jié)合，檢測(cè)探針0 -熒光只針對(duì)檢測(cè)矩陣I中的檢測(cè)探針3結(jié)合；檢測(cè)探針(1 -熒光八只針對(duì)檢測(cè)矩陣2中檢測(cè)探針I(yè)I結(jié)合，檢測(cè)探針0 -熒光8只針對(duì)檢測(cè)矩陣II的檢測(cè)探針2結(jié)合，檢測(cè)探針？-熒光只針對(duì)檢測(cè)矩陣II中的檢測(cè)探針3結(jié)合),并通過儀器對(duì)對(duì)發(fā)生的反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)。
[0008]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明免疫層析蛋白多色熒光芯片實(shí)現(xiàn)方式包括夾心模式、間接模式和競(jìng)爭(zhēng)模式等，能同時(shí)在同一檢測(cè)矩陣中實(shí)現(xiàn)多種檢測(cè)指標(biāo)，大幅增加檢測(cè)矩陣的面積，降低了因?qū)游龅牟痪恍砸鸬木芏茸儾钜约奥┰\的概率，更好的符合了多指標(biāo)同時(shí)準(zhǔn)確檢測(cè)的需求，提高檢測(cè)準(zhǔn)確率，節(jié)約成本。
[0009]

【專利附圖】

【附圖說明】
[0010]下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說明圖1是本發(fā)明的整體示意圖圖中1粘性底襯，2樣品墊，3結(jié)合墊，4分析膜，5吸水墊，6檢測(cè)矩陣

【具體實(shí)施方式】
[0011]在圖1中在粘性底襯1上，樣品墊2、結(jié)合墊3、分析膜4、吸水墊5按照適當(dāng)?shù)闹丿B關(guān)系固定。
[0012]其中，粘性低襯1是單面涂有壓力敏感膠的硬質(zhì)物質(zhì)；
其中，結(jié)合墊3是具有較大床體積且微觀結(jié)構(gòu)勻稱的物質(zhì)，結(jié)合墊2中有若干種檢測(cè)結(jié)合物和質(zhì)控結(jié)合物，檢測(cè)結(jié)合物由若干種熒光物質(zhì)和檢測(cè)探針連接而成，并與被檢靶標(biāo)特異性的一一對(duì)應(yīng)，質(zhì)控結(jié)合物由示蹤物和質(zhì)控探針連接而成，質(zhì)控層析過程正常與否；其中，分析膜4是微觀結(jié)構(gòu)勻稱的物質(zhì)，分析膜4設(shè)有一個(gè)檢測(cè)區(qū)，每個(gè)檢測(cè)區(qū)包括若干檢測(cè)矩陣6，每個(gè)檢測(cè)矩陣包含三種及三種以上不同的檢測(cè)探針，并且每個(gè)檢測(cè)矩陣所含的檢測(cè)探針都不相同，在同一檢測(cè)矩陣(本芯片檢測(cè)矩陣可以和質(zhì)控矩陣可以相互重疊)中包含若干種的檢測(cè)探針或質(zhì)控探針，檢測(cè)矩陣6的每一種檢測(cè)探針對(duì)應(yīng)被檢祀標(biāo)中每一種特異性檢測(cè)，檢測(cè)矩陣6的質(zhì)控每一種質(zhì)控探針一一對(duì)應(yīng)被檢靶標(biāo)每一種質(zhì)控流程；
其中，吸水墊5是具有較大床體積的物質(zhì)；
其中，結(jié)合墊3中的檢測(cè)結(jié)合物含有的不同熒光物質(zhì)和不同的檢測(cè)探針，一種特定的熒光物質(zhì)只和一種特定的檢測(cè)探針結(jié)合，并且只針對(duì)性的和每個(gè)檢測(cè)矩陣5中的某一種特定的檢測(cè)探針發(fā)生特異性反應(yīng)(如有結(jié)合墊上有六種檢測(cè)結(jié)合物:檢測(cè)探針『熒光八、檢測(cè)探針卜突光8、檢測(cè)探針突光 ?:、檢測(cè)探針(1-突光八、檢測(cè)探針6-突光8、檢測(cè)探針熒光I分析膜上有兩個(gè)檢測(cè)矩陣，檢測(cè)矩陣I有123檢測(cè)矩陣II有456，共有六種檢測(cè)探針，共有六個(gè)檢測(cè)探針，則檢測(cè)探針3 -熒光八只針對(duì)檢測(cè)矩陣I中檢測(cè)探針1結(jié)合，檢測(cè)探針6 -熒光8只針對(duì)檢測(cè)矩陣I的檢測(cè)探針2結(jié)合，檢測(cè)探針0 -熒光只針對(duì)檢測(cè)矩陣I中的檢測(cè)探針3結(jié)合；檢測(cè)探針(1 -熒光八只針對(duì)檢測(cè)矩陣2中檢測(cè)探針I(yè)I結(jié)合，檢測(cè)探針6 -熒光8只針對(duì)檢測(cè)矩陣II的檢測(cè)探針2結(jié)合，檢測(cè)探針？-熒光只針對(duì)檢測(cè)矩陣II中的檢測(cè)探針3結(jié)合),并通過儀器對(duì)對(duì)發(fā)生的反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)。
[0013]本發(fā)明進(jìn)行生物靶標(biāo)檢測(cè)的方法如下:
4.添加樣品:將液體樣品或者經(jīng)過處理的液體樣品滴加至本發(fā)明免疫層析芯片的樣品塾2上；
5.層析反應(yīng):靜置數(shù)分鐘等待層析反應(yīng)完成，層析過程中，樣品墊2中的檢測(cè)結(jié)合物、被檢靶標(biāo)和分析膜4的檢測(cè)矩陣中的若干種檢測(cè)探針發(fā)生特異性的免疫反應(yīng)，在分析膜的檢測(cè)矩陣上發(fā)生熒光物質(zhì)結(jié)合量的變化，該結(jié)合量直接反映了被檢靶標(biāo)的有無或者多少；
6.結(jié)果判讀:本發(fā)明免疫層析芯片由于被檢靶標(biāo)反應(yīng)在分析膜的檢測(cè)矩陣中位置明確固定，因而通過儀器對(duì)示蹤物的信號(hào)進(jìn)行判讀，即可實(shí)現(xiàn):了解層析過程是否正常進(jìn)行和被檢靶標(biāo)的定性定量檢測(cè)和分析。
【權(quán)利要求】
1.一種免疫層析蛋白多色熒光芯片，在粘性底襯上，樣品墊、合墊、分析膜、吸水墊按照適當(dāng)?shù)闹丿B關(guān)系固定，其特征是:該芯片分析膜設(shè)有一個(gè)檢測(cè)區(qū)，每個(gè)檢測(cè)區(qū)包括若干檢測(cè)矩陣，在同一檢測(cè)矩陣(檢測(cè)矩陣可以和質(zhì)控矩陣相互重疊)中包含若干種的檢測(cè)探針和質(zhì)控探針，檢測(cè)區(qū)的每一種檢測(cè)探針一一對(duì)應(yīng)被檢靶標(biāo)中每一種特異性檢測(cè)，檢測(cè)區(qū)的每一種質(zhì)控探針 對(duì)應(yīng)被檢IE標(biāo)每一種質(zhì)控流程；該芯片結(jié)合墊中有若干種檢測(cè)結(jié)合物和質(zhì)控結(jié)合物，檢測(cè)結(jié)合物由若干種熒光物質(zhì)和檢測(cè)探針連接而成，并與被檢靶標(biāo)特異性的一一對(duì)應(yīng)，質(zhì)控結(jié)合物由示蹤物和質(zhì)控探針連接而成，質(zhì)控層析過程常與否。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芯片，其特征是:分析膜是微觀結(jié)構(gòu)勻稱的物質(zhì)，分析膜設(shè)有一個(gè)檢測(cè)區(qū)，每個(gè)檢測(cè)區(qū)包括若干檢測(cè)矩陣，在同一檢測(cè)矩陣(檢測(cè)矩陣可以和質(zhì)控矩陣可以相互重疊)中包含若干種的檢測(cè)探針和質(zhì)控探針，檢測(cè)區(qū)的每一種檢測(cè)探針一一對(duì)應(yīng)被檢靶標(biāo)中每一種特異性檢測(cè),檢測(cè)區(qū)的質(zhì)控每一種質(zhì)控探針--對(duì)應(yīng)被檢靶標(biāo)每一種質(zhì)控流程。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芯片，其特征是:結(jié)合墊中有若干種檢測(cè)結(jié)合物和質(zhì)控結(jié)合物，檢測(cè)結(jié)合物由若干種熒光物質(zhì)和檢測(cè)探針連接而成，并與被檢靶標(biāo)特異性的一一對(duì)應(yīng)，質(zhì)控結(jié)合物由示蹤物和質(zhì)控探針連接而成，質(zhì)控層析過程常與否。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芯片，其特征是:結(jié)合墊中的檢測(cè)結(jié)合物含有的不同熒光物質(zhì)和不同的檢測(cè)探針，一種特定的熒光物質(zhì)只和一種特定的檢測(cè)探針結(jié)合，并且只針對(duì)性的和每個(gè)檢測(cè)矩陣中的某一種特定的檢測(cè)探針發(fā)生特異性反應(yīng)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芯片，其特征是:實(shí)現(xiàn)方式包括夾心模式、間接模式和競(jìng)爭(zhēng)模式等，能同時(shí)在同一檢測(cè)矩陣中實(shí)現(xiàn)多種檢測(cè)指標(biāo)。
【文檔編號(hào)】G01N33/558GK104280544SQ201410151364
【公開日】2015年1月14日 申請(qǐng)日期:2014年4月16日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月16日
【發(fā)明者】蘇恩本, 金晶, 錢瑾, 李潔, 許行尚 申請(qǐng)人:南京基蛋生物科技有限公司