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專(zhuān)利名稱(chēng)：一種檢測(cè)食醋中所含氨基酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于食品檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測(cè)食醋中所含氨基酸的方法，更具體的涉及蒸餾法、固相萃取柱提取凈化與離子色譜-電化學(xué)檢測(cè)器聯(lián)用技術(shù)檢測(cè)食醋中氨基酸含量的方法。
背景技術(shù)：
食醋作為一種調(diào)味品，在日常生活中為人們所必須；隨著食醋所具有的諸如消除疲勞、抗衰老以及軟化血管，降血脂，降低膽固醇等保健作用的凸顯，食醋在生活中也顯得越來(lái)越重要。醋中含有0.05% -3%的蛋白質(zhì)，含氨基酸18種，其中人體必需的8種氨基酸均具備。醋的味道鮮美，醋味圓潤(rùn)、柔和，這些均是氨基酸的功勞。多種氨基酸混合產(chǎn)生醋的美味和有機(jī)酸的酸味混合產(chǎn)生醋的芳香。食醋按生產(chǎn)工藝分有釀造食醋與配制食醋:(I)、釀造食醋在GB18187-2000國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中定義是單獨(dú)或混合使用各種含有淀粉、糖的物料或酒精，經(jīng)微生物發(fā)酵釀制而成的液體調(diào)味品；其發(fā)酵工藝分為兩類(lèi):一類(lèi)是固態(tài)發(fā)酵食醋，另一類(lèi)是液態(tài)發(fā)酵食醋；(2)、配制食醋在SB10337-2000商業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)中定義是以釀造食醋為主體，與冰乙酸、食品添加劑等混合配制而成的調(diào)味食醋，且配制食醋中釀造食醋的比例(以乙酸計(jì))不得少于50%。由于釀造食醋周期長(zhǎng)、成本高，加之我國(guó)的標(biāo)準(zhǔn)比較落后，使得一些不法之徒有機(jī)可乘，用食用冰醋酸勾兌成配制食醋用來(lái)冒充釀造食醋以牟取暴利，更可恨的是工業(yè)冰醋酸勾兌成人工醋(簡(jiǎn)稱(chēng)合成醋)這種劣質(zhì)食醋不僅無(wú)營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，而且嚴(yán)重危害身體健康。根據(jù)現(xiàn)行的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，釀造食醋的理化指標(biāo)主要有:總酸(以乙酸計(jì))、不揮發(fā)酸(以乳酸計(jì))、可溶性無(wú)鹽固形物，無(wú)法制約冰醋酸勾兌成配制食醋和人工合成醋。使制假者用冰醋酸兌水稀釋后加入少量釀造食醋、焦糖色素、添加劑等就能達(dá)到釀造食醋的理化指標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)，披上“合格”的外衣進(jìn)行銷(xiāo)售，給食品監(jiān)管帶來(lái)困難?，F(xiàn)有檢測(cè)方法一般通過(guò)柱前或柱后對(duì)氨基酸衍生后采用高效液相色譜對(duì)進(jìn)行測(cè)定，這種方法衍生試劑費(fèi)用較高，試驗(yàn)操作較復(fù)雜，穩(wěn)定性差。采用離子色譜法進(jìn)行測(cè)定氨基酸一般通過(guò)大量的稀釋樣品來(lái)進(jìn)行測(cè)定，靈敏度較低，一些微量的氨基酸無(wú)法進(jìn)行檢測(cè)。因此急需一種檢測(cè)方法來(lái)準(zhǔn)確定量檢出釀造食醋中18種氨基酸的含量特征指標(biāo)，用以鑒別釀造食醋與配制食醋及合成醋，從而規(guī)范食醋行業(yè)，使其健康發(fā)展，確保食醋質(zhì)量安全。

發(fā)明內(nèi)容
為了鑒別釀造食醋與配制食醋及合成醋，本發(fā)明的目的在于公開(kāi)了一種分析檢測(cè)食醋中18種氨基酸的方法，具體來(lái)說(shuō)提供了一種利用蒸餾法濃縮富集、固相萃取柱提取凈化與離子色譜-電化學(xué)檢測(cè)器聯(lián)用技術(shù)檢測(cè)食醋中氨基酸化合物的方法，以對(duì)食醋中氨基酸進(jìn)行定性和定量分析。本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
一種檢測(cè)食醋中所含氨基酸的方法，包括下述步驟:(I)、對(duì)食醋待測(cè)樣品用水蒸氣蒸餾提取，除去待測(cè)樣品中的揮發(fā)酸，并對(duì)氨基酸進(jìn)行了濃縮富集；(2)、對(duì)步驟(I)的提取物用固相萃取柱進(jìn)行提取凈化；(3)、對(duì)步驟(2)的凈化產(chǎn)物用離子色譜-電化學(xué)檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，經(jīng)過(guò)離子色譜分析后得到食醋試樣中所含氨基酸的色譜圖；(4)、配備18種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，經(jīng)過(guò)離子色譜分析后，得到18種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖，所述離子色譜分析的條件與步驟(3)中的離子色譜分析的條件相同；(5)、將步驟(3)和步驟(4)分別得到的色譜圖進(jìn)行對(duì)照，即得食醋試樣中所含有氨基酸的種類(lèi)；本技術(shù)方案中18種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制過(guò)程為:分別稱(chēng)取18種氨基酸單標(biāo)樣(0.1g)用超純水配制成l OOOymol/L標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液；分別量取18種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液
5.0mL,用超純水定容至IOOmL,搖勻備用，配制成18種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液(50 μ mol/L)。上述技術(shù)方案所述的一種檢測(cè)食醋中所含氨基酸的方法，其中，步驟(I)的具體過(guò)程為:吸取食醋試樣2mL進(jìn)行水蒸汽蒸餾，當(dāng)接收液到達(dá)ISOmL時(shí)，結(jié)束蒸餾，用超純水定容至IOmL，得到提取物。上述技術(shù)方案所述的一種檢測(cè)食醋中所含氨基酸的方法，其中，步驟(2)的具體過(guò)程為:取I 2mL步驟(I)的提取物放入固相萃取柱中，用15 20mL0.02%的甲酸溶液淋洗小柱，除去樣品中的糖醇化合物，棄掉洗滌液；用lOmLlmol/L氨水溶液洗脫小柱，整個(gè)固相萃取過(guò)程流速不超過(guò)lmL/min ;洗脫液于50°C下用氮?dú)獯蹈?，然后用去離子水溶解并稀釋?zhuān)玫焦╇x子色譜測(cè)定的凈化產(chǎn)物。上述技術(shù)方案所述的一種檢測(cè)食醋中所含氨基酸的方法，其中，步驟(3)的具體過(guò)程為:對(duì)步驟(2)得到的凈化產(chǎn)物離子色譜-電化學(xué)檢測(cè)器聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，得到食醋試樣中所含氨基酸的色譜圖；其中離子色譜條件為色譜柱=Amino PacPA-10 (2 X 250mm)；進(jìn)樣量:25 μ L ;分析時(shí)間:52min。上述技術(shù)方案所述的一種檢測(cè)食醋中所含氨基酸的方法，其中，所述步驟(3)中離子色譜的梯度淋洗液程序?yàn)?流動(dòng)相流速為0.25ml/min，A通道流動(dòng)相為去離子水，B通道流動(dòng)相為250mmol/L氫氧化鈉溶液，C通道流動(dòng)相為lmol/L乙酸鈉溶液；從O 6min，A通道流動(dòng)相比例占88 %，B通道流動(dòng)相比例占12 %，C通道流動(dòng)相比例占0，梯度曲線為5 ;從6min 12.1Omin, A通道流動(dòng)相比例從88%逐漸下降為68.0%，B通道流動(dòng)相比例從12%逐漸上升為32.0%，C通道流動(dòng)相比例占0，梯度曲線為5 ；12.10 16.0min, A通道流動(dòng)相比例占68%，B通道流動(dòng)相比例占32%，C通道流動(dòng)相比例占0，梯度曲線為8 ;從16.0Omin 24.0Omin, A通道流動(dòng)相比例從68%逐漸下降為36.0%，B通道流動(dòng)相比例從32%逐漸下降為24.0%，C通道流動(dòng)相比例逐漸上升為40%，梯度曲線為5 ;從24.00 39.00min,A通道流動(dòng)相比例占36 %，B通道流動(dòng)相比例占24%，C通道流動(dòng)相比例占40 %，梯度曲線為8 ;從39.00 39.1Omin, A通道流動(dòng)相比例從36%下降為20.0%，B通道流動(dòng)相比例從24.0%逐漸上升為80.0%，C通道流動(dòng)相比例占0，梯度曲線為5 ;從39.10 41.1Omin, A通道流動(dòng)相比例^ 20%, B通道流動(dòng)相比例^ 80%, C通道流動(dòng)相比例占0，梯度曲線為8;從41.10 41.20min, A通道流動(dòng)相比例從20%上升為88.0%，B通道流動(dòng)相比例從80.0%逐漸下降為12.0%，C通道流動(dòng)相比例占0，梯度曲線為5;從41.20 52.0min，A通道流動(dòng)相比例占88%，B通道流動(dòng)相比例占12%，C通道流動(dòng)相比例占0，梯度曲線為5。本發(fā)明具有以下有益效果:1、本發(fā)明首次將蒸餾法提取、強(qiáng)陽(yáng)離子固相萃取柱(SCX)進(jìn)行凈化與離子色譜-電化學(xué)檢測(cè)器相結(jié)合的方法，建立了高效、準(zhǔn)確、靈敏的檢測(cè)食醋中18種氨基酸的分析方法。2、與傳統(tǒng)的濃縮技術(shù)相比，本發(fā)明采用水蒸氣蒸餾法富集食醋中部分微量氨基酸并除去食醋待測(cè)樣品中的揮發(fā)酸，使得最終的檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確；而經(jīng)傳統(tǒng)的濃縮技術(shù)處理的樣品中仍然會(huì)有有大量的乙酸和糖類(lèi)物質(zhì)對(duì)氨基酸的結(jié)果產(chǎn)生干擾。3、本發(fā)明采用強(qiáng)陽(yáng)離子固相萃取柱凈化提取，有效提高食醋中氨基酸檢測(cè)方法的重現(xiàn)性、靈敏度和回收率；另外采用電化學(xué)檢測(cè)器-離子色譜，該方法靈敏度高，成本低，克服了以往分析方法中的諸多不足。4、本發(fā)明公開(kāi)的食醋中氨基酸的方法開(kāi)發(fā)和應(yīng)用，將有利于規(guī)范食醋企業(yè)生產(chǎn)、提高產(chǎn)品質(zhì)量安全，同時(shí)為鑒別釀造食醋、配制食醋及合成醋做了初步研究。因此，本發(fā)明對(duì)于促進(jìn)我國(guó)食醋行業(yè)發(fā)展和保護(hù)消費(fèi)者利益等方面具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。


:1、圖1為18種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖。2、圖2為食醋試樣中所含氨基酸的色譜圖。
具體實(shí)施方式
:為使本發(fā)明的技術(shù)方案便于理解，以下結(jié)合具體試驗(yàn)例對(duì)本發(fā)明的檢測(cè)方法作進(jìn)一步的說(shuō)明。實(shí)施例1:一種檢測(cè)食醋中所含氨基酸的方法，包括下述步驟:(I)、對(duì)市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)的食醋待測(cè)樣品用水蒸氣蒸餾提取，除去待測(cè)樣品中的揮發(fā)酸，并對(duì)氨基酸進(jìn)行了濃縮富集；具體步驟為:吸取食醋待測(cè)樣品2mL進(jìn)行水蒸汽蒸餾，當(dāng)接收液到達(dá)180ml時(shí)，結(jié)束蒸餾，用超純水定容至10mL，得到提取物；(2)、對(duì)步驟⑴的提取物用固相萃取柱進(jìn)行提取凈化，具體步驟為:取I 2mL步驟(I)的提取物放入固相萃取柱中，用15 20mL0.02%的甲酸溶液淋洗小柱，除去樣品中的糖醇化合物，棄掉洗滌液；用lOmLlmol/L氨水溶液洗脫小柱，整個(gè)固相萃取過(guò)程流速不超過(guò)lmL/min ;洗脫液于50°C下用氮?dú)獯蹈?，然后用去離子水溶解并稀釋至一定體積，得到供離子色譜測(cè)定的凈化產(chǎn)物；(3)、對(duì)步驟(2)的凈化產(chǎn)物用離子色譜-電化學(xué)檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，得到食醋試樣中所含氨基酸的色譜圖，具體步驟為:對(duì)步驟(2)得到的凈化產(chǎn)物離子色譜-電化學(xué)檢測(cè)器聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，其中離子色譜條件為色譜柱=Amino Pac PA-10 (2 X 250mm);進(jìn)樣量:25 μ L ;分析時(shí)間:52min ;所述離子色譜的梯度淋洗液程序如表I所示；得到食醋試樣中所含氨基酸的色譜圖，結(jié)果如圖2所示，圖2中在不同時(shí)間出現(xiàn)的1-14號(hào)波峰分別代表食醋待測(cè)樣品中所含有的14種不同的氨基酸；
表I 梯度淋洗液設(shè)定程序

權(quán)利要求
1.一種檢測(cè)食醋中所含氨基酸的方法，包括下述步驟: (1)、對(duì)食醋待測(cè)樣品用水蒸氣蒸餾提取，除去待測(cè)樣品中的揮發(fā)酸，并對(duì)氨基酸進(jìn)行了濃縮富集； (2)、對(duì)步驟(I)的提取物用固相萃取柱進(jìn)行提取凈化； (3)、對(duì)步驟(2)的凈化產(chǎn)物用離子色譜-電化學(xué)檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，經(jīng)過(guò)離子色譜分析后得到食醋試樣中所含氨基酸的色譜圖； (4)、配備18種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，經(jīng)過(guò)離子色譜分析后，得到18種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖，所述離子色譜分析的條件與步驟(3)中的離子色譜分析的條件相同； (5)、將步驟(3)和步驟(4)分別得到的色譜圖進(jìn)行對(duì)照，即得食醋試樣中所含有氨基酸的種類(lèi)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)食醋中所含氨基酸的方法，其特征在于，步驟(I)的具體過(guò)程為:吸取食醋試樣2mL進(jìn)行水蒸汽蒸餾，當(dāng)接收液到達(dá)180ml時(shí)，結(jié)束蒸餾，用超純水定容至10mL，得到提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)食醋中所含氨基酸的方法，其特征在于，步驟(2)的具體過(guò)程為:取I 2mL步驟(I)的提取物放入固相萃取柱中，用15 20mL0.02%的甲酸溶液淋洗小柱，除去樣品中的糖醇化合物，棄掉洗滌液；用lOmLlmol/L氨水溶液洗脫小柱，整個(gè)固相萃取過(guò)程流速不超過(guò)lmL/min ;洗脫液于50°C下用氮?dú)獯蹈?，然后用去離子水溶解并稀釋?zhuān)玫焦╇x子色譜測(cè)定的凈化產(chǎn)物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)食醋中所含氨基酸的方法，其特征在于，步驟(3)的具體過(guò)程為:對(duì)步驟(2)得到的 凈化產(chǎn)物離子色譜-電化學(xué)檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，得到食醋試樣中所含氨基酸的色譜圖；其中離子色譜條件為色譜柱=Amino Pac PA-1O (2 X 250mm);進(jìn)樣量:25μ L ;分析時(shí)間:52min。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種檢測(cè)食醋所含氨基酸的方法，其特征在于，所述步驟(3)中離子色譜的梯度淋洗液程序?yàn)?流動(dòng)相流速為0.25ml/min, A通道流動(dòng)相為去離子水，B通道流動(dòng)相為250mmol/L氫氧化鈉溶液，C通道流動(dòng)相為lmol/L乙酸鈉溶液；從0 6min，A通道流動(dòng)相比例占88%，B通道流動(dòng)相比例占12%，C通道流動(dòng)相比例占0，梯度曲線為.5 ;從6min 12.1Omin, A通道流動(dòng)相比例從88%逐漸下降為68.0%，B通道流動(dòng)相比例從12%逐漸上升為32.0%，C通道流動(dòng)相比例占0，梯度曲線為5 ；12.10 16.0min, A通道流動(dòng)相比例占68%，B通道流動(dòng)相比例占32%，C通道流動(dòng)相比例占0，梯度曲線為8 ;從.16.0Omin 24.0Omin, A通道流動(dòng)相比例從68%逐漸下降為36.0%，B通道流動(dòng)相比例從.32 %逐漸下降為24.0 %，C通道流動(dòng)相比例逐漸上升為40 %，梯度曲線為5 ;從24.00 .39.0Omin7A通道流動(dòng)相比例占36 %，B通道流動(dòng)相比例占24%，C通道流動(dòng)相比例占40 %，梯度曲線為8 ;從39.00 39.1Omin, A通道流動(dòng)相比例從36%下降為20.0%，B通道流動(dòng)相比例從24.0 %逐漸上升為80.0%，C通道流動(dòng)相比例占0，梯度曲線為5 ;從39.10 .41.1Omin, A通道流動(dòng)相比例^ 20%, B通道流動(dòng)相比例^ 80%, C通道流動(dòng)相比例占0，梯度曲線為8 ;從41.10 41.20min, A通道流動(dòng)相比例從20%上升為88.0%，B通道流動(dòng)相比例從80.0%逐漸下降為12.0%，C通道流動(dòng)相比例占0，梯度曲線為5 ;從41.20 .52.0min，A通道流動(dòng)相比例占88%，B通道流動(dòng)相比例占12%，C通道流動(dòng)相比例占0，梯度曲線為5。
全文摘要
本發(fā)明一種檢測(cè)食醋中所含氨基酸的方法，包括下述步驟(1)對(duì)食醋待測(cè)樣品用水蒸氣蒸餾提取；(2)對(duì)步驟(1)的提取物用固相萃取柱進(jìn)行提取凈化；(3)對(duì)步驟(2)的凈化產(chǎn)物用離子色譜-電化學(xué)檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，得到食醋試樣中所含氨基酸的色譜圖；(4)配備18種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，經(jīng)過(guò)離子色譜分析后，得到18種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖；(5)將步驟(3)和步驟(4)分別得到的色譜圖進(jìn)行對(duì)照，即得食醋試樣中所含有氨基酸的種類(lèi)。本發(fā)明具有將蒸餾法提取、強(qiáng)陽(yáng)離子固相萃取柱(SCX)進(jìn)行凈化與離子色譜-電化學(xué)檢測(cè)器相結(jié)合的方法，建立了高效、準(zhǔn)確、靈敏的檢測(cè)食醋中18種氨基酸的分析方法的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)G01N30/88GK103197022SQ20131014541
公開(kāi)日2013年7月10日 申請(qǐng)日期2013年4月25日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月25日
發(fā)明者梁寶愛(ài), 張素娟, 姚春孝, 武向勇, 劉玉玲, 孫麗萍, 賈策, 趙海霞 申請(qǐng)人:山西省食品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)研究所