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一種腫瘤標(biāo)志物的制作方法【專利摘要】本發(fā)明一方面提供了一種確定受試者是否患有癌癥或者具有罹患癌癥風(fēng)險(xiǎn)的方法，包括檢測該受試者的血液樣本中Hsp90α的濃度，如果該濃度達(dá)到或超過預(yù)先設(shè)定的閾值，則判定該受試者患有癌癥或者具有罹患癌癥的風(fēng)險(xiǎn)，其中所述閾值選自50ng/ml到120ng/ml的范圍內(nèi)，例如所述閾值可以為50、53、56、62、63、64、67、72、82、85或117ng/ml，且所述閾值±15％范圍內(nèi)的數(shù)值均被視為具有等同判定意義?！緦＠f明】一種腫瘤標(biāo)志物【
技術(shù)領(lǐng)域：
】[0001]本發(fā)明涉及肺癌、肝癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌等16種腫瘤的診斷、病情監(jiān)測和療效評價(jià)等。更具體地說，本發(fā)明涉及通過熱休克蛋白90α定量檢測輔助診斷肺癌、肝癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌等腫瘤和進(jìn)行病情監(jiān)測和療效評價(jià)的方法?！?br>背景技術(shù)：
】[0002]熱休克蛋白90a(HSp90a)是一個(gè)含量豐富的細(xì)胞內(nèi)伴侶蛋白。近年來研究顯示，Hsp90a可以被癌細(xì)胞特異性的分泌到細(xì)胞外，且與癌癥的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。本研究組已發(fā)現(xiàn)，分泌到胞外的Hsp90a可以在外周血中很方便的被定量檢測，其含量與腫瘤的負(fù)荷和惡性程度呈現(xiàn)一定的相關(guān)性，但并沒有任何數(shù)據(jù)能夠指導(dǎo)該項(xiàng)指標(biāo)在腫瘤臨床中的應(yīng)用。因此，如何將分泌型Hsp90a應(yīng)用于腫瘤臨床實(shí)踐是亟待解決的問題。【
發(fā)明內(nèi)容】[0003]本發(fā)明一方面提供了一種確定受試者是否患有癌癥或者具有罹患癌癥風(fēng)險(xiǎn)的方法，包括檢測該受試者的血液樣本中Hsp90a的濃度，如果該濃度達(dá)到或超過預(yù)先設(shè)定的閾值，則判定該受試者患有癌癥或者具有罹患癌癥的風(fēng)險(xiǎn)，其中所述閾值選自50ng/ml到120ng/ml的范圍內(nèi)，例如所述閾值可以為50、53、56、62、63、64、67、72、82、85或117ng/ml，且所述閾值±15%范圍內(nèi)的數(shù)值均被視為具有等同判定意義。[0004]本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，由于檢測方法的局限性，要做到濃度測定結(jié)果完全準(zhǔn)確是相當(dāng)困難的。根據(jù)本領(lǐng)域的慣常做法，上下偏差15%以內(nèi)可以被認(rèn)為是合理誤差。例如當(dāng)所述閾值選定為50ng/ml時(shí)，如果受試者的測量值為43ng/ml，也可以判定該受試者患有癌癥，或者具有較商的摧患癌癥的風(fēng)險(xiǎn)。[0005]在本發(fā)明中，所述血液樣本可以為血漿或血清樣本。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，血漿樣本是優(yōu)選的，其測量精度更高。[0006]所述Hsp90a的閾值可以為50、53、56、62、63、64、67、72、82、85或117叩/1111。例如，在本發(fā)明一個(gè)具體實(shí)施方案中，針對肺癌的特別優(yōu)選的閾值是67.47ng/ml(可以四舍五入取67ng/ml)，此時(shí)對應(yīng)的特異度為85%，靈敏度為64%。在上述閾值±15%的范圍內(nèi)的數(shù)值均可視為等同的判定范圍。[0007]在本發(fā)明一個(gè)具體實(shí)施方案中，針對肺癌的一個(gè)優(yōu)選的閾值是82ng/ml，即Hsp90a的濃度為〇-82ng/ml時(shí)被認(rèn)為是正常值范圍；在本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，針對肺癌的一個(gè)特別優(yōu)選的閾值是53ng/ml，即Hsp90a的濃度為〇-53ng/ml時(shí)被認(rèn)為是正常值范圍。同樣的，在上述閾值±15%的范圍內(nèi)的數(shù)值均可視為具有等同判定意義。所述血液樣本優(yōu)選為血漿樣本。[0008]本發(fā)明另一方面提供了一種用于對正在接受治療的癌癥患者進(jìn)行病情監(jiān)測和/或療效評價(jià)或者用于對候選治療藥物進(jìn)行療效評價(jià)的方法，包括在治療前及治療后分別檢測受試者的血液樣本中Hsp90a的濃度，如果治療后Hsp90a的濃度相對于治療前Hsp90a濃度增加的百分比達(dá)到或超過預(yù)先設(shè)定的閾值，則判定該受試者病情進(jìn)展和/或療效較差，或者判定所述候選治療藥物療效較差，其中所述閾值選自10%到50%的范圍內(nèi)，例如所述閾值可以為34%，且所述閾值±15%范圍內(nèi)的數(shù)值均被視為具有等同判定意義；優(yōu)選地,所述血液樣本為血漿樣本。[0009]此處所用的術(shù)語"治療"應(yīng)當(dāng)做廣義的理解。例如，在對肺癌患者進(jìn)行治療時(shí)，可能涉及多個(gè)治療周期，例如總共8個(gè)治療周期。如果將整個(gè)治療過程作為一個(gè)整體來看，可以在第1個(gè)治療周期開始前和第8個(gè)治療周期結(jié)束后，分別對Hsp90α的濃度進(jìn)行檢測，并據(jù)此判斷整個(gè)治療過程的效果?；蛘撸部梢詫⒚總€(gè)治療周期視為一次"治療"（例如出于獲得更精確評估結(jié)果的目的）。例如，可以在每個(gè)治療周期開始前和結(jié)束后，均對Hsp90α的濃度進(jìn)行檢測，并據(jù)此判斷單個(gè)治療周期的效果?；蛘撸€可以進(jìn)行更精確的評估。例如，在單個(gè)治療周期包括總共20天治療的情況下，可以將每一天視為一次"治療"，在當(dāng)天的治療開始前和當(dāng)天的治療結(jié)束后，分別對Hsp90α的濃度進(jìn)行檢測，從而判斷當(dāng)天的治療效果。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)不同的評估要求，具體設(shè)定"治療"的時(shí)間跨度。[0010]本發(fā)明還提供了確定受試者是否患有癌癥或者具有罹患癌癥風(fēng)險(xiǎn)的方法，包括聯(lián)合檢測該受試者的血液樣本中Hsp90a的濃度以及至少一種其他腫瘤標(biāo)志物的濃度，如果Hsp90a的濃度和所述至少一種其他腫瘤標(biāo)志物的濃度達(dá)到或超過預(yù)先設(shè)定的閾值，則判定該受試者患有癌癥或者具有罹患癌癥的風(fēng)險(xiǎn)，其中Hsp90a的閾值選自50ng/ml到120ng/ml的范圍內(nèi)，例如所述閾值可以為50、53、56、62、63、64、67、72、82、85或117ng/ml，且所述閾值±15%范圍內(nèi)的數(shù)值均被視為具有等同判定意義。所述血液樣本優(yōu)選為血漿樣本，所述至少一種其他腫瘤標(biāo)志物優(yōu)選選自由癌胚抗原（CEA)、細(xì)胞角蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)、AFP、CA19-9、CA125、CA15-3、PSA和CA72-4構(gòu)成的組。[0011]根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，本發(fā)明方法中Hsp90a的濃度優(yōu)選地采用EDTA-K2作為抗凝劑進(jìn)行檢測。[0012]本發(fā)明的方法適用的癌癥種類包括：肺癌、肝癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌、卵巢癌、淋巴瘤、食管癌、黑色素瘤、腎癌、子宮癌、鼻咽癌、骨肉瘤、膀胱癌和前列腺癌。[0013]本發(fā)明還提供了用于確定受試者是否患有癌癥或者具有罹患癌癥風(fēng)險(xiǎn)的試劑盒，包括：任選的人分泌型Hsp90a、人分泌型Hsp90a單克隆抗體、檢測試劑以及說明書，其中所述說明書中標(biāo)明了健康人血液樣本中Hsp90a濃度的閾值，如果受試者的血液樣本中Hsp90a的濃度達(dá)到或超過所述閾值，則判定該受試者患有癌癥或者具有罹患癌癥的風(fēng)險(xiǎn)，其中所述閾值選自50叫/1111到1201^/1111的范圍，例如所述閾值可以為50、53、56、62、63、64、67、72、82、85或117叩/1111，且所述閾值±15%范圍內(nèi)的數(shù)值均被視為具有等同判定意義；優(yōu)選地,所述血液樣本為血漿樣本。[0014]此處所用的術(shù)語"任選的"表示可以有，也可以沒有。例如，"任選的人分泌型Hsp90a"，是指本發(fā)明的試劑盒可以包括人分泌型Hsp90a，也可以不包括人分泌型Hsp90a。例如，可以將人分泌型Hsp90a單獨(dú)包裝，并與試劑盒的主體部分聯(lián)合使用。優(yōu)選地，出于方便使用的目的，本發(fā)明的試劑盒中包括人分泌型Hsp90a，用作檢測時(shí)的標(biāo)準(zhǔn)品。特別優(yōu)選的是重組人分泌型Hsp90a。[0015]根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，所述試劑盒中可以包括用于采集血液樣本的容器，并且該容器中包含EDTA-K2。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述用于采集血液樣本的容器為包含EDTA-K2的采血管。[0016]根據(jù)在本發(fā)明的具體實(shí)施方案，Hsp90α的濃度采用EDTA-K2作為抗凝劑進(jìn)行檢測是優(yōu)選的。[0017]本發(fā)明的試劑盒適用的癌癥種類包括：肺癌、肝癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌、卵巢癌、淋巴瘤、食管癌、黑色素瘤、腎癌、子宮癌、鼻咽癌、骨肉瘤、膀胱癌和前列腺癌。[0018]本發(fā)明的實(shí)施例中還將Hsp90a定量檢測在癌癥輔助診斷和療效監(jiān)測中的有效性研究方法應(yīng)用于多種癌癥，發(fā)現(xiàn)Hsp90a濃度在癌癥診斷中的閾值范圍對肺癌、肝癌、結(jié)直腸癌和乳腺癌等同樣適用，并提供了腫瘤標(biāo)志物Hsp90a定量檢測用于肺癌、肝癌、結(jié)直腸癌和乳腺癌診斷的具體統(tǒng)計(jì)學(xué)參數(shù)。[0019]本發(fā)明的實(shí)施例中根據(jù)不同人群的數(shù)據(jù)繪制相應(yīng)的R0C曲線。根據(jù)本領(lǐng)域公知技術(shù)，每一條R0C曲線都提供了一系列閾值及與之相對應(yīng)的靈敏度和特異度。因此，使用這些R0C曲線，本領(lǐng)域技術(shù)人員能很容易地查出選取任意閾值（即cut-off值）時(shí)該項(xiàng)檢測對疾病的識別能力，即診斷相應(yīng)癌種的靈敏度、特異度和符合率。例如：[0020]當(dāng)適應(yīng)癥為肝癌時(shí)，患者相對于健康人的cut-off值是52.79ng/ml時(shí)，靈敏度、特異度和符合率分別是93.7%，85%和94.5%，當(dāng)cut-off值是62.20ng/ml時(shí)，靈敏度、特異度和符合率分別是91.4%，90%和92.2%;患者相對于非癌癥肝部相關(guān)疾病的cut-off值是63.66ng/ml時(shí)，靈敏度、特異度和符合率分別是90.7%，90%和90.3%，當(dāng)cut-off值是85.24ng/ml時(shí)，靈敏度、特異度和符合率分別是80.7%，95%和88.6%。[0021]當(dāng)適應(yīng)癥是結(jié)直腸癌時(shí)，患者相對于健康人及非癌癥結(jié)直腸相關(guān)疾病組的cut-off值是52.79ng/ml時(shí)，靈敏度、特異度和符合率分別是89.9%，85%和87%，當(dāng)cut-off值是62.20ng/ml時(shí)，靈敏度、特異度和符合率分別是83.4%，90%和87%。[0022]當(dāng)適應(yīng)癥為乳腺癌時(shí)，患者相對于健康人的cut-off值是52.66ng/ml時(shí)，靈敏度、特異度和符合率分別是65.6%，85%和73.85%，當(dāng)cut-off值是61.92ng/ml時(shí)，靈敏度、特異度和符合率分別是54.6%，90%和69.68%;患者相對于非癌癥乳腺相關(guān)疾病組的cut-off值是63.4lng/ml時(shí)，靈敏度、特異度和符合率分別是52.4%，84.9%和68.29%，當(dāng)cut-off值是72.21ng/ml時(shí)，靈敏度、特異度和符合率分別是41.9%，90.1%和65.41%。[0023]本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，由于受試人群和瘤種的不同，cut-off值的選取及其對應(yīng)的靈敏度、特異度和符合率等參數(shù)會(huì)有所差別，但均包含在本發(fā)明限定的閾值范圍內(nèi)。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)實(shí)際使用需求，如對特定瘤種、靈敏度、特異度等的要求，從本發(fā)明公開的R0C曲線或閾值范圍內(nèi)選取適當(dāng)?shù)膬?yōu)選閾值。[0024]本發(fā)明還驗(yàn)證了肺癌、肝癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌患者手術(shù)后血漿Hsp90a含量比手術(shù)前顯著降低，因此該項(xiàng)檢測指標(biāo)可以作為手術(shù)治療效果評價(jià)的手段。同時(shí)，臨床獲益的(CR+PR+SD)接受內(nèi)科治療的患者，在治療后的檢測值顯著低于治療前，說明該項(xiàng)指標(biāo)可以用于上述癌癥的內(nèi)科治療療效評價(jià)。[0025]本發(fā)明的實(shí)施例中檢測了胃癌、胰腺癌、卵巢癌、淋巴瘤、食管癌、黑色素瘤、腎癌、子宮癌、鼻咽癌、骨肉瘤、膀胱癌、前列腺癌等多種癌癥患者血漿Hsp90a含量，發(fā)現(xiàn)與健康人相比均顯著升高（具有統(tǒng)計(jì)顯著性），并分別提供了上述不同癌種患者血漿Hsp90a含量的平均參考值。這說明腫瘤標(biāo)志物Hsp90a可用于胃癌、胰腺癌、卵巢癌、淋巴瘤、食管癌、黑色素瘤、腎癌、子宮癌、鼻咽癌、骨肉瘤、膀胱癌、前列腺癌等多癌癥的診斷?！緦＠綀D】【附圖說明】[0026]圖1是Hsp90α檢測結(jié)果的ROC曲線（基于所有檢測Hsp90α的受試者）。[0027]圖2是Hsp90α檢測結(jié)果的R0C曲線AUC95%CI(0·788,0·829)。[0028]圖3是Hsp90α檢測結(jié)果的R0C曲線AUC95%CI(0·811，0·854)。[0029]圖4是Hsp90α檢測結(jié)果的R0C曲線AUC95%CI(0·804,0·850)。[0030]圖5是Hsp90α檢測結(jié)果的R0C曲線AUC95%CI(0·731，0·777)。[0031]圖6是根據(jù)斜率判定腫瘤增大的R0C曲線。[0032]圖7是根據(jù)變化百分比判定ro的R0C曲線。[0033]圖8是根據(jù)變化值判定ro的R0C曲線。[0034]圖9顯示了EDTA-K2采血管樣本和EDTA-K3采血管樣本的對比。[0035]圖10是肝癌患者相對于健康人的R0C曲線。[0036]圖11是肝癌患者相對于非癌肝部相關(guān)疾病人群的R0C曲線。[0037]圖12是結(jié)直腸癌患者相對于健康人及非癌結(jié)直腸相關(guān)疾病的R0C曲線。[0038]圖13是乳腺癌患者相對于健康人的R0C曲線。[0039]圖14是乳腺癌患者相對于非癌乳腺相關(guān)疾病人群的R0C曲線。[0040]圖15是多種癌癥患者血漿Hsp9〇a含量檢測結(jié)果匯總。[0041]圖中，"ROCCurveforModel"表不針對模型的R0C曲線，"AreaundertheCurve"表示曲線下面積，"Specificity"表示特異度，"Sensitivity"表示靈敏度?！揪唧w實(shí)施方式】[0042]本文所用的術(shù)語"血液樣本"是指由受試者的血液獲得的樣本?？紤]到細(xì)胞內(nèi)Hsp90a對檢測的干擾，血液樣本優(yōu)選為血漿或血清樣本，也可以是由血漿或血清稀釋后的樣本。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，由于在成分上的區(qū)別，當(dāng)采用受試者的血漿樣本和血清樣本分別進(jìn)行檢測時(shí)，Hsp90a的濃度可能會(huì)略有不同。出于便于定量和比較的目的，在本發(fā)明中血漿樣本是優(yōu)選的。[0043]本文所用的術(shù)語"特異度"、"靈敏度"、"符合率"均與相對應(yīng)的醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)術(shù)語具有相同的含義。[0044]"特異度"（specificity)是指診斷為"非癌癥"的病例中經(jīng)試劑盒檢測為陰性的比例。[0045]"靈敏度"（sensitivity)是指病理學(xué)診斷為"癌癥"的病例中，經(jīng)試劑盒檢測為陽性的比例。[0046]"符合率"(accuracy)是指真陽性樣本量與真陰性樣本量之和占總樣本量的比例，反映試劑盒檢測結(jié)果與受試者是否罹患癌癥的真實(shí)情況相符合的程度。[0047]本文所用的術(shù)語"cut-off值"、"界值""參考值"和"閾值"可以互換使用，指的是用來判斷檢測結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)，即臨界值，檢測結(jié)果高于cut-off值即視為陽性，低于cut-off值即視為陰性。[0048]本文所用的術(shù)語"臨床獲益"，指經(jīng)過某種治療達(dá)到病情穩(wěn)定或緩解的情況，其中CR、PR和SD具有與實(shí)體瘤療效評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)（RECIST標(biāo)準(zhǔn)）中相應(yīng)術(shù)語完全相同的含義，即CR(Completeresponse)腫瘤完全緩解、PR(Partialresponse)腫瘤部分緩解和SD(Stabledisease)疾病穩(wěn)定。CR、PR和SD這三項(xiàng)指標(biāo)作為臨床獲益人群的界定，與此相反的是H)(Progressivedisease)即疾病進(jìn)展。[0049]本文所用術(shù)語"非癌相關(guān)疾病"指經(jīng)病理學(xué)診斷確診為不是癌癥但患有良性相關(guān)疾病的患者，如在肺癌試驗(yàn)中指確診為不是肺癌但患有肺炎、肺結(jié)核等肺部良性相關(guān)疾病的患者，在肝癌試驗(yàn)中指確診為不是肝癌但患有肝炎、肝硬化等肝部良性相關(guān)疾病的患者，在結(jié)直腸癌試驗(yàn)中指確診為不是結(jié)直腸癌但患有炎癥、結(jié)直腸息肉等結(jié)直腸良性相關(guān)疾病的患者，在乳腺癌試驗(yàn)中指確診為不是肺、乳腺癌癌但患有乳腺炎、乳腺增生等乳腺良性相關(guān)疾病的患者。[0050]本文中所用的部分縮寫及統(tǒng)計(jì)術(shù)語含義如下表所示：【權(quán)利要求】1.確定受試者是否患有癌癥或者具有罹患癌癥風(fēng)險(xiǎn)的方法，包括檢測該受試者的血液樣本中Hsp90α的濃度，如果該濃度達(dá)到或超過預(yù)先設(shè)定的閾值，則判定該受試者患有癌癥或者具有罹患癌癥的風(fēng)險(xiǎn)，其中所述閾值選自50ng/ml到120ng/ml的范圍內(nèi)，例如所述閾值可以為50、53、56、62、63、64、67、72、82、85或117叩/1111，且所述閾值±15%范圍內(nèi)的數(shù)值均被視為具有等同判定意義；優(yōu)選地，所述血液樣本為血漿樣本。2.用于對正在接受治療的癌癥患者進(jìn)行病情監(jiān)測和/或療效評價(jià)或者用于對候選治療藥物進(jìn)行療效評價(jià)的方法，包括在治療前及治療后分別檢測受試者的血液樣本中Hsp90a的濃度，如果治療后Hsp90a的濃度相對于治療前Hsp90a濃度增加的百分比達(dá)到或超過預(yù)先設(shè)定的閾值，則判定該受試者病情進(jìn)展和/或療效較差，或者判定所述候選治療藥物療效較差，其中所述閾值選自10%到50%的范圍內(nèi)，例如所述閾值可以為34%，且所述閾值±15%范圍內(nèi)的數(shù)值均被視為具有等同判定意義；優(yōu)選地，所述血液樣本為血漿樣本。3.確定受試者是否患有癌癥或者具有罹患癌癥風(fēng)險(xiǎn)的方法，包括聯(lián)合檢測該受試者的血液樣本中Hsp90a的濃度以及至少一種其他腫瘤標(biāo)志物的濃度，如果Hsp90a的濃度和所述至少一種其他腫瘤標(biāo)志物的濃度達(dá)到或超過預(yù)先設(shè)定的閾值，則判定該受試者患有癌癥或者具有罹患癌癥的風(fēng)險(xiǎn)，其中Hsp90a的閾值選自50ng/ml到120ng/ml的范圍內(nèi)，例如所述閾值可以為50、53、56、62、63、64、67、72、82、85或117叩/1111，且所述閾值±15%范圍內(nèi)的數(shù)值均被視為具有等同判定意義；優(yōu)選地，所述血液樣本為血漿樣本。4.權(quán)利要求1-3之任一項(xiàng)的方法，其中所述癌癥選自由肺癌、肝癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌、卵巢癌、淋巴瘤、食管癌、黑色素瘤、腎癌、子宮癌、鼻咽癌、骨肉瘤、膀胱癌和前列腺癌構(gòu)成的組。5.權(quán)利要求3-4之任一項(xiàng)的方法，其中所述至少一種其他腫瘤標(biāo)志物選自由CEA、CYFRA21-1、AFP、CA19-9、CA125、CA15-3、PSA和CA72-4構(gòu)成的組。6.權(quán)利要求1-5之任一項(xiàng)的方法，其中所述Hsp90a的濃度采用EDTA-K2作為抗凝劑進(jìn)行檢測。7.用于確定受試者是否患有癌癥或者具有罹患癌癥風(fēng)險(xiǎn)的試劑盒，包括：任選的人分泌型Hsp90a、人分泌型Hsp90a單克隆抗體、檢測試劑以及說明書，其中所述說明書中標(biāo)明了健康人血液樣本中Hsp90a濃度的閾值，如果受試者的血液樣本中Hsp90a的濃度達(dá)到或超過所述閾值，則判定該受試者患有癌癥或者具有罹患癌癥的風(fēng)險(xiǎn)，其中所述閾值選自50叩/1111到1201^/1111的范圍，例如所述閾值可以為50、53、56、62、63、64、67、72、82、85或117ng/ml，且所述閾值±15%范圍內(nèi)的數(shù)值均被視為具有等同判定意義；優(yōu)選地，所述血液樣本為血漿樣本。8.權(quán)利要求7的試劑盒，其中所述癌癥選自由肺癌、肝癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌、卵巢癌、淋巴瘤、食管癌、黑色素瘤、腎癌、子宮癌、鼻咽癌、骨肉瘤、膀胱癌和前列腺癌構(gòu)成的組。9.權(quán)利要求7-8之任一項(xiàng)的試劑盒，其中所述試劑盒中包括用于采集血液樣本的容器，并且該容器中包含EDTA-K2、EDTA-K3或肝素；優(yōu)選地，所述容器為包含EDTA-K2的采血管。10.權(quán)利要求7-9之任一項(xiàng)的試劑盒，其中所述Hsp90a的濃度采用EDTA-K2作為抗凝劑進(jìn)行檢測。11.EDTA-K2作為抗凝劑在收集用于Hsp90α腫瘤標(biāo)志物檢測的血液樣本中的用途?！疚臋n編號】G01N33/574GK104251906SQ201410302717【公開日】2014年12月31日申請日期:2014年6月27日優(yōu)先權(quán)日:2013年6月27日【發(fā)明者】羅永章,崔大偉,付彥,吳非,宋曉敏,李米川,常國棟,路春桃申請人:清華大學(xué),煙臺普羅吉生物科技發(fā)展有限公司,北京普羅吉生物科技發(fā)展有限公司