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喘可治注射液中淫羊藿苷及朝藿定c含量的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了喘可治注射液中淫羊藿苷及朝藿定C含量測定方法，可同時檢測喘可治注射液中淫羊藿苷及朝藿定C含量。本方法使用同一流動相系統(tǒng)，即可一次性完成喘可治注射液中淫羊藿苷及朝藿定C含量的檢測，不僅能夠快速、簡便的獲知該產(chǎn)品的質(zhì)量情況，還解決了現(xiàn)有技術(shù)中使用的喘可治注射液的現(xiàn)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)【含量測定】項下“淫羊藿苷”的檢測方法以及含量限度不合理導(dǎo)致喘可治注射液的淫羊藿苷的含量不合格的問題。
【專利說明】喘可治注射液中淫羊藿苷及朝藿定C含量的檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉屬于藥品質(zhì)量控制【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地說涉及一種喘可治注射液中淫羊藿苷及朝藿定C含量檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]喘可治注射液，主要成分為淫羊藿和巴戟天，具有溫陽補腎，平喘止咳，有抗過敏、增強體液免疫與細(xì)胞免疫的功能，主治哮證屬腎虛挾痰證，癥見喘促日久，反復(fù)發(fā)作，面色蒼白，腰酸肢軟，畏寒，汗多；發(fā)時喘促氣短，動則加重，喉有痰鳴，咳嗽，痰白清稀不暢；以及支氣管炎、哮喘急性發(fā)作期間見上述癥侯者，為淡黃色澄明液體。
[0003]喘可治注射液早在1999年6月就批準(zhǔn)生產(chǎn)，由于當(dāng)時研究、儀器設(shè)備水平較落后，以及其主要成分-淫羊藿藥材的成份較為復(fù)雜，僅當(dāng)時公開報道的成份就有數(shù)十種，因此導(dǎo)致對于喘可治注射液淫羊藿峰群的研究并不徹底，使得在當(dāng)時的報道中通常將淫羊藿苷作為淫羊藿藥材提取物中的主要有效成分?！吨袊幍洹分蠽ol 12005.267部分記載了以淫羊藿苷作為淫羊藿的特征性成分并規(guī)定了其含量測定的方法，因此現(xiàn)有技術(shù)中一直以淫羊藿苷峰群(該淫羊藿苷峰群中包括淫羊藿苷、朝藿定C)代表淫羊藿苷作為檢測喘可治注射液的含量測定及質(zhì)量鑒定的標(biāo)準(zhǔn)。
[0004]但是，隨著色譜技術(shù)的發(fā)展以及國內(nèi)研究人員對淫羊藿藥材的深入研究發(fā)現(xiàn)，在用于制備喘可治注射液的淫羊藿中藥材一箭葉淫羊藿中，淫羊藿苷并不是其含量最高的成份，朝藿定C的含量要遠(yuǎn)高于其他成份。由此測得喘可治注射液中的朝藿定C的含量要遠(yuǎn)高于淫羊藿苷，并且諸多相關(guān)文獻資料及多批樣品的測定結(jié)果均證明了這一結(jié)論。這即導(dǎo)致現(xiàn)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)中僅以淫羊藿苷來計算含量限度的標(biāo)準(zhǔn)顯得并不合理，喘可治注射液應(yīng)以朝藿定C和淫羊藿苷之和來計算。更重要的是，按現(xiàn)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)【含量測定】項下對“淫羊藿苷”的檢測方法進行測定，并不能將朝藿定C和淫羊藿苷的主峰進行區(qū)分，導(dǎo)致測定含量實際是兩者的重疊峰之和，無法準(zhǔn)確評價喘可治注射液的有效成分含量情況，使得對其質(zhì)量的控制存在標(biāo)準(zhǔn)不一的問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為此，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)中對喘可治注射液的檢測方法無法準(zhǔn)確評定其質(zhì)量的問題，進而提供一種可準(zhǔn)確測定喘可治注射液中淫羊藿苷及朝藿定C含量的檢測方法，進而全面、準(zhǔn)確的控制喘可治注射液的質(zhì)量。
[0006]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的提供了一種喘可治注射液中淫羊藿苷及朝藿定C的含量檢測方法，包括如下步驟:
[0007] 對照品溶液的制備:分別精密稱取朝藿定C、淫羊藿苷對照品適量，加入甲醇溶解分別制成每1ml含0.8mg、0.02mg的溶液，作為對照品儲備液；精密吸取所述對照品儲備液各1ml，并分別加入由體積比為50-60:50-40的甲醇_1_2%乙酸混合液稀釋，并定容至1ml,即得；[0008]供試品溶液的制備:精密吸取所述喘可治注射液lml，并分別加入由體積比為50-60:50-40的甲醇-1-2%乙酸混合液稀釋定容至10mL，即得；
[0009]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:照高效液相色譜法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以體積濃度1-2%的乙酸為流動相B按照如下程序進行梯度洗脫:O-1min,流動相A:流動相B為27%:73%— 30%:70%；l-4min,流動相A:流動相B為30%:70%— 20%:80%;4-6min，流動相 A:流動相 B 為 20%:80%— 27%:73% ;6_20min，流動相A:流動相 B 為 27%:73%^ 27%:73%;20-30min，流動相 A:流動相 B 為 27%:73%^ 80%:20% ;控制流動相流速為0.8-1.2ml/min ;控制柱溫25_35°C ;檢測波長為268_270nm ;理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計算應(yīng)不低于5000 ；
[0010]測定法:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μ 1，注入液相色譜儀，測定并計算。
[0011]所述的含量檢測方法，包括如下步驟:
[0012]對照品溶液的制備:分別精密稱取朝藿定C、淫羊藿苷對照品適量，加入甲醇溶解分別制成每1ml含0.8mg、0.02mg的溶液，作為對照品儲備液；精密吸取所述對照品儲備液各1ml，并分別加入由體積比為55:45的甲醇-1.5%乙酸混合液稀釋，并定容至10ml，SP得;
[0013]供試品溶液的制備:精密吸取所述喘可治注射液lml，并分別加入由體積比為55:45的甲醇-1.5%乙酸混合液稀釋定容至1mL,即得；
[0014]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:照高效液相色譜法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以體積濃度1.5%的乙酸為流動相B進行梯度洗脫，控制流動相流速為lml/min ;控制柱溫30°C ;檢測波長為270nm ;理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計算應(yīng)不低于5000 ；
[0015]測定法:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μ 1，注入液相色譜儀，測定并計算。
[0016]所述的含量檢測方法，在所述對照品溶液、供試品溶液制備步驟中，還包括將定容后的溶液采用0.45 μ m微孔濾膜濾過的步驟。
[0017]所述的含量檢測方法，在所述對照品溶液制備步驟中，還包括將所述朝藿定C、淫羊藿苷對照品經(jīng)五氧化二磷減壓干燥12_16h的步驟。
[0018]所述的含量檢測方法，所述喘可治注射液的原料藥組成為:巴戟天5-50重量份，淫羊藿30-120重量份。
[0019] 所述的含量檢測方法，所述喘可治注射液的制備方法為:按照選定重量份數(shù)取巴戟天、淫羊藿進行前處理工序，從眾多的雜亂藥材中揀選上好的藥材，而后用水多次清洗，除去沙土、泥垢，將淫羊藿切成Icm左右小段、60°C以下干燥；巴戟天60°C以下干燥后，粉碎成20目粗粉；然后用此凈原料進行第二提取工序，巴戟天凈原料依次用8、7、6倍量水分別提取1.5、1、1小時，提取液濃縮成50°C下相對密度至1.2時，加入乙醇使含醇量達60%，回收乙醇,濃縮至相對密度為1.1時,分次上聚酰胺柱吸附,用水和一種30%大極性溶劑洗脫，洗脫液混合回收烘干，再粉碎洗脫，濃縮過濾烘干，用溶媒溶解析出結(jié)晶，在80°C以下真空干燥，得巴戟天提取物；淫羊藿凈原料依次用15、10、10倍量水分別提取1.5、1、1小時，提取液濃縮成50°C下相對密度至1.2時，加入乙醇使含醇量達70%，回收乙醇，濃縮至相對密度為1.1時，分次上聚酰胺柱吸附，用水和一種35%大極性溶劑洗脫，洗脫液混合回收烘干，再粉碎洗脫，濃縮過濾烘干，用溶媒溶解析出結(jié)晶，在80°C以下真空干燥，得淫羊藿提取物；提取物用水配制成溶液，濾棒粗濾、再用濾球和0.45濾膜過濾、灌封、115°C 30分鐘滅菌、用色水撿漏、燈檢、印字、然后包裝入庫；其中安瓿處理提前備好:用純水粗洗、注射用水精洗、最后滅菌干燥，用于灌封，即得。
[0020]本發(fā)明提供了一種所述的含量檢測方法在喘可治注射液質(zhì)量檢測及控制領(lǐng)域的應(yīng)用。
[0021]本發(fā)明提供了一種所述的含量檢測方法在淫羊藿藥材質(zhì)量檢測及控制領(lǐng)域的應(yīng)用。
[0022]本發(fā)明所述的喘可治注射液中淫羊藿苷及朝藿定C含量測定方法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以體積濃度1-2%乙酸為流動相B，流速為
0.8-1.2ml/min進行梯度洗脫檢測喘可治注射液中淫羊藿苷及朝藿定C含量，本方法使用同一流動相系統(tǒng)，即可一次性完成喘可治注射液中淫羊藿苷及朝藿定C的含量測定，能夠快速、簡便的獲知該產(chǎn)品的質(zhì)量情況，解決了現(xiàn)有技術(shù)中喘可治注射液所使用的現(xiàn)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)【含量測定】項下“淫羊藿苷”的檢測方法以及含量限度不合理導(dǎo)致喘可治注射液的淫羊藿苷的含量測定不合格的問題，并且本發(fā)明實驗例中對該含量測定方法進行了完善的方法學(xué)驗證，試驗結(jié)果證明，本發(fā)明的方法可用來測定喘可治注射液的含量，其測定得到喘可治注射液朝藿定C的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于淫羊藿苷的含量，該測定結(jié)果與現(xiàn)有技術(shù)中相關(guān)文獻資料報道的結(jié)果基本一致，本發(fā)明的方法可以替代喘可治注射液的執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)【含量測定】項下“淫羊藿苷”的檢測方法。 [0023]實驗例
[0024]本發(fā)明通過下述實驗例證明本發(fā)明所述方案的技術(shù)效果。
[0025]1.試驗材料與方法
[0026]1.1試驗儀器及試劑:
[0027]儀器:HP1050Series高效液相色譜儀，Agilent LC/MS Systems 工作站，HP79855AAutosampler 自動進樣器；
[0028]試劑:乙腈、甲醇、乙酸、磷酸，均為色譜純；
[0029]喘可治注射液樣品:廣州萬正藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號為20090904、20091101、20091102、20100102、20100103、20100104、20100302、20100303、20100304 ；
[0030]淫羊藿苷對照品、朝藿定C對照品:購于中國食品藥品檢定研究院；
[0031]淫羊藿提取物:按照實施例1方法制得，批號為20090501、20090801、20091101。
[0032]1.2試驗方法:
[0033]對照品溶液的制備:分別精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥12h的朝藿定C、淫羊藿苷對照品適量，加入甲醇溶解分別制成每1ml含0.8mg、0.02mg的溶液，作為對照品儲備液，精密吸取所述對照品儲備液各1ml，分別置于1ml量瓶中，隨后各加入體積比為55:45的甲醇-體積濃度1.5%乙酸的混合液稀釋定容至刻度，搖勻，經(jīng)0.45 μ m微孔濾膜濾過，即得；
[0034]陰性對照品溶液:不含淫羊藿提取物，其它與喘可治注射液相同，由廣州萬正藥業(yè)有限公司提供；
[0035]供試品溶液的制備:精密吸取喘可治注射液1ml，置1ml量瓶中，加入體積比為55:45的甲醇-體積濃度1.5%乙酸的混合液稀釋定容至刻度，搖勻，經(jīng)0.45 μ m微孔濾膜濾過，即得；
[0036]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:照高效液相色譜法測定，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動相A，以體積濃度1.5%乙酸為流動相B，流速為1.0ml/min進行梯度洗脫；柱溫:30°C ;檢測波長為270nm ;理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計算應(yīng)不低于5000 ；
[0037]所述梯度洗脫程序具體為:0-lmin，流動相A:流動相B為27%:73%—30%:70%;l-4min,流動相A:流動相B為30%:70%^ 20%:80%;4_6min,流動相A:流動相B為20%:80%^ 27%:73% ;6-20min，流動相 A:流動相 B 為 27%:73%^ 27%:73% ;20_30min，流動相 A:流動相 B 為 27%:73% — 80%:20% ;
[0038]測定法:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μ 1，注入液相色譜儀，測定，計算，即得；
[0039]所述喘可治注射液為每1ml含朝藿定C C39H50O19和淫羊藿苷C33H4tlO15,按淫羊藿苷C33H40O15 計，總和不得少于 0.48mg, Img C39H50O19 相當(dāng)于 0.8224mg C33H40O150
[0040]2方法學(xué)驗證:
[0041]2.1陰性干擾試驗:
[0042]精密吸取陰性對照品溶液，按1.2項的試驗方法中制備的朝藿定C對照品儲備液、按1.2的試驗方法中制備淫羊藿苷對照品儲備液各1ml，置1ml量瓶中，加甲醇:體積濃度1.5%乙酸=55:45的混合液稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取20 μ 1，按1.2的試驗方法中的色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗測定，考察陰性對照液是否對主成分峰存在檢測干擾。試驗結(jié)果見下表1，色譜圖見附圖1。
[0043]表1陰性干擾試驗結(jié)果
[0044]
【權(quán)利要求】
1.一種喘可治注射液中淫羊藿苷及朝藿定C的含量檢測方法，其特征在于，包括如下步驟: 對照品溶液的制備:分別精密稱取朝藿定C、淫羊藿苷對照品適量，加入甲醇溶解分別制成每Irnl含0.8mg、0.02mg的溶液，作為對照品儲備液；精密吸取所述對照品儲備液各lml，并分別加入由體積比為50-60:50-40的甲醇_1_2%乙酸混合液稀釋，并定容至10ml，即得； 供試品溶液的制備:精密吸取所述喘可治注射液1ml，并分別加入由體積比為50-60:50-40的甲醇-1-2%乙酸混合液稀釋定容至10mL，即得； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:照高效液相色譜法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑 ;以乙腈為流動相A，以體積濃度1-2%的乙酸為流動相B按照如下程序進行梯度洗脫:O-1min,流動相A:流動相B為27%:73%— 30%:70%；l-4min,流動相A:流動相B為30%:70%— 20%:80%;4-6min，流動相 A:流動相 B 為 20%:80%^ 27%:73% ;6_20min，流動相A:流動相 B 為 27%:73%^ 27%:73%;20-30min，流動相 A:流動相 B 為 27%:73% — 80%:20% ;控制流動相流速為0.8-1.2ml/min ;控制柱溫25_35°C ;檢測波長為268_270nm ;理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計算應(yīng)不低于5000 ； 測定法:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μ 1，注入液相色譜儀，測定并計笪
ο
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含量檢測方法，其特征在于，包括如下步驟:對照品溶液的制備:分別精密稱取朝藿定C、淫羊藿苷對照品適量，加入甲醇溶解分別制成每1ml含0.8mg、0.02mg的溶液，作為對照品儲備液；精密吸取所述對照品儲備液各lml，并分別加入由體積比為55:45的甲醇-1.5%乙酸混合液稀釋，并定容至10ml，即得；供試品溶液的制備:精密吸取所述喘可治注射液1ml，并分別加入由體積比為55:45的甲醇-1.5%乙酸混合液稀釋定容至1mL,即得；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:照高效液相色譜法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以體積濃度1.5%的乙酸為流動相B進行梯度洗脫，控制流動相流速為lml/min ;控制柱溫30°C ;檢測波長為270nm ;理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計算應(yīng)不低于5000 ；測定法:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μ 1，注入液相色譜儀，測定并計笪
ο
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的含量檢測方法，其特征在于，在所述對照品溶液、供試品溶液制備步驟中，還包括將定容后的溶液采用0.45 μ m微孔濾膜濾過的步驟。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的含量檢測方法，其特征在于，在所述對照品溶液制備步驟中，還包括將所述朝藿定C、淫羊藿苷對照品經(jīng)五氧化二磷減壓干燥12-16h的步驟。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的含量檢測方法，其特征在于，所述喘可治注射液的原料藥組成為:巴戟天5-50重量份，淫羊藿30-120重量份。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的含量檢測方法，其特征在于，所述喘可治注射液的制備方法為: 按照選定重量份數(shù)取巴戟天、淫羊藿進行前處理工序，從眾多的雜亂藥材中揀選上好的藥材，而后用水多次清洗，除去沙土、泥垢，將淫羊藿切成Icm左右小段、60度以下干燥；巴戟天60度以下干燥后，粉碎成20目粗粉；然后用此凈原料進行第二提取工序，巴戟天凈原料依次用8、7、6倍量水分別提取1.5、1、I小時，提取液濃縮成50度下相對密度至1.2時，加入乙醇使含醇量達60%，回收乙醇，濃縮至相對密度為1.1時，分次上聚酰胺柱吸附，用水和一種30 %大極性溶劑洗脫，洗脫液混合回收烘干，再粉碎洗脫，濃縮過濾烘干，用溶媒溶解析出結(jié)晶，在80度以下真空干燥，得巴戟天提取物；淫羊藿凈原料依次用15、10、10倍量水分別提取1.5、1、I小時，提取液濃縮成50度下相對密度至1.2時，加入乙醇使含醇量達70%，回收乙醇，濃縮至相對密度為1.1時，分次上聚酰胺柱吸附，用水和一種35%大極性溶劑洗脫，洗脫液混合回收烘干，再粉碎洗脫，濃縮過濾烘干，用溶媒溶解析出結(jié)晶，在80度以下真空干燥，得淫羊藿提取物；提取物用水配制成溶液，濾棒粗濾、再用濾球和0.45濾膜過濾、灌封、115度30分鐘滅菌、用色水撿漏、燈檢、印字、然后包裝入庫；其中安瓿處理提前備好:用純水粗洗、注射用水精洗、最后滅菌干燥，用于灌封，即得。
7.一種根據(jù)權(quán)利要求1-6任一所述的含量檢測方法在喘可治注射液質(zhì)量檢測及控制領(lǐng)域的應(yīng)用。
8.一種根據(jù)權(quán)利要求1-6任一所述的含量檢測方法在淫羊藿藥材質(zhì)量檢測及控制領(lǐng)域的應(yīng)用 。
【文檔編號】G01N30/02GK104034815SQ201410259478
【公開日】2014年9月10日 申請日期:2014年6月11日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月11日
【發(fā)明者】許錚弟 申請人:廣州萬正藥業(yè)有限公司