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專利名稱：一種基于顯微紅外光譜技術(shù)快速檢測副溶血弧菌的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及食品安全領(lǐng)域，具體地涉及一種檢測副溶血弧菌的方法。
背景技術(shù)：
副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一種革蘭氏陰性嗜鹽桿菌,在海產(chǎn)品中的攜帶率高達(dá)45.7%，在我國部分沿海地區(qū)，由副溶血弧菌引起的食物中毒在細(xì)菌性食物中毒事件中居首位。經(jīng)加熱、冷凍、脫水等處理后，細(xì)菌或被殺死，或無損的存活下來，還有一些可能受到了亞致死性損傷。在適當(dāng)條件下，受損細(xì)菌可以修復(fù)損傷并恢復(fù)包括毒力和繁殖能力在內(nèi)的所有生理活性，仍具有致病性，嚴(yán)重威脅人類健康。因此，檢測副溶血弧菌及其亞致死損傷對于食品安全監(jiān)控和人類健康都具有重要意義。對于細(xì)菌的鑒定，常規(guī)培養(yǎng)檢測方法包括增菌培養(yǎng)、選擇性培養(yǎng)、生化試驗和血清學(xué)反應(yīng)等過程，耗時長、操作繁瑣、檢出率低，不適應(yīng)實際檢驗工作的需要。以免疫學(xué)為基礎(chǔ)的檢測方法利用抗原抗體反應(yīng)的顯著特異性，包括ELISA、免疫熒光法和放射免疫試驗等?；诤怂岬臋z測方法如PCR技術(shù)可以在很短時間內(nèi)將幾個甚至一個目標(biāo)序列擴(kuò)增到幾百萬個拷貝，為致病菌檢測提供了一種快速、靈敏、特異的檢測方法，但對于食品樣品中的抑制物質(zhì)非常敏感，有時會給出假陰性結(jié)果。目前已公開的副溶血弧菌檢測相關(guān)的兩個專利包括實用新型專利“用于檢測腸道感染的集合膠體金試紙”(中國專利申請?zhí)?201120375786.7)和發(fā)明專利“PCR-焦磷酸法檢測副溶血弧菌的檢測引物、試劑盒和檢測方法”(中國專利申請?zhí)?201210272737.X)。對于亞致死損傷細(xì)菌的檢測，現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)是:常規(guī)培養(yǎng)法工作量大，檢測周期長，且可能低估甚至給出假陰性結(jié)果；微生物表面形態(tài)觀察法，則對實驗者的操作技能要求較高，且儀器昂貴；基因芯片法價格昂貴，檢測時間長，需要專業(yè)人員操作等。目前已公開的損傷細(xì)菌檢測相關(guān)的專利僅有發(fā)明專利“熒光法快速測定活細(xì)菌總數(shù)”(中國專利申請?zhí)?200810140095.1)。紅外光譜技術(shù)具有操作簡單、分析速度快、成本低、應(yīng)用范圍廣、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，顯微紅外光譜技術(shù)將光學(xué)顯微鏡與紅外光譜技術(shù)相結(jié)合，比普通紅外光譜技術(shù)更快、更靈敏、更簡便。但紅外譜圖提供的信息較復(fù)雜，樣品之間差異細(xì)微，一般需要結(jié)合化學(xué)計量學(xué)深入分析。紅外光譜技術(shù)在微生物檢測中的應(yīng)用興起于上世紀(jì)九十年代，目前，國內(nèi)外尚未見到利用紅外光譜技術(shù)研究副溶血弧菌亞致死損傷的報道，且大多采用普通紅外技術(shù)研究細(xì)菌。目前未見利用紅外光譜技術(shù)對副溶血弧菌進(jìn)行鑒定和不同狀態(tài)檢測的專利。

發(fā)明內(nèi)容
鑒于上述現(xiàn)有技術(shù)發(fā)展情況，本發(fā)明的目的就是提供一種快速、簡便的基于顯微紅外光譜技術(shù)檢測副溶血弧菌的方法。本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的:首先利用顯微紅外光譜儀，通過高級功能“Map view”自動采集不同類別細(xì)菌或不同狀態(tài)副溶血弧菌的多張紅外譜圖，進(jìn)行二階導(dǎo)轉(zhuǎn)換等數(shù)據(jù)預(yù)處理。繼而對每個菌株的24個樣本，分別提取四個特征中紅外波段(3000-2800011'1800-1500011'1500-1200011'UOO-SOOcnT1) 二階導(dǎo)數(shù)譜的波數(shù)和峰值，進(jìn)行主成分分析(PCA)，建立每個波段的鑒別模型。最后同樣提取四個特征波段二階導(dǎo)數(shù)譜的信息，從每個菌株的24個樣本中隨機(jī)選取14個加入訓(xùn)練集，剩下10個加入預(yù)測集，進(jìn)行類模擬軟獨(dú)立建模(SMCA)分析，預(yù)測未知樣本，驗證每個波段模型的可靠性。通過以上步驟既可以特異鑒定副溶血弧菌，也可以檢測正常和不同程度損傷狀態(tài)的副溶血弧菌。本發(fā)明所述的基于顯微紅外光譜技術(shù)快速檢測副溶血弧菌的方法，包括如下步驟:(I)制備待檢樣品培養(yǎng)待測菌株，收集菌體，將菌體懸浮于生理鹽水中，取菌懸液滴在BaF2鹽片上，干燥；(2)光譜采集利用顯微紅外光譜儀采集細(xì)菌的微區(qū)域吸收信號，獲得原始譜圖(map)文件；(3)數(shù)據(jù)預(yù)處理將原始譜圖(map)文件轉(zhuǎn)換成紅外譜圖，并將紅外譜圖進(jìn)行二階導(dǎo)轉(zhuǎn)換；(4)主成分分析(Principle Component Analysis, PCA)提取特征波段二階導(dǎo)數(shù)譜的信息，進(jìn)行主成分分析(Principle ComponentAnalysis，PCA)建立不同類別或不同狀態(tài)細(xì)菌的鑒別模型；(5)模型驗證利用類模擬軟獨(dú)立建模(SoftIndependent Modeling of Class Analogy, SIMCA)預(yù)測不同類別或不同狀態(tài)的細(xì)菌，驗證模型可靠性。優(yōu)選地，所述利用類模擬軟獨(dú)立建模(Soft Independent Modeling of ClassAnalogy, SIMCA)預(yù)測，是指提取所述特征波段二階導(dǎo)數(shù)譜的信息，將每個菌株的樣本隨機(jī)分為訓(xùn)練集和預(yù)測集，對訓(xùn)練集中每一類樣本測量數(shù)據(jù)矩陣，建立主成分回歸模型，計算未知樣本到各類模型的SIMCA距離，以確定未知樣本類別，根據(jù)SIMCA結(jié)果統(tǒng)計每類樣本在每個波段的預(yù)測率和拒絕率，驗證模型可靠性具體操作如下:(I)制備待檢樣品將5 μ L溶于生理鹽水的菌懸液滴在BaF2鹽片(Φ 10 X 2mm)上，均勻鋪開，干燥器中放置30min，晾干后上機(jī)檢測。每塊鹽片上同時滴5個樣品，3孔透射支架同時放置3塊鹽片，一次可完成15個樣品的測試。(2)光譜采集利用高級功能“Map view” 一次自動采集8個微區(qū)域的吸收信號，光闌為100 μ mX 100 μ m,步長為100 μ mX 100 μ m,對每個類別或狀態(tài)的菌株均準(zhǔn)備3份平行樣品，共獲得3個map文件。采集參數(shù)為:掃描范圍ΜΟΟΟ-ΘΟΟαιΓ1 ;采集時間:3s，即16張干涉圖加和；分辨率AcnT1。 (3)數(shù)據(jù)預(yù)處理將每個原始map文件轉(zhuǎn)換成8張紅外譜圖，選取4000-800(^1波段進(jìn)行大氣背景抑制、自動基線校正、歸一化(使酰胺譜帶I1655CHT1的吸收強(qiáng)度等于1)，采用Savitzky-Golay模式，平滑點(diǎn)數(shù)為7，多項式次數(shù)為3，將譜圖進(jìn)行二階導(dǎo)轉(zhuǎn)換。(4) PCA 分析提取以下四個中紅外特征波段二階導(dǎo)數(shù)譜的波數(shù)和峰值，分別進(jìn)行后續(xù)的PCA分析和 SMCA 分析:3000-2800cm_1U800-1500cm_1U500-1200cm_1U200-800cm_1o 對每個菌株的24個樣本，分別提取上述四個特征波段二階導(dǎo)數(shù)譜的信息，進(jìn)行PCA分析。PCA屬于無監(jiān)督的分類方法，可將多維的數(shù)據(jù)壓縮成幾個主要、獨(dú)立的潛在變量(主成分，PC)，這些主成分保存了最相關(guān)和最具代表性的信息。PCl表示能描述目標(biāo)多維數(shù)據(jù)矩陣中最顯著的特性，PC2表示除PCl之外的所能描述目標(biāo)多維數(shù)據(jù)矩陣中最顯著的特性。二維PCA示意圖可直觀區(qū)分不同類別或不同狀態(tài)的細(xì)菌，從而建立每一個波段的鑒別模型。(5) SIMCA 分析驗證對每個菌株的24個樣本，分別提取步驟(4)中四個特征波段二階導(dǎo)數(shù)譜的信息，從每個菌株的24個樣本中隨機(jī)選取14個加入訓(xùn)練集，剩下10個加入預(yù)測集；對訓(xùn)練集中每一類樣本測量·數(shù)據(jù)矩陣，建立主成分回歸模型；計算未知樣本到各類模型的SMCA距離，以確定未知樣本類別；根據(jù)SIMCA結(jié)果統(tǒng)計每類樣本在每個波段的預(yù)測率和拒絕率，考察模型可靠性。本發(fā)明利用顯微紅外光譜儀采集不同類別或狀態(tài)的細(xì)菌譜圖(均為純培養(yǎng)物)，對原始數(shù)據(jù)進(jìn)行一系列預(yù)處理后，結(jié)合化學(xué)計量學(xué)中的PCA和SMCA，可特異鑒定副溶血弧菌，也可以檢測正常和不同程度損傷狀態(tài)的副溶血弧菌。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是:檢測快速，操作簡便，靈敏度高，特異性強(qiáng)，結(jié)果可靠；1、結(jié)果可靠，對于亞致死損傷副溶血弧菌的檢測，紅外光譜的結(jié)果得到了傳統(tǒng)經(jīng)典的培養(yǎng)法的驗證。2、特異性強(qiáng)，可特異性鑒定副溶血弧菌。3、快速，顯微紅外光譜儀I小時可采集大于120張譜圖，從樣品前處理到完成數(shù)據(jù)處理的整個檢測過程不超過一天。4、簡單，前處理只需簡單離心，儀器操作簡單，“Map view”可自動采集多個微區(qū)域的紅外譜圖。5、靈敏度高，只需5 μ L濃縮菌液就可獲得很強(qiáng)的紅外信號。6、普及性強(qiáng)，操作者容易學(xué)習(xí)和掌握。7、適用范圍廣，不僅可用于副溶血弧菌的檢測，也可推廣用于其他食源性致病菌和細(xì)菌的檢測。8、應(yīng)用領(lǐng)域多，即可應(yīng)用于副溶血弧菌的鑒定，也可應(yīng)用于副溶血弧菌存活和亞致死等各種不同狀態(tài)的檢測。


圖1 為不同菌株區(qū)分的 PCA 示意圖，A:1200-800(^1 ；B:1500-1200(^1 ；C:1800-1500cm_1 ；D:3000-2800cm_1 ；I:Vibrio parahaemolyticus ATCC17802 ；II:Listeriamonocytogenes EDGe0圖2為未受損與不同程度受損副溶血弧菌ATCC17802區(qū)分的PCA示意圖，A:1200-8000^1 ；B:1500-1200cm_1 ；C: 1800-1500cm_1 ；D:3000-2800cm_1 ；1:未受損；I1:加熱2min ；II1:加熱 4min ；IV:加熱 6min ；V:加熱 8min。本發(fā)明中，所用試劑、儀器以及菌株均可從市售獲得。所用菌株副溶血弧菌Vibrioparahaemolyticus ATCC17802和單增李斯特菌Listeria monocytogenes EDGe購自中國微生物菌種網(wǎng)。不同菌株類型，并不影響本發(fā)明的鑒定效果。
具體實施例方式以下結(jié)合附圖和附表通過實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步說明。實施例1:基于顯微紅外光譜技術(shù)快速鑒定副溶血弧菌

菌液制備:將供試菌株Vibrio parahaemolyticus ATCC17802 從 _80°C超低溫冰箱中取出，在TCBS培養(yǎng)基上37°C劃線培養(yǎng)16h，挑取典型單菌落，接種于200mL含3%NaCl的胰蛋白胨大豆肉湯中，37°C下175rpm過夜振蕩培養(yǎng)至穩(wěn)定期；將供試菌株Listeriamonocytogenes EDGe從_80°C超低溫冰箱中取出，在TSA-YE培養(yǎng)基上37°C劃線培養(yǎng)18 24h，挑取典型單菌落，接種于200mL胰蛋白胨大豆肉湯中，37°C下250rpm振蕩培養(yǎng)24h至穩(wěn)定期。取IOmL菌液加入50mL離心管中，4000r/min離心4min收集細(xì)胞。為消除代謝產(chǎn)物和培養(yǎng)基對細(xì)菌紅外譜圖的影響，將細(xì)胞用IOmL無菌生理鹽水洗滌兩次后，倒掉生理鹽水收集菌體，重新懸浮于200 μ L生理鹽水中，供光譜分析。每個菌株各做3次平行試驗，獲得3個平行樣品。光譜采集:取5 μ L菌液直接滴在BaF2片上，干燥器中放置半小時，待水分蒸干后，上顯微紅外光譜儀進(jìn)行測試。每塊鹽片上同時滴3個樣品，3孔透射支架同時放置2塊鹽片，在短時間內(nèi)完成了 6個樣品的測試。掃描范圍:4000-600(31^1 ;采集時間:3s ;分辨率:ScnT1 ;通過面掃描(Map View)模式,每個樣品采集8張圖譜,獲得I個map文件,步長為100 μ mX 100 μ m，光闌為ΙΟΟμπιΧΙΟΟμπι。每個菌株共有24張圖譜。數(shù)據(jù)預(yù)處理:將原始map文件轉(zhuǎn)換成8張紅外譜圖，選取4000-8000^1波段進(jìn)行大氣背景抑制、自動基線校正、歸一化(使酰胺譜帶I1655CHT1的吸收強(qiáng)度等于1)，采用Savitzky-Golay模式(平滑點(diǎn)數(shù)為7，多項式次數(shù)為3)將譜圖進(jìn)行二階導(dǎo)轉(zhuǎn)換。提取以下四個特征波段二階導(dǎo)數(shù)譜的波數(shù)和峰值，分別進(jìn)行后續(xù)的PCA分析和SIMCA分析:3000-2800cm_1U800-1500cm_1U500-1200cm_1U200-800cm_1oPCA分析:對每個菌株的24個樣本，分別提取四個特征波段二階導(dǎo)數(shù)譜的信息，進(jìn)行PCA分析。從二維PCA示意圖(圖1)可以看出，在四個光譜波段中，單核細(xì)胞增生李斯特菌與副溶血弧菌能夠各自聚成一組，彼此區(qū)分開。PCA結(jié)果表明，紅外光譜法能夠特異地鑒定副溶血弧菌與單核細(xì)胞增生李斯特菌，從而建立了副溶血弧菌的特異鑒定模型。SIMCA分析:首先對每個菌株的24個樣本，分別提取四個特征波段二階導(dǎo)數(shù)譜的信息，從每個菌株中隨機(jī)抽取14個樣本加入訓(xùn)練集(共28個樣本)，剩余的10個樣本加入預(yù)測集(共20個樣本)；然后分別計算各類的主成分回歸模型；最后根據(jù)未知樣本到各類模型的距離進(jìn)行模式判別。根據(jù)SIMCA結(jié)果統(tǒng)計每類樣本在每個波段的預(yù)測率和拒絕率，驗證模型可靠性。預(yù)測率考察某類樣品有多少落在該類模型的區(qū)域內(nèi)，而拒絕率是考察某類樣品模型對于其它不屬于該類的未知樣品的拒絕程度，當(dāng)兩個值都為100%時，表明某類樣品與其他類樣品之間沒有重疊，可以較好地將其聚類分開。從表I可見，兩個菌株都在四個光譜區(qū)域都取得了 100%的預(yù)測率和100%的拒絕率，即在每一個波段中，每一個菌株的10個未知樣本都被正確歸類，都能將非本組的10個細(xì)菌樣本全部排斥在外。SIMCA結(jié)果表明，PCA模型可靠度高，能夠有效地預(yù)測未知樣本的歸屬。實施例2:基于顯微紅外光譜技術(shù)快速檢測熱激亞致死損傷的副溶血弧菌熱激試驗:供試菌株Vibrio parahaemolyticus ATCC17802 從 _80°C超低溫冰箱中取出，在TCBS培養(yǎng)基上37°C劃線培養(yǎng)16h，挑取典型單菌落，接種于200mL含3%NaCl的胰蛋白胨大豆肉湯中，37°C下175rpm過夜振蕩培養(yǎng)至穩(wěn)定期。取IOmL菌液加入50mL離心管中，4000r/min離心4mi n收集細(xì)胞。為消除代謝產(chǎn)物和培養(yǎng)基對細(xì)菌紅外譜圖的影響，將細(xì)胞用IOmL無菌生理鹽水洗滌兩次后，重新懸浮于5mL生理鹽水中，制得熱處理培養(yǎng)液。每個處理皆準(zhǔn)備3個平行樣品。將I個熱處理培養(yǎng)液作為空白對照，另外4個裝有5mL熱處理培養(yǎng)液的離心管同時浸入55°C水浴,彼此保有一定空間以利于熱傳導(dǎo),分別于2、4、6、Smin后取出并立即置于冰浴上冷卻至少5min。每熱激試驗重復(fù)3次。光譜采集:將菌液離心，倒掉生理鹽水收集菌體，重新懸浮于200 μ L生理鹽水中。取5 μ L菌液直接滴在BaF2片上，干燥器中放置半小時，待水分蒸干后，上顯微紅外光譜儀進(jìn)行測試。每塊鹽片上同時滴5個樣品，3孔透射支架同時放置3塊鹽片，在短時間內(nèi)完成了15個樣品的測試。掃描范圍:4000-600(^1 ;采集時間:3s ;分辨率:8(^1 ;通過面掃描(MapView)模式，每個樣品采集8張圖譜，步長為100 μ mX 100 μ m，光闌為ΙΟΟμπιΧΙΟΟμπι。每個菌株共有24張圖譜。數(shù)據(jù)預(yù)處理:將原始map文件轉(zhuǎn)換成8張紅外譜圖，選取4000-8000^1波段進(jìn)行大氣背景抑制、自動基線校正、歸一化(使酰胺譜帶I1655CHT1的吸收強(qiáng)度等于1)，采用 Savitzky-Golay 模式(7-point, polynomial degree3)將譜圖進(jìn)行二階導(dǎo)轉(zhuǎn)換。提取以下四個特征波段二階導(dǎo)數(shù)譜的波數(shù)和峰值，分別進(jìn)行后續(xù)的PCA分析和SIMCA分析:3000-2800cm_1U800-1500cm_1U500-1200cm_1U200-800cm_1oPCA分析:對每個菌株的24個樣本，分別提取四個特征波段二階導(dǎo)數(shù)譜的信息，進(jìn)行PCA分析。從二維PCA示意圖(圖2)可以看出，在四個光譜波段中，正常細(xì)菌與受損傷細(xì)菌能夠清楚、完全地區(qū)分開，而受損傷程度不同的細(xì)菌也能基本分離，從而建立了正常和不同程度亞致死損傷副溶血弧菌的鑒別模型。SIMCA分析:首先對每個菌株的24個樣本，分別提取四個特征波段二階導(dǎo)數(shù)譜的信息，從每個菌株中隨機(jī)抽取14個樣本加入訓(xùn)練集(共70個樣本)，剩余的10個樣本加入預(yù)測集(共50個樣本)；然后分別計算各類的主成分回歸模型；最后根據(jù)未知樣本到各類模型的距離進(jìn)行模式判別。根據(jù)SIMCA結(jié)果統(tǒng)計每類樣本在每個波段的預(yù)測率和拒絕率，驗證模型可靠性。從表2可見，除3個例外，不同程度熱損傷(包括未受損)的副溶血弧菌的預(yù)測準(zhǔn)確程度均大于80% ;拒絕率均大于90%。SIMCA結(jié)果表明，四個光譜區(qū)域模型的預(yù)測程度都較好。以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施例，并不用于限制本發(fā)明，對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，本發(fā)明可以有更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、改進(jìn)等，均應(yīng)包括在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
表I不同菌株的SIMCA判別結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種基于顯微紅外光譜技術(shù)快速檢測副溶血弧菌的方法，包括以下步驟: (1)制備待檢樣品 培養(yǎng)待測菌株，收集菌體，將菌體懸浮于生理鹽水中，取菌懸液滴在BaF2鹽片上，干燥； (2)光譜采集 利用顯微紅外光譜儀采集菌株的微區(qū)域吸收信號，獲得原始圖譜文件； (3)數(shù)據(jù)預(yù)處理 將原始圖譜文件轉(zhuǎn)換成紅外譜圖，并將紅外譜圖進(jìn)行二階導(dǎo)轉(zhuǎn)換； (4)主成分分析 提取特征波段二階導(dǎo)數(shù)譜的信息，進(jìn)行主成分分析建立不同類別或不同狀態(tài)細(xì)菌的鑒別豐旲型; (5)模型驗證 利用類模擬軟獨(dú)立建模預(yù)測不同類別或不同狀態(tài)的細(xì)菌，驗證模型可靠性。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于顯微紅外光譜技術(shù)快速檢測副溶血弧菌的方法，其特征在于:所述的副溶血弧菌為純培養(yǎng)物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的 基于顯微紅外光譜技術(shù)快速檢測副溶血弧菌的方法，其特征在于:所述步驟(2)中，利用顯微紅外光譜儀采集菌株的紅外譜圖，是指利用顯微紅外光譜儀自動采集微區(qū)域的吸收信號，光闌為100 μ mX 100 μ m，步長為100 μ mX 100 μ m，采集參數(shù)為:掃描范圍，4000-6000^1 ;采集時間，3s ;分辨率，8CHT1。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的基于顯微紅外光譜技術(shù)快速檢測副溶血弧菌的方法，其特征在于:所述步驟(2)中一次自動采集8個微區(qū)域的吸收信號，對每個待測菌株均準(zhǔn)備3份平行樣品，進(jìn)行檢測。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于顯微紅外光譜技術(shù)快速檢測副溶血弧菌的方法，其特征在于:所述步驟(3)中， 所述將原始圖譜文件轉(zhuǎn)換成紅外譜圖，條件為選取^OO-SOOcnT1波段進(jìn)行大氣背景抑制、自動基線校正、歸一化，使酰胺譜帶I1655CHT1的吸收強(qiáng)度等于I。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于顯微紅外光譜技術(shù)快速檢測副溶血弧菌的方法，其特征在于:所述步驟(4)中所述特征波段是指3000-2800011^1800-1500011^1500-12000^1和1200-800cm_1 波段。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于顯微紅外光譜技術(shù)快速檢測副溶血弧菌的方法，其特征在于:所述步驟(4)中 所述二階導(dǎo)數(shù)譜的信息是指二階導(dǎo)數(shù)譜的波數(shù)和峰值； 所述主成分分析是指二維主成分分析。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于顯微紅外光譜技術(shù)快速檢測副溶血弧菌的方法，其特征在于:所述步驟(5)中， 所述利用類模擬軟獨(dú)立建模預(yù)測，是指提取所述特征波段二階導(dǎo)數(shù)譜的信息，將每個菌株的樣本隨機(jī)分為訓(xùn)練集和預(yù)測集，對訓(xùn)練集中每一類樣本測量數(shù)據(jù)矩陣，建立主成分回歸模型，計算未知樣本到各類模型的類模擬軟獨(dú)立建模距離，以確定未知樣本類別，根據(jù)類模擬軟獨(dú)立建模結(jié)果統(tǒng)計每類樣本在每個波段的預(yù)測率和拒絕率，驗證模型可靠性。
9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的基于顯微紅外光譜技術(shù)快速檢測副溶血弧菌的方法，其特征在于:所述步驟(3)中，采用Savitzky-Golay模式，設(shè)置平滑點(diǎn)數(shù)為7，多項式次數(shù)為3。
10.根據(jù)上述任一項權(quán)利要求所述的基于顯微紅外光譜技術(shù)快速檢測副溶血弧菌的方法，其特征在于:所述方法能夠特異鑒定副溶血弧菌，也能夠檢測正常和不同程度損傷狀態(tài)的副溶血 弧菌。
全文摘要
本發(fā)明涉及食品安全領(lǐng)域，建立了一種基于顯微紅外光譜技術(shù)快速檢測副溶血弧菌的方法。本發(fā)明方法為利用顯微紅外光譜儀采集細(xì)菌的紅外譜圖，進(jìn)行數(shù)據(jù)預(yù)處理后提取特征中紅外波段(3000-2800cm-1、1800-1500cm-1、1500-1200cm-1、1200-800cm-1)的信息，進(jìn)行主成分分析(Principle Component Analysis,PCA)以建立鑒別模型，進(jìn)行類模擬軟獨(dú)立建模分析(Soft Independent Modeling of Class Analogy,SIMCA)以驗證模型可靠性。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是結(jié)果可靠，特異性強(qiáng)，檢測快速，操作簡便，靈敏度高，普及性強(qiáng)，應(yīng)用范圍廣；可特異鑒定副溶血弧菌；可檢測正常和不同程度損傷狀態(tài)的副溶血弧菌。
文檔編號G01N21/35GK103149173SQ201310072019
公開日2013年6月12日 申請日期2013年3月6日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月6日
發(fā)明者史賢明, 喻文娟, 施春雷, 侯靜文, 王瑞斌, 朱邦尚, 王大鵬 申請人:上海交通大學(xué)