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專利名稱：一種石蠟組織芯片制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種石蠟組織芯片制作方法，用于制備組織芯片，屬于組織芯片技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
組織芯片技術(shù)是基因芯片技術(shù)的發(fā)展和延伸，與細胞芯片、蛋白芯片、抗體芯片一樣， 屬于一種特殊生物芯片技術(shù)。組織芯片技術(shù)可以將數(shù)十個甚至上千個不同個體的臨床組織 標本按預先設計的順序排列在一張玻片進行分析研究，是一種高通量、多樣本的分析工具。 組織芯片技術(shù)使科研人員能同時對幾百甚至上千種組織樣本同時進行分析，進行某一個或 多個特定的基因，或與其相關(guān)的表達產(chǎn)物的研究。該技術(shù)可以與DNA、 RNA、蛋白質(zhì)、抗體 等技術(shù)相結(jié)合，與傳統(tǒng)的病理學技術(shù)、組織化學及免疫組化技術(shù)相結(jié)合，在基因、基因轉(zhuǎn) 錄和相關(guān)表達產(chǎn)物生物學功能三個水平上進行研究。這對人類基因組學的研究與發(fā)展，尤 其對基因和蛋白質(zhì)與疾病關(guān)系的研究，疾病相關(guān)基因的驗證、新藥物的開發(fā)與篩選、疾病 的分子診斷，治療過程的追蹤和預后等方面具有實際意義和廣闊的市場前景。
目前，美國Clontech和Stratagene等少數(shù)生物技術(shù)公司已開展了人及動物的組織芯 片產(chǎn)品開發(fā)和銷售，但數(shù)量少、價格高、品種單一，滿足不了醫(yī)學科研和醫(yī)藥工業(yè)研發(fā)的 需要。2001年4月，美國Lifespan生物科學公司建立了正常和疾病組織基因表達數(shù)據(jù)庫。 美國Tissuelnformactics公司用動物組織芯片技術(shù)進行藥物毒理篩選和尋找新藥物作用 位點。此外，日本、英國等國正積極籌建國家臨床組織病理數(shù)據(jù)庫。
中國在組織芯片技術(shù)方面的研究進展迅速。2001年10月，中國國家科技部將組織芯 片技術(shù)列為"十五"國家科技攻關(guān)西部開發(fā)重大項目，并已在西安正式立項。該立項分成 7個子項目，包括組織芯片技術(shù)、組織芯片生物信息數(shù)據(jù)庫、自動化組織芯片儀、自動分 析裝置、組織芯片相關(guān)技術(shù)與試劑、組織芯片實際應用技術(shù)，為中國與世界相關(guān)技術(shù)同步 發(fā)展奠定了基礎(chǔ)。
目前，組織芯片的制備主要依靠機械化芯片制備儀來完成。制備儀包括操作平臺、特 殊的打孔采樣裝置和一個定位系統(tǒng)。打孔采樣裝置對供體組織蠟塊進行采樣，同時也可對 受體蠟塊進行打孔，其孔徑與采樣直徑相同，兩者均可精確定位。制備儀的定位裝置可使 穿刺針或受體蠟塊線性移動，從而制備出孔徑、孔距、孔深完全相同的組織微陣列蠟塊。 通過切片輔助系統(tǒng)將其轉(zhuǎn)移并固定到硅化和膠化玻片上即成為組織芯片。根據(jù)樣本直徑
3(0. 2 2. 0腿)不同，在一張45 mmX25 mm的玻片上可以排列40 2000個以上的組織 標本。一般按照樣本數(shù)目的多少，將組織芯片分為低密度芯片(< 200點)、中密度芯片(200 600點)和高密度芯片(〉600點)。常用組織芯片含有組織標本的數(shù)目在50 800個之間。 根據(jù)研究目的不同，芯片種類可以分成腫瘤組織芯片、正常組織芯片、單一或復合、特定 病理類型等數(shù)10種組織芯片。
但目前依據(jù)上述方法制備組織芯片有以下不足第一，現(xiàn)有組織芯片制作成本很高。 除特殊的儀器設備外(數(shù)十萬元)，制作1個組織芯片的費用在萬元以上，每張切片單價 在50 100元；第二，僅能在已有的蠟塊上取樣，組織來源受到限制；第三，根據(jù)現(xiàn)有設
備和方法制備的芯片，切片量僅約50張，因為是在原有蠟塊上點孔取樣，組織厚度有限； 第四，高密度芯片雖然通量大，但由于每枚組織微小，難以提供組織結(jié)構(gòu)的信息；第五，
僅在大型研究單位，才有經(jīng)費和條件進行組織芯片的相關(guān)研究，難以推廣。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是開發(fā)一種簡易組織芯片制作方法，制備低密度和中密度芯片，兼顧樣 本通量、組織結(jié)構(gòu)和芯片產(chǎn)量等多方面的要求，使組織芯片技術(shù)的作用得到充分發(fā)揮。 為了達到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是提供一種石蠟組織芯片制作方法，其特征在
于，具體步驟為
第一步將所需要的組織編號后浸石蠟，或在已有的蠟塊上標記所需要的組織后編號； 將組織切成所需大小，放在燙臺上，在60-65'C將其上的石蠟融化得到待包埋的組織； 第二步另取石蠟放入石蠟壺，用電爐加熱至60-7(TC使石蠟融化；
第三步將方形的蠟模放在玻璃板上，將第一步得到的待包埋的組織在第二步中融化 的石蠟中浸沒后排列在蠟模內(nèi)部的一側(cè)，在定位板或定位紙上記錄相應位置的組織的編 號，在蠟模內(nèi)部的另外一側(cè)留下方形空位，融化的石蠟沿空位處倒入蠟模內(nèi)，直至將組織
浸沒，在18-25。C (或室溫下)靜置10-30min使石蠟聚合，撤除蠟模，沿平行于玻璃板方 向切片。
進一步地，所述第一步中切后的組織為方體狀或圓柱體狀。 所述的方體狀的長為5ram 10ram、寬為lram 2mm、厚為lmm 2mm。 所述第三步中的蠟模由2個垂直彎折的銅條組成，長為70mra，寬為40mra，高為20mra， 厚為10 20mm。
所述第三步中留下的方形空位的長為20mm，寬為25mm。
本發(fā)明利用石蠟易溶解、易聚合的特性，使需要的組織按照一定的順序排列，先用少量石蠟將組織疏松地黏附在一起，最后用石蠟將組織完全聚合，切片后便得到所需要的組 織芯片。
本發(fā)明具有廉價、方便、快速、產(chǎn)量高、取材多樣的優(yōu)點，能普及至每一個病理科及 相關(guān)研究單位。制作的組織芯片，組織形狀不受限制，可為長條形，長方形，方形，圓柱 形，圓筒形或不規(guī)則形；組織大小可根據(jù)需要而定，在50醒X25國的面積上可排列20 300個組織，能滿足研究需要。組織芯片的高度也可根據(jù)需要而定，在5mm 20咖高的組 織芯片上可切制500張 2000張切片，遠高于現(xiàn)有組織芯片切制50張切片的產(chǎn)量，約為 10 40倍；成本遠低于現(xiàn)有制作方法。
具體實施例方式
下面結(jié)合實施例來具體說明本發(fā)明。
實施例1
采用如下方法制作石蠟組織芯片
第一步病理取材時留取所需的組織，編號，切成2ramX2mmX10mm大小，隨同病理 科常規(guī)組織處理程序，至浸石蠟的步驟；放在燙臺上，在6(TC將其上的石蠟融化得到待包 埋的組織；
第二步另取石蠟放入石蠟壺，用電爐加熱至6(TC使石蠟融化； 第三步將2個垂直彎折的銅條放在厚玻璃板上，拼成長為70mm，寬為40mm，高為 20mm，厚為lOmra的方形蠟模放在玻璃板上，厚為(銅條的高度)，用鑷子鉗取需要包埋的 第一枚組織，在融化的石蠟中快速浸沒一次，將平整面貼著玻璃，依靠石蠟的粘性將組織 立于玻璃上，第一塊組織有兩個側(cè)面緊貼蠟模，底面緊貼玻璃，在定位板或定位紙上記錄 該組織的原始編號；依次放入第二塊組織，第二塊組織底面緊貼玻璃，有一個側(cè)面與第一 枚組織相連，有一個側(cè)面與蠟模相連，兩枚組織之間的距離相當與兩層蠟模的距離，直至 第一排組織點位完成，長度50rnm。接著開始第二排、第三排等的點位，直至蠟模寬度達 25mm，蠟模內(nèi)有20mmx25mm的空位，將石蠟壺內(nèi)融化的石蠟沿空位處緩慢倒入蠟模內(nèi)，直 至浸沒完全；在25'C靜置10min使石蠟聚合，撤除蠟模，包埋n個組織的蠟塊即制備完成， 沿平行于玻璃板方向切片。
實施例2
采用如下方法制作石蠟組織芯片
第一步在蠟塊上將所需要的組織編號，定位，將組織切成長為5mm、寬為lmm、厚 為lmm的方形塊；放在燙臺上，在65'C將其上的石蠟融化得到待包埋的組織；
5第二步另取石蠟放入石蠟壺，用電爐加熱至7(TC使石蠟融化；
第三步將2個垂直彎折的銅條放在厚玻璃板上，拼成長為70mm，寬為40mm，高為 20mm，厚為20mm的方形蠟模放在玻璃板上，厚為(銅條的高度)，用鑷子鉗取需要包埋的 第一枚組織，在融化的石蠟中快速浸沒一次，將平整面貼著玻璃，依靠石蠟的粘性將組織 立于玻璃上，第一塊組織有兩個側(cè)面緊貼蠟模，底面緊貼玻璃，在定位板或定位紙上記錄 該組織的原始編號；依次放入第二塊組織，第二塊組織底面緊貼玻璃，有一個側(cè)面與第一 枚組織相連，有一個側(cè)面與蠟模相連，兩枚組織之間的距離相當與兩層蠟模的距離，直至 第一排組織點位完成，長度50mrn。接著開始第二排、第三排等的點位，直至蠟模寬度達 25mm，蠟模內(nèi)有20mmx25mm的空位，將石蠟壺內(nèi)融化的石蠟沿空位處緩慢倒入蠟模內(nèi)，直 至浸沒完全；在25'C靜置10min使石蠟聚合，撤除蠟模，包埋n個組織的蠟塊即制備完成， 沿平行于玻璃板方向切片。
實施例3
采用如下方法制作石蠟組織芯片
第一步在蠟塊上將所需要的組織編號，定位，將組織切成長10mm,半徑為lmin大 小的圓柱體；放在燙臺上，在65T:將其上的石蠟融化得到待包埋的組織； 第二步另取石蠟放入石蠟壺，用電爐加熱至7(TC使石蠟融化； 第三步將2個垂直彎折的銅條放在厚玻璃板上，拼成長為70mm，寬為40mm，高為 20mm，厚為20mm的方形蠟模放在玻璃板上，厚為(銅條的高度)，用鑷子鉗取需要包埋的 第一枚組織，在融化的石蠟中快速浸沒一次，將平整面貼著玻璃，依靠石蠟的粘性將組織 立于玻璃上，第一塊組織兩側(cè)緊貼蠟模，底面緊貼玻璃，在定位板或定位紙上記錄該組織 的原始編號；依次放入第二塊組織，第二塊組織底面緊貼玻璃， 一側(cè)與第一枚組織相連， 另一側(cè)與蠟模相連，兩枚組織之間的距離相當與兩層蠟模的距離，直至第一排組織點位完 成，長度50mm。接著開始第二排、第三排等的點位，直至蠟模寬度達25咖，蠟模內(nèi)有 20mmx25mm的空位，將石蠟壺內(nèi)融化的石蠟沿空位處緩慢倒入蠟模內(nèi)，直至浸沒完全；在 18T:靜置30min待石蠟聚合后，撤除蠟模，包埋n個組織的蠟塊即制備完成，沿平行于玻 璃板方向切片。
權(quán)利要求
1、一種石蠟組織芯片制作方法，其特征在于，具體步驟為第一步將所需要的組織編號后浸石蠟，或在已有的蠟塊上標記所需要的組織后編號；將組織切成所需大小，放在燙臺上，在60-65℃將其上的石蠟融化得到待包埋的組織；第二步另取石蠟放入石蠟壺，用電爐加熱至60-70℃使石蠟融化；第三步將方形的蠟模放在玻璃板上，將第一步得到的待包埋的組織在第二步中融化的石蠟中浸沒后排列在蠟模內(nèi)部的一側(cè)，在定位板或定位紙上記錄相應位置的組織的編號，在蠟模內(nèi)部的另外一側(cè)留下方形空位，融化的石蠟沿空位處倒入蠟模內(nèi)，直至將組織浸沒，在18-25℃靜置10-30min使石蠟聚合，撤除蠟模，沿平行于玻璃板方向切片。
2、 如權(quán)利要求1所述的一種石蠟組織芯片制作方法，其特征在于，所述第一步中切 后的組織為方體狀或圓柱體狀。
3、 如權(quán)利要求2所述的一種石蠟組織芯片制作方法，其特征在于，所述的方體狀的 長為5mm 10腿、寬為lmm 2mm、 厚為l面 2mm。
4、 如權(quán)利要求1所述的一種石蠟組織芯片制作方法，其特征在于，所述第三步中的 蠟模由2個垂直彎折的銅條組成，長為70mm，寬為40mm，高為20mm，厚為10 20rnm。
5、 如權(quán)利要求2所述的一種石蠟組織芯片制作方法，其特征在于，所述第三步中留 下的方形空位的長為20mm，寬為25mm。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種石蠟組織芯片制作方法，其特征在于，具體步驟為將所需要的組織編號后浸蠟，或在已有的蠟塊上標記所需要的組織后編號；將組織切成所需大小，放在燙臺上，在60-65℃將其上的石蠟融化得到待包埋的組織；另取石蠟放入石蠟壺，用電爐加熱使石蠟融化；將方形蠟模放在玻璃板上，將第一步得到的待包埋的組織在融化的石蠟中浸沒后排列在蠟模內(nèi)部的一側(cè)，在定位板或定位紙上記錄相應位置的組織的編號，在蠟模內(nèi)部的另外一側(cè)留下方形空位，融化的石蠟沿空位處倒入蠟模內(nèi)，直至將組織浸沒，使石蠟聚合，撤除蠟模，沿平行于玻璃板方向切片。本發(fā)明具有廉價、方便、快速、產(chǎn)量高、取材多樣的優(yōu)點，能普及至每一個病理科及相關(guān)研究單位。
文檔編號G01N1/28GK101556224SQ200910051399
公開日2009年10月14日 申請日期2009年5月18日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月18日
發(fā)明者侯英勇, 宿杰·阿克蘇, 曾海英, 譚云山 申請人:復旦大學附屬中山醫(yī)院