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用于檢測(cè)細(xì)胞活化抗原的試劑盒的制作方法
【專利摘要】一種用于檢測(cè)細(xì)胞活化抗原的試劑盒，包括盒體、盒蓋和設(shè)置在盒體內(nèi)的襯墊，所述襯墊上設(shè)有小孔，裝有熒光標(biāo)記各種單克隆抗體的試劑管被設(shè)置在所述小孔內(nèi)。該試劑盒結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、設(shè)計(jì)合理，方便攜帶、保存，不易受污染。使用該試劑盒檢測(cè)細(xì)胞活化抗原時(shí)，不涉及細(xì)胞培養(yǎng)，程序簡(jiǎn)單，降低了檢測(cè)工作的強(qiáng)度；對(duì)實(shí)驗(yàn)室條件要求不高，只要有流式細(xì)胞儀的實(shí)驗(yàn)室即可開展檢測(cè)，便于技術(shù)廣泛推廣，檢測(cè)操作時(shí)間短、檢測(cè)精度高，上機(jī)操作和數(shù)據(jù)分析方法簡(jiǎn)單，可以在第一時(shí)間得到臨床所需資料。
【專利說明】用于檢測(cè)細(xì)胞活化抗原的試劑盒
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型屬于免疫學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種用于檢測(cè)細(xì)胞活化抗原的試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002]細(xì)胞免疫廣義指經(jīng)特異性細(xì)胞(如細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞)和非特異性細(xì)胞(如巨噬細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞)活性增強(qiáng)的免疫反應(yīng)；狹義指T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫。細(xì)胞免疫(cellularimmunity)是T細(xì)胞受到抗原刺激后，增殖、分化、轉(zhuǎn)化為致敏T細(xì)胞(也叫效應(yīng)T細(xì)胞)，當(dāng)相同抗原再次進(jìn)入機(jī)體的細(xì)胞中時(shí)，致敏T細(xì)胞(效應(yīng)T細(xì)胞)對(duì)抗原的直接殺傷作用及致敏T細(xì)胞所釋放的細(xì)胞因子的協(xié)同殺傷作用，統(tǒng)稱為細(xì)胞免疫。免疫細(xì)胞的活化是免疫應(yīng)答產(chǎn)生的一種標(biāo)志。靜止細(xì)胞經(jīng)過抗原刺激活化后，表現(xiàn)出一系列的特征，如細(xì)胞膜表面活化分子的表達(dá)等。
[0003]目前可利用流式細(xì)胞術(shù)通過檢測(cè)免疫細(xì)胞活化后的特性，來分析抗原特異性免疫應(yīng)答及其應(yīng)答規(guī)律，并且可以追蹤特定細(xì)胞在免疫應(yīng)答過程中的作用。現(xiàn)有的流式細(xì)胞計(jì)是一種零分辨率的儀器，它只能測(cè)量一個(gè)細(xì)胞的諸如總核酸量，總蛋白量等指標(biāo)，而不能鑒別和測(cè)出某一特定部位的核酸或蛋白的多少；若采用多參數(shù)熒光標(biāo)記，則由于串聯(lián)熒光染料易降解，會(huì)影響對(duì)結(jié)果的判定。
實(shí)用新型內(nèi)容
[0004]為了解決上述技術(shù)問題，本實(shí)用新型的目的在于提供一種用于檢測(cè)細(xì)胞活化抗原的試劑盒，可以快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)細(xì)胞活化抗原。
[0005]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本實(shí)用新型采取的技術(shù)方案是:一種用于檢測(cè)細(xì)胞活化抗原的試劑盒，包括盒體(I)、盒蓋(2)和設(shè)置在盒體(I)內(nèi)的襯墊(3)，所述襯墊(3)上設(shè)有小孔，裝有熒光標(biāo)記CDla單克隆抗體的試劑管(4)、裝有熒光標(biāo)記CD3單克隆抗體的試劑管
(5)、裝有熒光標(biāo)記CD4單克隆抗體的試劑管(6)、裝有熒光標(biāo)記CD56單克隆抗體的試劑管
(7)、裝有熒光標(biāo)記CD30單克隆抗體的試劑管(8)、裝有熒光標(biāo)記CD69單克隆抗體的試劑管
(9)、裝有熒光標(biāo)記CD80單克隆抗體的試劑管(10)、裝有熒光標(biāo)記CD86單克隆抗體的試劑管(11)、裝有熒光標(biāo)記CD166單克隆抗體的試劑管(12)、裝有熒光標(biāo)記CD8單克隆抗體的試劑管(13)、裝有熒光標(biāo)記CD14單克隆抗體的試劑管(14)、裝有熒光標(biāo)記CD19單克隆抗體的試劑管(15)、裝有熒光標(biāo)記IgGl單克隆抗體的試劑管(16)、裝有熒光標(biāo)記IgG2a單克隆抗體的試劑管(17)裝有紅細(xì)胞裂解液的試劑管(18)和裝有PBS緩沖液的試劑管(19)被設(shè)置在所述小孔內(nèi)。
[0006]其中，⑶Ia單克隆抗體、⑶86單克隆抗體、⑶166單克隆抗體和IgG2a單克隆抗體使用PE標(biāo)記KD3單克隆抗體使用PerCP標(biāo)記<D4單克隆抗體使用PE-CY7標(biāo)記KD8單克隆抗體使用APC-CY7標(biāo)記；CD14單克隆抗體、CD56單克隆抗體使用APC標(biāo)記；CD30單克隆抗體、CD69單克隆抗體、CD80單克隆抗體和IgGl單克隆抗體使用FITC標(biāo)記；CD19單克隆抗體使用BV421標(biāo)記。[0007]其中，所述紅細(xì)胞裂解液和PBS緩沖液為本領(lǐng)域常規(guī)試劑。
[0008]其中，所述襯墊(3)上設(shè)有16個(gè)小孔，所述小孔在所述襯墊(3)上分成四排平行排列。
[0009]通過以上技術(shù)方案，本實(shí)用新型的有益效果如下:
[0010](I)本實(shí)用新型的試劑盒結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、設(shè)計(jì)合理，方便攜帶、保存，不易受污染。
[0011](2)本實(shí)用新型的試劑盒在檢測(cè)細(xì)胞活化抗原時(shí)，不涉及細(xì)胞培養(yǎng)，程序簡(jiǎn)單，降低了檢測(cè)工作的強(qiáng)度；對(duì)實(shí)驗(yàn)室條件要求不高，只要有流式細(xì)胞儀的實(shí)驗(yàn)室即可開展檢測(cè)，便于技術(shù)廣泛推廣，檢測(cè)操作時(shí)間短、檢測(cè)精度高，上機(jī)操作和數(shù)據(jù)分析方法簡(jiǎn)單，可以在第一時(shí)間得到臨床所需資料。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0012]圖1為本實(shí)用新型的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0013]圖2-圖5為使用本實(shí)用新型的試劑盒檢測(cè)細(xì)胞活化抗原時(shí)所得的散點(diǎn)圖。
[0014]圖中，1-盒體，2-盒蓋，3-襯墊，4-裝有熒光標(biāo)記⑶Ia單克隆抗體的試劑管，5_裝有熒光標(biāo)記CD3單克隆抗體的試劑管，6-裝有熒光標(biāo)記CD4單克隆抗體的試劑管，7-裝有熒光標(biāo)記CD56單克隆抗體的試劑管，8-裝有熒光標(biāo)記CD30單克隆抗體的試劑管，9-裝有熒光標(biāo)記CD69單克隆抗體的試劑管，10-裝有熒光標(biāo)記CD80單克隆抗體的試劑管，11-裝有熒光標(biāo)記CD86單克隆抗體的試劑管，12-裝有熒光標(biāo)記CD166單克隆抗體的試劑管，13-裝有熒光標(biāo)記CD8單克隆抗體的試劑管，14-裝有熒光標(biāo)記CD14單克隆抗體的試劑管，15-裝有熒光標(biāo)記CD19單克隆抗體的試劑管，16-裝有熒光標(biāo)記IgGl單克隆抗體的試劑管，17-裝有熒光標(biāo)記IgG2a單克隆抗體的試劑管，18-裝有紅細(xì)胞裂解液的試劑管，19-裝有PBS緩沖液的試劑管。
【具體實(shí)施方式】
[0015]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型的【具體實(shí)施方式】作進(jìn)一步描述，本實(shí)用新型的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)將會(huì)隨著描述而更為清楚。但這些實(shí)施例僅是范例性的，并不對(duì)本實(shí)用新型的范圍構(gòu)成任何限制。
[0016]下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0017]下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0018]下述實(shí)施例中使用的流式細(xì)胞儀為美國BD-CantoII (三激光8色)。
[0019]如圖1所示，本實(shí)用新型提供了一種用于檢測(cè)細(xì)胞活化抗原的試劑盒，包括盒體
1、盒蓋2和設(shè)置在盒體I內(nèi)的襯墊3，所述襯墊3上設(shè)有16個(gè)小孔，所述小孔在所述襯墊3上分成四排平行排列，裝有熒光標(biāo)記CDla單克隆抗體的試劑管4、裝有熒光標(biāo)記CD3單克隆抗體的試劑管5、裝有熒光標(biāo)記CD4單克隆抗體的試劑管6、裝有熒光標(biāo)記CD56單克隆抗體的試劑管7、裝有熒光標(biāo)記CD30單克隆抗體的試劑管8、裝有熒光標(biāo)記CD69單克隆抗體的試劑管9、裝有熒光標(biāo)記CD80單克隆抗體的試劑管10、裝有熒光標(biāo)記CD86單克隆抗體的試劑管11、裝有熒光標(biāo)記CD166單克隆抗體的試劑管12、裝有熒光標(biāo)記CD8單克隆抗體的試劑管13、裝有熒光標(biāo)記CD14單克隆抗體的試劑管14、裝有熒光標(biāo)記CD19單克隆抗體的試劑管15、裝有熒光標(biāo)記IgGl單克隆抗體的試劑管16、裝有熒光標(biāo)記IgG2a單克隆抗體的試劑管17裝有紅細(xì)胞裂解液的試劑管18和裝有PBS緩沖液的試劑管19被設(shè)置在所述小孔內(nèi)。
[0020]其中，⑶Ia單克隆抗體、⑶86單克隆抗體、⑶166單克隆抗體和IgG2a單克隆抗體使用PE標(biāo)記KD3單克隆抗體使用PerCP標(biāo)記<D4單克隆抗體使用PE-CY7標(biāo)記KD8單克隆抗體使用APC-CY7標(biāo)記；CD14單克隆抗體、CD56單克隆抗體使用APC標(biāo)記；CD30單克隆抗體、CD69單克隆抗體、CD80單克隆抗體和IgGl單克隆抗體使用FITC標(biāo)記；CD19單克隆抗體使用BV421標(biāo)記。
[0021]其中，所述紅細(xì)胞裂解液購自美國BD公司，所述PBS緩沖液購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。
[0022]檢測(cè)步驟如下:
[0023]I)取四支流式管，分別編號(hào)為I號(hào)管、2號(hào)管、3號(hào)管和4號(hào)管，第一管分別加入 IgGl-FITC20 μ 1、IgG2a-PE20 μ I 的同型對(duì)照；第 二管分別加入 CD30-FITC20 μ 1、CDla-PE20 μ 1、CD3-PerCP20 μ 1、CD4-PE-CY75 μ 1、CD8-APC-CY75 μ 1、CD56-APC5 μ 1、CD19-BV4215 μ I ;第三管分別加入 CD80-FITC20 μ 1、CD86-PE20 μ 1、CD3_PerCP20 μ 1、CD4-PE-CY75 μ 1、CD8-APC-CY75 μ 1、CD14-APC5 μ 1、CD19-BV4215 μ I ;第四管分別加入CD69-FITC20y 1、CD166_PE20y 1、CD3_PerCP20 μ 1、CD4-PE-CY75 μ 1、CD8-APC-CY75 μ 1、CD14-APC5y 1、CD19-BV4215μ I ；
[0024]2)對(duì)待檢測(cè)的外周血采集物或骨髓標(biāo)本進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)，將細(xì)胞濃度調(diào)至3XlOVml,向每個(gè)管內(nèi)分別加入待檢測(cè)的外周血采集物或骨髓標(biāo)本70μ 1，低速渦旋混勻，2 °C至8 °C避光孵育20分鐘；
[0025]3)向每個(gè)管內(nèi)分別加入紅細(xì)胞裂解液1ml，低速渦旋混勻，在2°C至8°C避光裂解紅細(xì)胞10分鐘；
[0026]4)裂解結(jié)束后立即以1500轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，離心結(jié)束后棄上清，然后向各管內(nèi)加入Iml PBS，低速渦旋混勻，以1500轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘；離心結(jié)束后棄上清，向各管內(nèi)加入0.5ml PBS重懸，低速渦旋混勻，24h內(nèi)使用流式細(xì)胞儀上機(jī)檢測(cè)；
[0027]5)在檢測(cè)時(shí)，調(diào)節(jié)好個(gè)通道電壓，收集PI門內(nèi)細(xì)胞10萬，應(yīng)用BDFACSDive軟件分析數(shù)據(jù)。
[0028]檢測(cè)結(jié)果如下:
[0029]數(shù)據(jù)以散點(diǎn)圖形式顯示，如圖2-圖5，分別用CD3+CD4+、CD3+CD8+、SSC-CD14+、SSC-CD19+、SSC-CD56+射門圈定相應(yīng)的細(xì)胞群，再分別看 CD la、CD30、CD80、CD86、CD69、⑶166在以上各群細(xì)胞上的表達(dá)情況，陽性表達(dá)以陰性對(duì)照作為參考。
[0030]上面已經(jīng)舉例說明了本實(shí)用新型的實(shí)施例，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本實(shí)用新型的精神和范圍下可以對(duì)本實(shí)用新型技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行修改或替換，但這些修改和替換均落入本實(shí)用新型的保護(hù)范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種用于檢測(cè)細(xì)胞活化抗原的試劑盒，其特征在于:所述試劑盒包括盒體(I)、盒蓋(2)和設(shè)置在盒體(I)內(nèi)的襯墊(3)，所述襯墊(3)上設(shè)有小孔，裝有熒光標(biāo)記⑶Ia單克隆抗體的試劑管(4)、裝有熒光標(biāo)記CD3單克隆抗體的試劑管(5)、裝有熒光標(biāo)記CD4單克隆抗體的試劑管(6)、裝有熒光標(biāo)記CD56單克隆抗體的試劑管(7)、裝有熒光標(biāo)記CD30單克隆抗體的試劑管(8)、裝有熒光標(biāo)記CD69單克隆抗體的試劑管(9)、裝有熒光標(biāo)記CD80單克隆抗體的試劑管(10)、裝有熒光標(biāo)記CD86單克隆抗體的試劑管(11)、裝有熒光標(biāo)記CD 166單克隆抗體的試劑管(12)、裝有熒光標(biāo)記CD8單克隆抗體的試劑管(13)、裝有熒光標(biāo)記CD14單克隆抗體的試劑管(14)、裝有熒光標(biāo)記CD19單克隆抗體的試劑管(15)、裝有熒光標(biāo)記IgGl單克隆抗體的試劑管(16)、裝有熒光標(biāo)記IgG2a單克隆抗體的試劑管(17)裝有紅細(xì)胞裂解液的試劑管(18)和裝有PBS緩沖液的試劑管(19)被設(shè)置在所述小孔內(nèi)。
2.按照權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于=CDla單克隆抗體、CD86單克隆抗體、CD 166單克隆抗體和IgG2a單克隆抗體使用PE標(biāo)記；CD3單克隆抗體使用PerCP標(biāo)記；CD4單克隆抗體使用PE-CY7標(biāo)記KD8單克隆抗體使用APC-CY7標(biāo)記<D14單克隆抗體、⑶56單克隆抗體使用APC標(biāo)記；CD30單克隆抗體、CD69單克隆抗體、CD80單克隆抗體和IgGl單克隆抗體使用FITC標(biāo)記KD19單克隆抗體使用BV421標(biāo)記。
3.按照權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于:所述襯墊(3)上設(shè)有16個(gè)小孔，所述小孔在所述襯墊(3)上分成四排平行排列。
【文檔編號(hào)】G01N33/577GK203616316SQ201320688939
【公開日】2014年5月28日 申請(qǐng)日期:2013年11月4日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月4日
【發(fā)明者】秦曉明, 王顯鳳, 劉麗媛, 王緒華, 梁超, 方國偉, 黃士昂, 陳忠 申請(qǐng)人:北京海思特臨床檢驗(yàn)所有限公司