一種前列腺腺體細(xì)胞線粒體損傷的檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種前列腺腺體細(xì)胞線粒體損傷檢測(cè)的方法，包括以下檢測(cè)步驟：獲取前列腺液1-2ml，把前列腺液放入加有緩沖液的樣本瓶?jī)?nèi)，在樣本瓶?jī)?nèi)順序加入試劑A1ml，試劑B1ml；混勻，2分鐘內(nèi)觀察顏色變化，與比色板比對(duì)檢測(cè)結(jié)果；本發(fā)明方法簡(jiǎn)單、實(shí)用、快速、靈敏度高。
【專利說明】一種前列腺腺體細(xì)胞線粒體損傷的檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種檢測(cè)方法，具體涉及一種前列腺腺體細(xì)胞線粒體損傷檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]線粒體是人體細(xì)胞中最重要的細(xì)胞器，是細(xì)胞的“動(dòng)力工廠”。對(duì)受損前列腺上皮細(xì)胞線粒體的檢測(cè)包括對(duì)線粒體滲透轉(zhuǎn)換孔(mitochon2dria permeability transit1npore，MPTP)的檢測(cè)、膜磷脂的檢測(cè)、膜電位的檢測(cè)、2mtDNA損傷檢測(cè)、細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度檢測(cè)等。此類檢測(cè)操作十分復(fù)雜，需要精密的儀器設(shè)備，一般實(shí)驗(yàn)室很難完成，使前列腺腺體細(xì)胞線粒體損傷檢測(cè)受到極大限制。在如上高難度檢測(cè)之前，使用一種操作簡(jiǎn)單，成本低廉的方法，對(duì)前列腺腺體細(xì)胞線粒體是否損傷進(jìn)行初步檢測(cè)，會(huì)對(duì)前列腺腺體細(xì)胞線粒體是否損傷起到啟示作用，對(duì)是否需要進(jìn)一步進(jìn)行如上高難度檢測(cè)起到指示作用。因此，研究發(fā)明一種前列腺腺體細(xì)胞線粒體損傷檢測(cè)技術(shù)具有很重要的意義。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0003]為了解決現(xiàn)有技術(shù)中檢測(cè)前列腺腺體細(xì)胞線粒體損傷的方法操作復(fù)雜、設(shè)備昂貴、難以實(shí)施的問題，本發(fā)明提供了一種檢測(cè)前列腺液細(xì)胞游離亞鐵原卟啉、進(jìn)而了解前列腺腺體細(xì)胞線粒體有否損傷的方法，本發(fā)明提供的方法簡(jiǎn)單易行，成本低廉，可快速地檢測(cè)前列腺腺體細(xì)胞線粒體損傷。
[0004]本發(fā)明提供的前列腺腺體細(xì)胞線粒體損傷檢測(cè)的方法，包括以下檢測(cè)步驟:
1)獲取前列腺液l-2ml；
2)把前列腺液放入樣本瓶?jī)?nèi)，樣本瓶?jī)?nèi)預(yù)裝有醋酸緩沖液，緩沖液的量為2ml,使前列腺液與樣本保存液混勻，得樣本液；優(yōu)選的，醋酸緩沖液PH值為4.5 ;
3)在樣本瓶?jī)?nèi)順序加入試劑A1ml，試劑B Iml ;混勻，2分鐘內(nèi)觀察顏色變化，與比色板比對(duì)檢測(cè)結(jié)果；
所述試劑A為二(4.二甲氨基苯基)甲烷，用甲醇溶解后配制成溶液；優(yōu)選的，二(4.二甲氨基苯基)甲烷溶液濃度為0.002mol/L ；
所述試劑B為過氧化氫溶液；優(yōu)選的，過氧化氫溶液為1.5%。
[0005]在某些因素的作用下，前列腺腺體細(xì)胞穩(wěn)態(tài)失調(diào)，出現(xiàn)能量代謝重編程。前列腺上皮細(xì)胞代謝出現(xiàn)瓦博格氏效應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)低氧和還原態(tài)微環(huán)境，激活氧感受器和缺氧信號(hào)傳導(dǎo)通路，促使缺氧特異性轉(zhuǎn)錄因子-低氧誘導(dǎo)因子和第二信使-活性氧族活性增高，改變細(xì)胞色素等細(xì)胞蛋白的極性量值，使位居蛋白疏水核中的細(xì)胞游離亞鐵原卟啉(Cells Free Ferrous Protoporphyrin )析出。細(xì)胞游離亞鐵原卩卜啉催生多種自由基，弓丨起細(xì)胞膜脂質(zhì)、脂蛋白、細(xì)胞骨架、DNA等的氧化損傷，可使線粒體出現(xiàn)線粒體單價(jià)電子滲漏(univalent leak);胞內(nèi)Ca2+超載,觸發(fā)線粒體攝取Ca2+并使Ca2+在線粒體內(nèi)積聚；抑制線粒體內(nèi)脫氫酶的功能；以上改變可使線粒體腫脹、嵴斷裂崩解、鈣鹽沉積、外膜破裂和基質(zhì)外溢。細(xì)胞游離亞鐵原卟啉析出量與前列腺腺體細(xì)胞線粒體損傷程度呈正相關(guān)。細(xì)胞游離亞鐵原R卜啉析出后可在前列腺液中測(cè)及。作為檢測(cè)手段，測(cè)定前列腺液中細(xì)胞游離亞鐵原卟啉含量，即可提示前列腺腺體細(xì)胞線粒體是否損傷。
本發(fā)明提供的檢測(cè)方法，簡(jiǎn)單實(shí)用，成本低廉，可快速的檢測(cè)出前列腺腺體細(xì)胞中不含細(xì)胞游離亞鐵原卟啉的樣本、含細(xì)胞游離亞鐵原卟啉的的樣本和可能含有細(xì)胞游離亞鐵原卟啉的的樣本，進(jìn)而了解前列腺腺體細(xì)胞線粒體有否損傷，為進(jìn)一步檢查做準(zhǔn)備；本發(fā)明可檢測(cè)出的最低細(xì)胞游離亞鐵原卟啉的濃度可達(dá)5ng/ml，，靈敏度高。
【具體實(shí)施方式】
[0006]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說明。
[0007]實(shí)施例1
1)獲取前列腺液1-2；
2)把前列腺液放入樣本瓶?jī)?nèi)，樣本瓶?jī)?nèi)預(yù)裝有PH值為4.5醋酸緩沖液，緩沖液的量為2ml，使前列腺液與樣本保存液混勻，得樣本液；
3)在樣本瓶?jī)?nèi)順序加入試劑A1ml，試劑B Iml ;混勻，2分鐘內(nèi)觀察顏色變化，與比色板比對(duì)檢測(cè)結(jié)果；
所述試劑A為二(4.二甲氨基苯基)甲烷，用甲醇溶解后配制成溶液；優(yōu)選的，二(4.二甲氨基苯基)甲烷溶液濃度為0.002mol/L ； 所述試劑B為1.5%過氧化氫溶液。
[0008]【判定標(biāo)準(zhǔn)】
樣本瓶?jī)?nèi)液體不顯色或顯微藍(lán)色(一)陰性藍(lán)色(+ )陽性
深藍(lán)色 (++)強(qiáng)陽性
顯深藍(lán)色后即刻轉(zhuǎn)為深黃色或棕紅色 (+++) 強(qiáng)陽性顯示標(biāo)本內(nèi)可能混有血液。若出現(xiàn)泡沫樣物，顯示標(biāo)本內(nèi)可能混有血液較多。
[0009]驗(yàn)證試驗(yàn):
分別取檢測(cè)為不顯色、顯示藍(lán)色和深藍(lán)色的樣品各三例，用質(zhì)譜分析儀進(jìn)行細(xì)胞游離亞鐵原卟啉檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果如下:不顯色均未測(cè)及細(xì)胞游離亞鐵原卟啉；藍(lán)色為5 ng/ml，22ng/ml、131ng/ml ;深藍(lán)色為 207ng/ml、0.12 μ g/ml、0.37 μ g/ml。
[0010]通過以上數(shù)據(jù)可以看出，對(duì)細(xì)胞游離亞鐵原卟啉含量在5ng/ml以上的樣本，本檢測(cè)方法就可以初步的判斷，含量在20ng/L以上的滲液本檢測(cè)方法就可以確定為前列腺液中含有細(xì)胞游離亞鐵原卟啉，提示前列腺腺體細(xì)胞線粒體損傷，所以本檢測(cè)方法的實(shí)用性強(qiáng)。
【權(quán)利要求】
1.本發(fā)明提供的前列腺腺體細(xì)胞線粒體損傷的檢測(cè)方法，包括以下檢測(cè)步驟: 1)獲取前列腺液l-2ml； 2)把前列腺液放入樣本瓶?jī)?nèi)，樣本瓶?jī)?nèi)預(yù)裝有醋酸緩沖液，緩沖液的量為2ml,使前列腺液與樣本保存液混勻，得樣本液； 3)在樣本瓶?jī)?nèi)順序加入試劑A1ml，試劑B Iml ;混勻，2分鐘內(nèi)觀察顏色變化，與比色板比對(duì)檢測(cè)結(jié)果； 所述試劑A為二(4.二甲氨基苯基)甲烷，用甲醇溶解后配制成溶液； 所述試劑B為過氧化氫溶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所屬的醋酸緩沖液的PH值為4.5。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述的二(4.二甲氨基苯基)甲烷溶液濃度為0.002mol/Lo
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述的過氧化氫溶液的濃度為1.5%。
【文檔編號(hào)】G01N21/78GK104076033SQ201410329741
【公開日】2014年10月1日 申請(qǐng)日期:2014年7月11日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月11日
【發(fā)明者】溫鑫, 崔子倫 申請(qǐng)人:青島貝爾奧生物科技有限公司
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