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一種同時(shí)測(cè)定酒花中七種黃酮類(lèi)物質(zhì)的方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種同時(shí)檢測(cè)酒花中七種黃酮類(lèi)物質(zhì)的方法，屬于化學(xué)分析檢測(cè)領(lǐng)域。本發(fā)明利用反相高效液相色譜同時(shí)檢測(cè)酒花中黃腐酚、異黃腐酚、6-異戊二烯基黃酮、8-異戊二烯基黃酮、六甲氧基黃酮、山奈酚3-O-蕓香糖苷、槲皮素共7種物質(zhì)。本發(fā)明的方法尤其適用于檢測(cè)酒花中黃酮類(lèi)物質(zhì)含量的變化關(guān)系、檢測(cè)啤酒生產(chǎn)過(guò)程中黃酮類(lèi)物質(zhì)的變化，以及考察啤酒的抗氧化功效及營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。本發(fā)明方法穩(wěn)定性和重現(xiàn)性好，操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確可靠。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種同時(shí)測(cè)定酒花中七種黃酮類(lèi)物質(zhì)的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種同時(shí)檢測(cè)酒花中七種黃酮類(lèi)物質(zhì)的方法，尤其是一種采用反相高效液相色譜同時(shí)檢測(cè)酒花中黃腐酚、異黃腐酚等七種黃酮類(lèi)物質(zhì)的方法，屬于化學(xué)分析檢測(cè)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]酒花同釀造用水、麥芽、酵母并稱(chēng)為啤酒釀造的四大原料。相比之下，盡管酒花在啤酒中的添加量很少，但其對(duì)于啤酒最終的品質(zhì)卻有著很大的影響，主要體現(xiàn)在改善啤酒風(fēng)味、提聞啤酒的非生物穩(wěn)定性、提聞營(yíng)養(yǎng)價(jià)值二個(gè)方面。
[0003]相關(guān)研究顯示，與添加酒花的啤酒相比，未添加酒花的啤酒帶有明顯的不愉快麥芽風(fēng)味，同時(shí)甜味、乙醇味過(guò)于濃厚，整體感官風(fēng)味質(zhì)量較差。更值得關(guān)注的是，酒花是很多天然產(chǎn)物的重要來(lái)源，黃酮即為其中重要的一種。黃酮隸屬于植物多酚物質(zhì)，具有重要的抗氧化性和金屬螯合性質(zhì)，藥理學(xué)和生物學(xué)特性顯著，對(duì)提高啤酒的非生物穩(wěn)定性和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值方面有著很大的研究意義和價(jià)值。除酒花外，水果、蔬菜、茶葉、可可粉等也是黃酮類(lèi)物質(zhì)的重要來(lái)源，至今，已有4000種黃酮類(lèi)物質(zhì)被發(fā)現(xiàn)和鑒定，但是研究表明，酒花是目前發(fā)現(xiàn)的天然含異戊二烯基黃酮的唯一來(lái)源。在人類(lèi)的飲食中，主要通過(guò)飲用啤酒來(lái)攝取這類(lèi)黃酮物質(zhì)。
[0004]為進(jìn)一步研究酒花中的黃酮類(lèi)物質(zhì)，首先要建立準(zhǔn)確的含量檢測(cè)方法。酒花中的重要功能成分，例如苦味酸、單酚等已經(jīng)建立了較為成熟的液相檢測(cè)方法，而對(duì)于多種黃酮類(lèi)物質(zhì)的同時(shí)檢測(cè)，并沒(méi)有高效且精確的方法。因此為便于監(jiān)測(cè)啤酒的發(fā)酵過(guò)程，通過(guò)該類(lèi)黃酮物質(zhì)的含量來(lái)考察啤酒的抗氧化功效及營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，急需建立高效精確的液相檢測(cè)方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種同時(shí)檢測(cè)酒花中七種黃酮類(lèi)物質(zhì)的方法，尤其是一種采用反相高效液相色譜同時(shí)檢測(cè)酒花中黃腐酚、異黃腐酚等七種黃酮類(lèi)物質(zhì)的方法。
[0006]所述七種黃酮類(lèi)物質(zhì)是黃腐酚、異黃腐酚、6-異戊二烯基黃酮、8-異戊二烯基黃酮、六甲氧基黃酮、山奈酚3-0-蕓香糖苷和槲皮素。
[0007]所述方法包括如下步驟:
[0008]a.酒花樣品制備:酒花顆粒樣品經(jīng)粉碎磨成粉末狀后，精確稱(chēng)量Ig酒花粉末加入7mL無(wú)水乙醚搖動(dòng)15min后超聲波5min, 1500 Xg離心IOmin,去除上清液,再加入20mL50%(v/v)甲醇溶液搖動(dòng)15min后超聲60min, 1500 X g離心IOmin,上清液經(jīng)0.45 μ m微孔濾膜過(guò)濾，存于樣品瓶中準(zhǔn)備進(jìn)樣。
[0009]b.標(biāo)樣制備:精確稱(chēng)取黃酮標(biāo)準(zhǔn)品0.0OlOg用色譜級(jí)甲醇充分溶解，定容到10mL，按照需要稀釋成不同濃度，充分混勻，用0.45 μ m有機(jī)濾膜過(guò)濾，冷凍保存?zhèn)溆?，?zhǔn)備進(jìn)樣。
[0010]C.色譜條件如下:[0011]色譜柱:ZorbaxEclipseXDB-C18(4.6 X 250mm, 5m)；
[0012]流動(dòng)相:有機(jī)B相為乙腈；無(wú)機(jī)A相為含有甲酸0.1% (v/v)的水溶液；
[0013]進(jìn)樣體積10 μ L，流速 0.8mL/min，柱溫 30°C ；
[0014]檢測(cè)波長(zhǎng):280nm及 370nm ；
[0015]采用梯度洗脫方法，洗脫程序?yàn)?0-20min，25%B-80%B；20-25min,80%B-100%B ；25-28min,100%B-100%B ;28_30min,100%B_25%B。
[0016]本發(fā)明提供的檢測(cè)方法可將酒花中的黃腐酚、異黃腐酚、6-異戊二烯基黃酮、8-異戊二烯基黃酮、六甲氧基黃酮、山奈酚3-0-蕓香糖苷和槲皮素這7種物質(zhì)一次性分離開(kāi)，操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確可靠，節(jié)省時(shí)間。此外，由于黃酮類(lèi)物質(zhì)種類(lèi)繁多、在酒花中含量較低，本方法相比其他黃酮檢測(cè)方法，對(duì)七種化合物都能獲得較好的分離效果。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0017]圖1是黃酮標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖；1，山奈酚3-0蕓香糖苷；2，槲皮素；3，異黃腐酚；4，六甲氧基黃酮；5，8-異戊二烯基黃酮；6，6-異戊二烯基黃酮；7，黃腐酚。
[0018]圖2是酒花顆粒樣品色譜圖；1，山奈酚3-0蕓香糖苷；2，槲皮素；3，異黃腐酚；4，六甲氧基黃酮；5，8-異戊二烯基黃酮；6，6-異戊二烯基黃酮；7，黃腐酚。
【具體實(shí)施方式】
[0019]實(shí)施例17種黃酮類(lèi)物質(zhì)的標(biāo)樣檢測(cè)
[0020]精確稱(chēng)取黃酮標(biāo)準(zhǔn)品0.0OlOg用色譜級(jí)甲醇充分溶解，定容到10mL，按照需要稀釋成不同濃度，準(zhǔn)備進(jìn)樣存于樣品瓶中，進(jìn)樣分析。
[0021 ] 反相液相色譜分析條件:
[0022]色譜柱:ZorbaxEclipse XDB-C18 (4.6 X 250mm, 5m);
[0023]進(jìn)樣體積10 μ L,流速 0.8mL/min,柱溫 30°C ；
[0024]檢測(cè)波長(zhǎng):280nm及 370nm ；
[0025]流動(dòng)相:有機(jī)B相為乙腈，無(wú)機(jī)A相為含有0.1% (v/v)甲酸的水溶液；采用梯度洗脫方法，洗脫程序?yàn)?0-20min,25%B-80%B ;20_25min,80%B_100%B ;25_28min，100%B-100%B ；28-30min,100%B_25%B。
[0026]所得標(biāo)樣色譜圖如圖1所示，峰I為山奈酚3-0蕓香糖苷，峰2為槲皮素，峰3為異黃腐酚，峰4為六甲氧基黃酮，峰5為8-異戊二烯基黃酮，峰6為6-異戊二烯基黃酮，峰7為黃腐酚。
[0027]所得7種標(biāo)準(zhǔn)樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線及檢測(cè)線范圍如表I所示。
[0028]表1.本檢測(cè)方法檢測(cè)七種黃酮類(lèi)物質(zhì)的線性方程及檢測(cè)范圍
[0029]
【權(quán)利要求】
1.一種同時(shí)測(cè)定酒花中七種黃酮類(lèi)物質(zhì)的方法，其特征在于，所述七種黃酮類(lèi)物質(zhì)是黃腐酚、異黃腐酚、6-異戊二烯基黃酮、8-異戊二烯基黃酮、六甲氧基黃酮、山奈酚3-0-蕓香糖苷和槲皮素；所述方法包括以下步驟: 1)樣品制備:酒花顆粒樣品經(jīng)粉碎磨成粉末狀后，稱(chēng)量Ig酒花粉末加入7mL無(wú)水乙醚搖動(dòng)15min后，超聲處理5min，1500 Xg離心lOmin，去除上清液，再加入20mL50%甲醇溶液搖動(dòng)15min后,超聲處理60min, 1500 Xg離心IOmin,上清液經(jīng)0.45 μ m微孔濾膜過(guò)濾,存于樣品瓶中準(zhǔn)備進(jìn)樣； 2)將步驟I)制備好的樣品用反相高效液相色譜分析，分析條件如下: 色譜柱:ZorbaxEclipseXDB_C18 ； 進(jìn)樣體積10 μ L,流速0.8mL/min,柱溫30°C ； 檢測(cè)波長(zhǎng):280nm及370nm; 流動(dòng)相:有機(jī)B相為乙腈；無(wú)機(jī)A相為含有體積分?jǐn)?shù)為0.1%的甲酸的水溶液； 采用梯度洗脫，洗脫程序?yàn)?0-20min，25%B-80%B ；20-25min,80%B-100%B ;25_28min，100%B-100%B ；28-30min,100%B_25%B。
【文檔編號(hào)】G01N30/89GK103852552SQ201410089061
【公開(kāi)日】2014年6月11日 申請(qǐng)日期:2014年3月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月12日
【發(fā)明者】劉春鳳, 李佳, 李崎, 王金晶, 李永仙, 鄭飛云 申請(qǐng)人:江南大學(xué)