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專利名稱：一種能與核酸信標(biāo)發(fā)生特異性作用的物質(zhì)的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種能與核酸信標(biāo)發(fā)生特異性作用的物質(zhì)的檢測(cè)方法，屬于分子信標(biāo)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
傳統(tǒng)的分子信標(biāo)是在發(fā)夾結(jié)構(gòu)信標(biāo)分子兩端同時(shí)標(biāo)記小分子，如德克薩斯紅(Texas Red)、突光素(Fluoresein)等作突光基團(tuán),4_(4’ - 二甲基氨基偶氮苯基)苯甲酸(DABCYL)等作猝滅基團(tuán)。自由狀態(tài)時(shí)，這兩類分子靠近(約為疒10 nm)，發(fā)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移，熒光基團(tuán)發(fā)出的熒光被猝滅分子吸收。當(dāng)檢測(cè)體系中加入與信標(biāo)分子堿基相互作用的待測(cè)樣品(互補(bǔ)的單鏈DNA/RNA，與信標(biāo)環(huán)適配體區(qū)域特異性作用的分子等)后，形成雜交體，信標(biāo)莖桿互補(bǔ)區(qū)被拉開，熒光基團(tuán)與猝滅基團(tuán)的距離增大，熒光得到回升。通過(guò)檢測(cè)熒光信號(hào)的響應(yīng)則可對(duì)待測(cè)樣品的含量進(jìn)行測(cè)定。這類分子信標(biāo)從操作難以程度上來(lái)說(shuō)，可以克服生物分子檢測(cè)中異相分析手段(如酶聯(lián)免疫法、化學(xué)發(fā)光免疫、放射性免疫等)需要洗滌分離的缺點(diǎn)，但是在信標(biāo)莖兩端分別標(biāo)記兩種基團(tuán)，一般費(fèi)時(shí)費(fèi)力，價(jià)格昂貴。就已有報(bào)道的單標(biāo)記分子信標(biāo)體系而言，具有石墨結(jié)構(gòu)的碳材料，如石墨烯/氧化石墨烯、碳納米管、C60、C70等，由于其所富含的π電子，使之能與分子信標(biāo)單鏈DNA上的堿基中芳環(huán)結(jié)構(gòu)所賦予的η電子進(jìn)行η — η堆積，以非共價(jià)鍵結(jié)合在一起，因此只需對(duì)信標(biāo)一端進(jìn)行熒光基團(tuán)的單標(biāo)記。但是上述碳材料都較難以制備，多需要購(gòu)買特殊的制備原料或使用較為復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)條件，制備周期長(zhǎng)，成本也不夠低；且制備過(guò)程或分散過(guò)程均要使用有機(jī)溶劑，這樣會(huì)大大降低材料的生物相容性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題為克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種能與核酸信標(biāo)發(fā)生特異性作用的物質(zhì)的檢測(cè)方法。本發(fā)明為解決上述技術(shù)問(wèn)題提供的技術(shù)方案為:一種能與核酸信標(biāo)發(fā)生特異性作用的物質(zhì)的檢測(cè)方法，以碳納米顆粒為熒光受體，包括以下步驟:
一種能與核酸信標(biāo)發(fā)生特異性作用的物質(zhì)的檢測(cè)方法，以碳納米顆粒為熒光受體，其特征在于:包括以下步驟:
I)配制兩組體積相同濃度相同的一端標(biāo)記過(guò)熒光基團(tuán)的核酸信標(biāo)的系列標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶
液；
2)向第一組一端標(biāo)記過(guò)熒光基團(tuán)的核酸信標(biāo)的系列標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液中加入體積不同濃度相同的碳納米顆粒溶液，得到體積不同的系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液；向每個(gè)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液中補(bǔ)加緩沖溶液，使每個(gè)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積相同，孵育3(T60 min ;然后對(duì)每個(gè)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行熒光檢測(cè)，得到熒光猝滅效率最大時(shí)所需的碳納米顆粒溶液的體積；
3)以第二組一端標(biāo)記過(guò)熒光基團(tuán)的核酸信標(biāo)的系列標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液中的一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液作為空白溶液不加入待測(cè)樣品，其余的標(biāo)準(zhǔn)溶液分別加入相同濃度不同體積的待測(cè)樣品，得到體積不同的系列混合待測(cè)樣品標(biāo)準(zhǔn)溶液；然后向每個(gè)混合待測(cè)樣品標(biāo)準(zhǔn)溶液中補(bǔ)加緩沖溶液，使每個(gè)混合待測(cè)樣品標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積相同，孵育2(T120 min ;向每個(gè)混合待測(cè)樣品標(biāo)準(zhǔn)溶液中加入與步驟2 )中熒光猝滅效率最大時(shí)相同體積的碳納米顆粒溶液，得到系列樣品標(biāo)準(zhǔn)溶液，孵育3(T60 min，測(cè)定每個(gè)樣品標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度，空白溶液的熒光強(qiáng)度為F0，對(duì)每個(gè)樣品標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度與空白溶液的熒光強(qiáng)度H)的比值和待測(cè)樣品的濃度進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制；
4)向未知濃度的待測(cè)樣品中加入與步驟3)中體積相同濃度相同的一端標(biāo)記過(guò)熒光基團(tuán)的核酸信標(biāo)的系列標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液并補(bǔ)加緩沖溶液，得到混合待測(cè)樣品溶液，使該混合待測(cè)樣品溶液與步驟3)中每個(gè)混合待測(cè)樣品標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積相同，孵育2(Tl20min ;加入與步驟3)中相同體積的碳納米顆粒溶液，孵育3(T60min后，測(cè)定溶液的熒光強(qiáng)度，計(jì)算其與步驟3)中空白溶液熒光強(qiáng)度H)的比值，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到該待測(cè)樣品的濃度。所述碳納米顆粒包括十二燒基苯磺酸鈉穩(wěn)定的碳納米顆粒或水溶性氧化碳納米顆粒；所述熒光基團(tuán)包括有機(jī)染料或熒光納米顆粒。所述能夠與一端標(biāo)記過(guò)熒光基團(tuán)的核酸信標(biāo)發(fā)生特異性相互作用的物質(zhì)包括單鏈核酸或三磷酸腺苷。
本發(fā)明涉及到碳納米顆粒的制備方法，具體步驟如下:
(I)十二烷基苯磺酸鈉穩(wěn)定的碳納米顆粒的制備:點(diǎn)燃日用照明蠟燭(普通蠟燭)，用潔凈玻璃片在蠟燭火焰外焰上來(lái)回移動(dòng)， 收集黑色蠟燭灰8 mg，置于50 mL圓底燒瓶中，加入10 mL無(wú)水乙醇，10 mL超純水。將混合溶液放置在超聲儀中，功率360W，超聲2.5 h。所得的黑色溶液以3000 rpm離心2 min,上清液以6000 rpm離心6 min,得黑色沉淀。真空干燥后，稱取3 mg溶于30 mL 0.02% (wt)的十二燒基苯磺酸鈉水溶液中超聲分散備用。(2)水溶性氧化碳納米顆粒的制備:將按(I)中方法得到的8 mg新鮮蠟燭灰置于50 mL圓底燒瓶中，加入15 mL，6 mol/L的硝酸溶液，于115°C冷凝回流10 h。溶液冷卻至室溫后用碳酸鈉固體調(diào)節(jié)溶液pH至中性，于12000 rpm離心20 min，得到黑色沉淀用超純水洗滌三次。于真空干燥箱中干燥。使用前用超純水配成一定濃度的溶液，超聲分散備用。本發(fā)明方法構(gòu)建了一個(gè)“熒光基團(tuán)-信標(biāo)鏈-碳納米顆?！钡纳锓肿訖z測(cè)平臺(tái)，即將信標(biāo)鏈一端標(biāo)記上熒光供體材料(有機(jī)染料、熒光納米材料等)后，向體系中直接加入碳納米顆粒(十二燒基苯磺酸鈉穩(wěn)定的碳納米顆粒、水溶性氧化碳納米顆粒等)，則在激發(fā)光的照射下，熒光團(tuán)發(fā)出的熒光被碳納米顆粒吸收，熒光被猝滅。向體系中加入不同濃度的待測(cè)樣品，信標(biāo)環(huán)與之發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)作用拉開熒光供體材料與碳納米顆粒的距離，熒光得以恢復(fù)；通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到待測(cè)樣品的濃度。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明所述的基于碳納米顆粒的納米信標(biāo)檢測(cè)平臺(tái)有如下優(yōu)點(diǎn):
1.與傳統(tǒng)分子信標(biāo)相比，此單標(biāo)記體系的構(gòu)建操作簡(jiǎn)便，只需對(duì)信標(biāo)鏈一端標(biāo)記上熒光基團(tuán)。2.與使用其他碳材料作熒光受體的體系相比，碳納米顆粒的制備簡(jiǎn)化了受體材料的制備難度，無(wú)需購(gòu)買昂貴的原料，材料的生物相容性得以提高，可高效、靈敏、迅速、低成本地對(duì)生物分子進(jìn)行檢測(cè)。


圖1為實(shí)施例1中的熒光檢測(cè)情況，其中，圖1A為本實(shí)施例的信標(biāo)鏈TAMRA-SSDNA和體系的熒光檢測(cè)情況；圖1B為本實(shí)施例的目標(biāo)DNA和體系的熒光檢測(cè)情況。圖2為實(shí)施例2中熒光檢測(cè)情況，其中，圖2A為本實(shí)施例的信標(biāo)鏈ssDNA和體系的熒光檢測(cè)情況；圖2B為本實(shí)施例的目標(biāo)DNA和體系的熒光檢測(cè)情況。圖3為實(shí)施例3中的熒光檢測(cè)情況，其中，圖3A為本實(shí)施例的信標(biāo)鏈ssDNA和體系的熒光檢測(cè)情況；圖3B為本實(shí)施例加入三磷酸腺苷的熒光檢測(cè)情況。圖4為實(shí)施例1和2中所使用的碳納米顆粒的表征數(shù)據(jù)圖，其中，4A為透射電鏡圖；4B為X射線粉末衍射圖；4C為Raman譜圖；4D為UV-Vis圖；4E為FT-1R圖。圖5為實(shí)施例3中所使用的氧化碳納米顆粒的表征數(shù)據(jù)圖，其中，5A為透射電鏡圖；5B為X射線粉末衍射圖；5C為Raman譜圖；為UV-Vis圖；5E為FT-1R圖。
具體實(shí)施例方式為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。實(shí)施例1
取 3 μ M 四甲基羅丹明-單鏈 DNA (TAMRA-ssDNA) Tris-HCl (10 mM，pH 為 7.4，含0.15 M的NaCl,下同)溶液6 μ L,分別加入不同體積的0.1 mg/mL十二燒基苯磺酸鈉穩(wěn)定的碳納米顆粒溶液(SDBS-CNPs))，補(bǔ)加Tris-HCl定容到600 μ L，使SDBS-CNPs濃度為0、0.01、0.015、0.02、0.025、0.03、0.035、0.04、0.045、0.05、0.055 mg/mL，37°C孵育 I h 后檢測(cè)下轉(zhuǎn)換熒光。配制一系列含不同濃度目標(biāo)DNA的Tris-HCl溶液(0，0.5，I, 5，10，30，50 和 100 nM)，42°C孵育 2 h 后，加入 SDBS-CNPs 溶液使之濃度為 0.055 mg/mL。37°C孵育40 min,檢測(cè)下轉(zhuǎn)換突光，對(duì)目標(biāo)DNA的濃度和樣品突光強(qiáng)度與不含目標(biāo)DNA樣品的突光強(qiáng)度的比值作圖。對(duì)于未知濃度的樣品，向其中加入6 UL, 3 μ M TAMRA-ssDNA溶液，補(bǔ)加Tris-HCl定容至Ij 600 μ L，42°C孵育2 h后，加入SDBS-CNPs溶液，補(bǔ)加Tris-HCl定容至Ij600 μ L，使SDBS-CNPs濃度為0.055 mg/mL，37°C孵育40 min，測(cè)定溶液的熒光強(qiáng)度，計(jì)算其與不含目標(biāo)DNA的樣品熒光強(qiáng)度H)的比值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上得到未知樣品中目標(biāo)DNA的濃度。圖1A表明所選用的熒光受體碳納米顆?？梢杂行р缬袡C(jī)染料TAMRA的熒光；圖1B表明基于本發(fā)明方法所構(gòu)建的納米信標(biāo)，能夠?qū)σ欢舛确秶鷥?nèi)的單鏈目標(biāo)DNA有所響應(yīng)。IB中被指出的點(diǎn)為未知目標(biāo)DNA濃度的樣品，從F/R)的值可得到目標(biāo)DNA濃度為22nMo如圖1所示。實(shí)施例2
Cl)上轉(zhuǎn)換熒光納米顆粒(UCPs)的制備:取2 ml 0.25 mo I/L的稀土硝酸鹽溶液(其中稀土離子摩爾比為釔離子:鐿離子:鉺離子=80:18:2，向其中加入18 ml無(wú)水乙醇，再加入含900 mg聚丙烯酸的水溶液8 ml,攪拌10 min ;向上述混合溶液中加入含0.210 g氟化鈉的水溶液8 ml，繼續(xù)攪拌20 min后，置于高壓反應(yīng)釜中，在攪拌條件下于200°C水熱反應(yīng)10 h ;停止加熱并保持?jǐn)嚢枥鋮s至室溫，離心分離出固體產(chǎn)物，用無(wú)水乙醇和超純水各洗3次，室溫下真空干燥12 h，得到表面帶有羧基的上轉(zhuǎn)換熒光納米顆粒。
(2) UCPs的表面標(biāo)記:5 mg上步制得的上轉(zhuǎn)換納米顆粒溶于2 mL 10 mM，pH為
5.5的MES緩沖液，置于30°C，轉(zhuǎn)速為150 rpm恒溫振蕩器中依次滴加2 mM (含0.76 mg)EDC.HCl,5 mM (含 2.2 mg) SuIfo-NHS，孵育 2 h。反應(yīng)后的溶液于 9000 rpm 離心 6 min,用高純水洗滌二次，加入溶含2.5 M信標(biāo)DNA的2 mL 10 mM, pH為7.2的HEPES溶液，以同樣條件孵育4 h后,9000 rpm離心6 min,高純水洗漆三次,溶于Tris-HCl (10 mM,含0.15MNaCl，pH為7.4)緩沖中，，4°C保存?zhèn)溆谩?3)將0.03 mg/mL標(biāo)記后的信標(biāo)DNA-上轉(zhuǎn)換熒光納米顆粒(信標(biāo)DNA-UCPs)復(fù)合物與含不同濃度的 SDBS-CNPs (O, 0.01, 0.02, 0.03, 0.035, 0.04 和 0.05 mg/mL)Tris-HCl溶液600 yL，25°C孵育40 min，使用980 nm激發(fā)光檢測(cè)上轉(zhuǎn)換熒光。向含0.03mg/mL信標(biāo)DNA-UCPs，0.045 mg/mL SDBS-CNPs的Tris-HCl溶液中加入不同濃度的目標(biāo)DNA (O, 0.1, 0.5, I, 5，10, 30,和 50 nM)，42°C孵育 20 min，使用 980 nm激發(fā)光檢測(cè)上轉(zhuǎn)換熒光，計(jì)算加入了目標(biāo)DNA的樣品熒光強(qiáng)度F與不含目標(biāo)DNA的樣品熒光強(qiáng)度H)的比值，以目標(biāo)DNA濃度對(duì)F/R)的比值作圖得到標(biāo)準(zhǔn)曲線。對(duì)于未知濃度的樣品，加入信標(biāo)DNA-UCPs, SDBS-CNPs 的 Tris-HCl 溶液，補(bǔ)加 Tris-HCl 溶液至 600 μ L,使信標(biāo) DNA-UCPs、SDBS-CNPs濃度分別為0.03 mg/mL,0.045 mg/mL，42°C孵育20 min后，測(cè)定溶液的熒光強(qiáng)度，計(jì)算其與不含目標(biāo)DNA的樣品熒光強(qiáng)度H)的比值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上得到未知樣品中目標(biāo)DNA的濃度。圖2A表明所選用的熒光受體碳納米顆?？梢杂行р缟限D(zhuǎn)換納米材料的熒光；圖2B表明基于本發(fā)明方法所構(gòu)建的納米信標(biāo)，能夠?qū)σ欢舛确秶鷥?nèi)的單鏈目標(biāo)DNA有所響應(yīng)；2B中被圈出的點(diǎn)為未知濃度的目標(biāo)DNA樣品，從F/R)的值可得到目標(biāo)DNA濃度為17nMo如圖2所示。從實(shí)施例1和實(shí)施例2中的碳納米顆粒的表征數(shù)據(jù)可以看出:圖4A經(jīng)測(cè)量統(tǒng)計(jì)，所使用的碳納米顆粒平均粒徑為42 nm ;圖4B、圖4C說(shuō)明碳納米顆粒具有石墨碳的結(jié)構(gòu)特征；圖4D表明碳納米顆粒具有很寬的吸收譜帶，可用于與許多熒光供體發(fā)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移效應(yīng)。如圖4所示。實(shí)施例3
取30 μ L 0.6 mg/mL標(biāo)記過(guò)信標(biāo)DNA的UCPs Tris-HCl溶液(UCPs的合成及標(biāo)記方法與實(shí)施例2中的相同)，加入不同量的氧化碳納米顆粒(CNPs oxide)水溶液，定容到600 UL0 30°C孵育90 min后，使用980 nm激發(fā)光檢測(cè)上轉(zhuǎn)換熒光。向含0.03 mg/mL的信標(biāo)DNA-UCPs、0.04 mg/mL CNPs oxide的Tris-HCl溶液中加入不同量的三磷酸腺苷(ΑΤΡ)，30°C孵育90 min后用980 nm激發(fā)光測(cè)量上轉(zhuǎn)換熒光，計(jì)算加入了 ATP的樣品熒光強(qiáng)度F與不含ATP的樣品熒光強(qiáng)度H)的比值，以ATP濃度對(duì)F/R)的比值作圖得到標(biāo)準(zhǔn)曲線。對(duì)于未知濃度的樣品，向其中加入信標(biāo)DNA-UCPs溶液、CNPs oxide水溶液補(bǔ)加Tris-HCl定容到 600 μ L，使信標(biāo) DNA-UCPs、CNPs oxide 的濃度分別為 0.03 mg/mL,0.04 mg/mL, 30°C孵育90 min后用980 nm激發(fā)光測(cè)量上轉(zhuǎn)換熒光強(qiáng)度，計(jì)算其與不含ATP的樣品熒光強(qiáng)度FO的比值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上得到未知樣品中ATP的濃度。圖3A表明所選用的熒光受體氧化碳納米顆粒可以在一定程度上猝滅上轉(zhuǎn)換納米材料的熒光；圖3B表明基于本發(fā)明方法所構(gòu)建的納米信標(biāo)，能夠?qū)σ欢舛确秶鷥?nèi)的ATP產(chǎn)生線性響應(yīng)；3B中被圈出的點(diǎn)為未知濃度的ATP樣品，從F/R)的值可得到ATP濃度為140μ Mo如圖3所示。從實(shí)施例3中的碳納米顆粒的表征數(shù)據(jù)可以看出:圖5Α經(jīng)測(cè)量統(tǒng)計(jì)，所使用的氧化碳納米顆粒平均粒徑為36 nm ;圖5B說(shuō)明氧化碳納米顆粒具有很寬的吸收譜帶，可用于與許多熒光供體發(fā)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移效應(yīng)；圖5C、圖表明氧化碳納米顆粒也具有石墨碳的結(jié)構(gòu)特征，并且較圖4B而言XRD譜圖的衍射峰向小角度的位移、較圖4C而言Raman譜圖上的ID/Ie值的減小都進(jìn)一步說(shuō)明了碳納米顆粒被部分氧化；圖5E中FT-1R譜圖與圖4E相比，1394 cm-1的吸收證明了經(jīng)硝酸氧化后碳納米顆粒表面羧基的存在。
權(quán)利要求
1.一種能與核酸信標(biāo)發(fā)生特異性作用的物質(zhì)的檢測(cè)方法，以碳納米顆粒為熒光受體，其特征在于:包括以下步驟: I)配制兩組體積相同濃度相同的一端標(biāo)記過(guò)熒光基團(tuán)的核酸信標(biāo)的系列標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液； 2)向第一組一端標(biāo)記過(guò)熒光基團(tuán)的核酸信標(biāo)的系列標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液中加入體積不同濃度相同的碳納米顆粒溶液，得到體積不同的系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液；向每個(gè)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液中補(bǔ)加緩沖溶液，使每個(gè)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積相同，孵育3(T60 min ;然后對(duì)每個(gè)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行熒光檢測(cè)，得到熒光猝滅效率最大時(shí)所需的碳納米顆粒溶液的體積； 3)以第二組一端標(biāo)記過(guò)熒光基團(tuán)的核酸信標(biāo)的系列標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液中的一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液作為空白溶液不加入待測(cè)樣品，其余的標(biāo)準(zhǔn)溶液分別加入相同濃度不同體積的待測(cè)樣品，得到體積不同的系列混合待測(cè)樣品標(biāo)準(zhǔn)溶液；然后向每個(gè)混合待測(cè)樣品標(biāo)準(zhǔn)溶液中補(bǔ)加緩沖溶液，使每個(gè)混合待測(cè)樣品標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積相同，孵育2(T120 min ;向每個(gè)混合待測(cè)樣品標(biāo)準(zhǔn)溶液中加入與步驟2 )中熒光猝滅效率最大時(shí)相同體積的碳納米顆粒溶液，得到系列樣品標(biāo)準(zhǔn)溶液，孵育3(T60 min,測(cè)定每個(gè)樣品標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度，空白溶液的熒光強(qiáng)度為F0，對(duì)每個(gè)樣品標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度與空白溶液的熒光強(qiáng)度H)的比值和待測(cè)樣品的濃度進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制； 4)向未知濃度的待測(cè)樣品中加入與步驟3)中體積相同濃度相同的一端標(biāo)記過(guò)熒光基團(tuán)的核酸信標(biāo)的系列標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液并補(bǔ)加緩沖溶液，得到混合待測(cè)樣品溶液，使該混合待測(cè)樣品溶液與步驟3)中每個(gè)混合待測(cè)樣品標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積相同，孵育2(Tl20min ;加入與步驟3)中相同體積的碳納米顆粒溶液，孵育3(T60min后，測(cè)定溶液的熒光強(qiáng)度，計(jì)算其與步驟3)中空白溶液熒光強(qiáng)度H)的比值，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到該待測(cè)樣品的濃度。
2.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的一種能與核酸信標(biāo)發(fā)生特異性作用的物質(zhì)的檢測(cè)方法，其特征在于:所述碳納米顆粒包括十二烷基苯磺酸鈉穩(wěn)定的碳納米顆粒或水溶性氧化碳納米顆粒；所述熒光基團(tuán)包括有機(jī)染料或熒光納米顆粒。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種能與核酸信標(biāo)發(fā)生特異性作用的物質(zhì)的檢測(cè)方法，其特征在于:所述能夠與一端標(biāo)記過(guò)熒光基團(tuán)的核酸信標(biāo)發(fā)生特異性相互作用的物質(zhì)包括單鏈核酸或三磷酸腺苷。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種能與核酸信標(biāo)發(fā)生特異性作用的物質(zhì)的檢測(cè)方法，包括以下步驟向一定濃度的一端標(biāo)記熒光基團(tuán)的核酸信標(biāo)溶液中加入不同濃度的碳納米顆粒溶液，孵育后，室溫下測(cè)定熒光強(qiáng)度，得到猝滅曲線;若干組含一定濃度一端標(biāo)記過(guò)熒光基團(tuán)的核酸信標(biāo)溶液中，加入不同濃度的目標(biāo)物，孵育后，加入一定體積的碳納米顆粒溶液，孵育后，室溫下測(cè)定熒光強(qiáng)度，作標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算目標(biāo)物的濃度。本方法操作簡(jiǎn)便，原料易得，生物相容性好，可高效、靈敏、迅速、低成本地對(duì)生物分子進(jìn)行檢測(cè)。
文檔編號(hào)G01N21/64GK103175819SQ201310129229
公開日2013年6月26日 申請(qǐng)日期2013年4月15日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月15日
發(fā)明者劉志洪, 曾令瑜, 袁云霞, 沈佩 申請(qǐng)人:武漢大學(xué)