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一種用于穩(wěn)定同位素分析的魚體肌肉的取樣方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用于穩(wěn)定同位素分析的魚體肌肉的取樣方法，其步驟：1）設計肌肉取樣管；2）準備魚類樣品：魚體新鮮未腐??；3）取樣工具：將取樣用的不銹鋼手術刀、鑷子、肌肉取樣管于酒精燈上預燒后待用；4）在魚體上切口：用預燒過的手術刀在魚體背鰭下方，脊椎上方；5）取肌肉：將預燒過的肌肉取樣管的一端從一個切口插入，平行于魚體向另一個切口方向旋轉(zhuǎn)；6）清洗：用去離子水沖洗掉肌肉上面的血液；7）烘干；8）研磨：將烘干后的肌肉樣品轉(zhuǎn)入預燒過的陶瓷研缽中研磨成粉末，保存。方法易行，操作簡便，能夠有效的避免和減少了取樣過程中由于樣品采集裝置和樣品容器帶來的污染，烘干后的魚體肌肉樣品能夠長期保存并保存穩(wěn)定。
【專利說明】—種用于穩(wěn)定同位素分析的魚體肌肉的取樣方法

【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及分析測試領域，更具體涉及一種用于穩(wěn)定同位素分析的魚體背部白肌肉的取樣方法。

【背景技術】
[0002]穩(wěn)定同位素技術是利用氫、氮、碳、氧、硫等輕元素的穩(wěn)定同位素作為示蹤原子，研究各種生物化學的過程和機理，以及分子的微觀結(jié)構(gòu)與性質(zhì)之間關系的一項技術。該技術被廣泛地運用于食品安全檢測和生態(tài)系統(tǒng)能量流動，魚類是我們食物的重要組成部分，也是水生態(tài)系統(tǒng)中重要的消費者，因此，水產(chǎn)品質(zhì)量檢測和水生態(tài)系統(tǒng)研究中經(jīng)常要用穩(wěn)定同位素技術分析魚類肌肉樣品。然而，魚體肌肉樣品處理和保存過程中的不穩(wěn)定性，對同位素分析易產(chǎn)生干擾。因此，用于穩(wěn)定同位素分析的魚體肌肉樣品取樣必須方便快捷，能夠最大程度低排除干擾，樣品并能長時間保存并保持穩(wěn)定。
[0003]由于穩(wěn)定同位素分析所需樣品量很少，樣品收到污染的風險相對較高。樣品采集裝置和樣品容器，以及樣品間的交叉污染，都會使穩(wěn)定同位素分析的可靠性降低，此外，穩(wěn)定同位素分析的結(jié)果還會受到不同的采樣和處理方法的干擾。因此，本方法通過選取無穩(wěn)定同位素干擾或干擾極小的樣品采集裝置及樣品容器，對樣品采集裝置和樣品容器作排除干擾處理，并簡化取樣過程，可有效減少樣品遭受干擾和污染的幾率，樣品經(jīng)低溫烘干處理后可長期保存并保持穩(wěn)定，有利于提高魚類穩(wěn)定同位素分析中的可靠性。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是在于提供了一種用于穩(wěn)定同位素分析的魚體肌肉的取樣方法，方法易行，操作簡便，能夠有效的避免和減少了取樣過程中由于樣品采集裝置和樣品容器帶來的污染，以及樣品交叉污染和取樣不規(guī)范給穩(wěn)定同位素分析帶來的干擾，經(jīng)過該方法取樣烘干后的魚體肌肉樣品能夠長期保存并保存穩(wěn)定。
[0005]為了達到上述目的，本發(fā)明采取以下技術措施:
一種用于穩(wěn)定同位素分析的魚體肌肉的取樣方法:其步驟是:
1.設計肌肉取樣管:選取內(nèi)徑為8— 1mm,外徑為9 一 1mm的低碳奧氏體耐酸不銹鋼管，截取11 - 12cm長度，一端截面與不銹鋼管長徑成90°，另一端與不銹鋼管長徑成30°，不銹鋼管30° —端的切口用砂紙打磨鋒利；
2.準備魚類樣品:選取魚類樣本，要求魚體新鮮未腐敗。春季和秋季氣溫在10-18°C時魚體死亡樣品處理的時間不要超過2h，夏季樣品如不冷凍應立即處理，冬季氣溫在-1-4°C時樣品最好也要在魚體死亡后48h之內(nèi)處理。樣本個體大小要保證能夠取到足夠的背部白肌肉，用清水清洗干凈魚體，晾干魚體表面水分，測量全長、體重；
3.準備取樣工具:將取樣用的不銹鋼手術刀、鑷子、肌肉取樣管于酒精燈上預燒后待用，盛放肌肉樣品的5ml容量的Eppendorf管在10%的氯化氫(HCl)中浸泡28 — 32分鐘，用去離子水反復清洗3 - 4次后干燥，編好標簽待用； 4.在魚體上切口:用預燒過的手術刀在魚體背鰭下方，脊椎上方，靠近魚體前方的部位垂直于脊椎作兩個切口，切口長度不小于15mm，深度12-15mm，兩切口間距離39 — 41mm；
5.取肌肉:將預燒過的肌肉取樣管30°的一端從一個切口插入，平行于魚體向另一個切口方向緩慢旋轉(zhuǎn)，肌肉取樣管不要碰到魚體骨骼，直至肌肉取樣管的前端越過另一個切口，抽出肌肉取樣管，用預燒過的鑷子取出肌肉樣品，不要取到背部白肌以外的魚體組織，如骨骼、鱗片等；
6.清洗:用去尚子水將肌肉沖洗干凈，晾干后轉(zhuǎn)入編號的Eppendorf管；
7.烘干:在58— 62°C下烘干至恒重；
8.研磨:將烘干后的肌肉樣品轉(zhuǎn)入預燒過的陶瓷研缽中研磨成粉末，過80目孔徑篩網(wǎng)，轉(zhuǎn)入Eppendorf管保存或送往測試。
[0006]相同實驗條件下培養(yǎng)的魚類，運用該取樣方法獲取和保存的魚體肌肉樣品，穩(wěn)定同位素分析結(jié)果不同魚體間的變異率遠遠小于現(xiàn)有國家標準(GB/T18932.1-2002)處理方法間的變異。
[0007]本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比，具有以下優(yōu)點和效果:
本方法通過選取無穩(wěn)定同位素干擾或干擾極小的樣品采集裝置及樣品容器，對樣品采集裝置和樣品容器作排除干擾處理，并簡化了取樣過程，可有效的減少了樣品遭受干擾和污染的幾率，樣品經(jīng)低溫烘干處理后可長期保存并保持穩(wěn)定，有利于提高魚類穩(wěn)定同位素分析中的可靠性。
[0008]相同實驗條件下培養(yǎng)的異育銀鯽，運用該取樣方法獲取和保存其中5條魚的肌肉樣品，用該方法獲取樣品穩(wěn)定同位素分析結(jié)果的平均變異遠遠小于用現(xiàn)有國家標準(GB/T18932.1-2002)處理方法間的變異。其中5條魚體間的碳穩(wěn)定同位素的平均變異率0.13%。，低于食物網(wǎng)中不同營養(yǎng)級間碳同位素的平均差值0.4%o ；5條魚體間氮穩(wěn)定同位素的平均變異率為0.97%。，低于不同營養(yǎng)級間氮穩(wěn)定同位素的平均差值3.4%。。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0009]圖1為一種魚體背部白肌肉不銹鋼取樣管示意圖。
[0010]其中，I為肌肉取樣管內(nèi)徑，2為肌肉取樣管外徑，3為不銹鋼管截面與管體長徑30°夾角，4為不銹鋼管截面與管體長徑90°夾角，5為魚體肌肉取樣管(整體)，6為魚體肌肉取樣管的長度。
[0011]圖2為一種魚體背部切口示意圖。
[0012]其中7為切口長度，8為兩切口間的距離，9為切口位置及方向部位。

【具體實施方式】
[0013]實施例1:
下面結(jié)合具體圖示對本發(fā)明的進行詳細說明:
一種用于穩(wěn)定同位素分析的魚體肌肉的取樣方法:其步驟是:
1.設計肌肉取樣管:選取肌肉取樣管內(nèi)徑I為8或9或10mm，肌肉取樣管外徑2為9或9.5或1mm的低碳奧氏體耐酸不銹鋼管，截取魚體肌肉取樣管的長度6為9或10或Ilcm的一段，不銹鋼管截面一端與不銹鋼管截面與管體長徑90° 4，另一端與不銹鋼管截面與管體長徑30° 3，不銹鋼管截面與管體長徑30° 3—端的切口用砂紙打磨鋒利，形成魚體肌肉取樣管5 ；
2.準備魚類樣品:選取魚類樣本，要求魚體新鮮未腐敗，個體大小保證能夠取到足夠的背部白肌肉，用清水清洗干凈魚體，晾干魚體表面水分，測量全長、體重；
3.準備取樣工具:將取樣用的不銹鋼手術刀、鑷子、肌肉取樣管于酒精燈上預燒后待用，盛放肌肉樣品的5ml容量的Eppendorf管在10%的HCl中浸泡28或29或30或31或32分鐘，用去離子水反復清洗3或4次后干燥，編好標簽待用；
4.在魚體上切口:用預燒過的手術刀在魚體背鰭下方，脊椎上方，靠近魚體前方的切口位置及方向部位9垂直于脊椎作兩個切口，切口長度7不小于15mm，深度12或13或14或15mm,兩切口間距離8為40mm ；
5.取肌肉:將預燒過的魚體肌肉取樣管5截面傾斜的一端從一個切口插入，平行于魚體向另一個切口方向緩慢旋轉(zhuǎn)，魚體肌肉取樣管5不要碰到魚體骨骼，直至魚體肌肉取樣管5的前端越過另一個切口，抽出肌肉取樣管，用預燒過的鑷子取出肌肉樣品，不要取到背部白肌以外的其它魚體組織，如骨骼、鱗片等；
6.清洗:用去尚子水將肌肉沖洗干凈，晾干后轉(zhuǎn)入編號的Eppendorf管；
7.烘干:在58或59或60或61或62°C下烘干至恒重；
8.研磨:將烘干后的肌肉樣品轉(zhuǎn)入預燒過的陶瓷研缽中研磨成粉末，過80目孔徑篩網(wǎng)，轉(zhuǎn)入Eppendorf管保存或送往測試。
【權利要求】
1.一種用于穩(wěn)定同位素分析的魚體肌肉的取樣方法，其步驟是: 1)設計肌肉取樣管:選取內(nèi)徑為8— 1mm,外徑為9 一 1mm的低碳奧氏體耐酸不銹鋼管，截取11 一 12cm長度，一端截面與不銹鋼管長徑成90°，另一端與不銹鋼管長徑成30°，不銹鋼管30° —端的切口用砂紙打磨； 2)準備魚類樣品:選取魚類樣本，魚體新鮮未腐敗，春季和秋季氣溫在10-18°C時魚體死亡樣品處理的時間不要超過2h，夏季樣品不冷凍處理，冬季氣溫在-1_4°C時樣品在魚體死亡后48h之內(nèi)處理，樣本個體大小取到背部白肌肉，用清水清洗干凈魚體，晾干魚體表面水分，測量全長、體重； 3)準備取樣工具:將取樣用的不銹鋼手術刀、鑷子、肌肉取樣管于酒精燈上預燒后待用，盛放肌肉樣品的5ml容量的Eppendorf管在10%的氯化氫中浸泡28 — 32分鐘，用去離子水反復清洗3 - 4次后干燥，編好標簽待用； 4)在魚體上切口:用預燒過的手術刀在魚體背鰭下方，脊椎上方，靠近魚體前方的部位垂直于脊椎作兩個切口，切口長度不小于15mm，深度12-15mm，兩切口間距離39 — 41mm； 5)取肌肉:將預燒過的肌肉取樣管30°的一端從一個切口插入，平行于魚體向另一個切口方向旋轉(zhuǎn)，肌肉取樣管不要碰到魚體骨骼，直至肌肉取樣管的前端越過另一個切口，抽出肌肉取樣管，用預燒過的鑷子取出肌肉樣品，不要取到背部白肌以外的魚體組織； 6)清洗:用去離子水沖洗掉肌肉上面的血液，晾干后轉(zhuǎn)入編號的Eppendorf管； 7)烘干:在58— 62 °C下烘干至恒重； 8)研磨:將烘干后的肌肉樣品轉(zhuǎn)入預燒過的陶瓷研缽中研磨成粉末，過80目孔徑篩網(wǎng)，轉(zhuǎn)入Eppendorf管保存或送往測試。
【文檔編號】G01N1/04GK104198216SQ201410497767
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年9月24日 優(yōu)先權日:2014年9月24日
【發(fā)明者】連玉喜, 李為, 葉少文, 李鐘杰, 劉家壽, 張?zhí)昧? 苑晶 申請人:中國科學院水生生物研究所