用于在自動(dòng)分析儀上光度測(cè)定流體樣品中的分析物的多應(yīng)用方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及用于通過(guò)光度測(cè)定法測(cè)定可以顯示干擾的樣品的特定分析物的量的方法，其中所述特定分析物從所述分析物與分析物特異性測(cè)定試劑相互作用后反應(yīng)混合物的光信號(hào)變化來(lái)定量。對(duì)于待測(cè)定的樣品的特定分析物，對(duì)于多個(gè)波長(zhǎng)生成多條校準(zhǔn)曲線，將測(cè)量結(jié)果儲(chǔ)存在儀器平臺(tái)的數(shù)據(jù)管理系統(tǒng)中。同時(shí)進(jìn)行干擾測(cè)試以測(cè)定特定分析物，用于定量待測(cè)定樣品中存在的干擾物質(zhì)的量。將各干擾物質(zhì)的量與預(yù)定截止值進(jìn)行比較。在完整反應(yīng)時(shí)間在多個(gè)波長(zhǎng)測(cè)量反應(yīng)混合物中待測(cè)定的樣品的特定分析物的光信號(hào)，且根據(jù)干擾物質(zhì)選擇校準(zhǔn)曲線。最終，通過(guò)與所選波長(zhǎng)的所選校準(zhǔn)曲線比較來(lái)定量待測(cè)定的樣品的特定分析物的量。
【專利說(shuō)明】用于在自動(dòng)分析儀上光度測(cè)定流體樣品中的分析物的多應(yīng) 用方法 發(fā)明領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及用于通過(guò)光度測(cè)定法測(cè)定可以顯示干擾的樣品的特定分析物的量的 方法，其中所述特定分析物從所述分析物與分析物特異性測(cè)定試劑相互作用后反應(yīng)混合物 的光信號(hào)變化來(lái)定量。對(duì)于待測(cè)定樣品的特定分析物，對(duì)于多個(gè)波長(zhǎng)生成多條校準(zhǔn)曲線，將 測(cè)量結(jié)果儲(chǔ)存在儀器平臺(tái)的數(shù)據(jù)管理系統(tǒng)中。同時(shí)進(jìn)行干擾測(cè)試以測(cè)定特定分析物，用于 定量待測(cè)定樣品中存在的干擾物質(zhì)的量。將各干擾物質(zhì)的量與預(yù)定截止值進(jìn)行比較。在完 整反應(yīng)時(shí)間在多個(gè)波長(zhǎng)測(cè)量反應(yīng)混合物中待測(cè)定樣品的特定分析物的光信號(hào)，且根據(jù)干擾 物質(zhì)選擇校準(zhǔn)曲線。最終，通過(guò)與所選波長(zhǎng)的所選校準(zhǔn)曲線比較來(lái)定量待測(cè)定樣品的特定 分析物的量。
[0002] 用于光度測(cè)定流體中的分析物的診斷測(cè)定法，包括池度（turbidimetric)、比池 (nephelometric)和比色（colorimetric)測(cè)定法，是常見且眾所周知的。由于其容易的一 步程序和其短周轉(zhuǎn)時(shí)間，此類測(cè)定法是用于在自動(dòng)分析儀中應(yīng)用的理想候選。如今，高度自 動(dòng)化的分光光度分析儀用于臨床診斷中以便以時(shí)間和成本有效的方式進(jìn)行光度測(cè)定法。分 析儀上的工作流程的特征在于簡(jiǎn)單的程序，而沒有任何分離或洗滌步驟，通常涉及以下方 案：a)將含有未知量分析物的樣品（血清或血漿）和分析物特異性測(cè)定試劑分配至反應(yīng)杯 中，b)在杯中，使樣品和試劑在規(guī)定溫度孵育特定時(shí)間段，c)光度計(jì)測(cè)量與所述樣品中分 析物的量相關(guān)的所述杯中測(cè)定溶液的光信號(hào)。
[0003] 對(duì)于臨床化學(xué)分析儀例如Roche Diagnostics cobas? c提供基于池度、比池或比 色測(cè)定法的廣泛測(cè)試菜單。在cobas? c儀器上檢測(cè)這些測(cè)定法基于具有鹵鎢燈作為照射 源、用于生成單色光的光柵和光電二極管陣列（產(chǎn)生340和800 nm之間的12個(gè)波長(zhǎng)的12 個(gè)二極管）作為檢測(cè)器的光度計(jì)。
[0004] 經(jīng)常將關(guān)鍵樣品提交用于在臨床實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行常規(guī)生化測(cè)試，其顯示對(duì)應(yīng)用的測(cè)定 法的干擾，因此導(dǎo)致改變和錯(cuò)誤的結(jié)果。當(dāng)用使用光學(xué)方法如比色和濁度方法的實(shí)驗(yàn)室測(cè) 試進(jìn)行工作時(shí)，樣品基質(zhì)中顯色或散射光的物質(zhì)通常引起干擾。此類干擾物質(zhì)的實(shí)例是血 紅蛋白（溶血）、膽紅素（黃疸）和脂質(zhì)（脂血），其在通常用于分光光度測(cè)試的波長(zhǎng)吸收 或散射光。
[0005] 溶血是一個(gè)重要的干擾因素，這通常歸因于不同因素對(duì)紅細(xì)胞的體外破壞，諸如 分離血清或血漿前血液的長(zhǎng)期儲(chǔ)存、通過(guò)迅速迫使血液經(jīng)過(guò)小針頭的剪切力、混合時(shí)的過(guò) 度攪拌或血清的離心和分離的物理作用。體內(nèi)溶血發(fā)生頻率較低，但它對(duì)實(shí)驗(yàn)室測(cè)試具有 相同的效果。溶血干擾檢測(cè)程序的機(jī)制是由釋放的血紅蛋白的顏色干擾，盡管還有從受損 的紅細(xì)胞泄漏分析物和紅細(xì)胞組分與分析物之間的化學(xué)相互作用也是可能的原因。作為結(jié) 果，由于血紅蛋白干擾，在臨床試驗(yàn)中可以獲得錯(cuò)誤地更高或錯(cuò)誤地更低的分析物濃度。其 他血細(xì)胞如白細(xì)胞和血小板的組分也可以污染樣品。例如，細(xì)胞衰變可以導(dǎo)致白血病患者 的血液變化；血小板在凝血過(guò)程中的衰變導(dǎo)致血清中較高濃度的細(xì)胞內(nèi)血小板成分。
[0006] 溶血可以進(jìn)一步由生物化學(xué)、免疫學(xué)、物理和化學(xué)機(jī)制引起。輸血過(guò)程中，補(bǔ)體依 賴性溶血可以由與主要血型抗原反應(yīng)的抗體引起。物理溶血由低滲對(duì)紅細(xì)胞的破壞，例如 用低滲溶液稀釋血液，以及降低（真空）或增加的壓力引起。機(jī)械溶血可以發(fā)生在血液在體 內(nèi)流過(guò)醫(yī)療設(shè)備例如導(dǎo)管、心臟瓣膜過(guò)程中和由在體外離心不足以及升高的溫度而發(fā)生。 污染物質(zhì)也可以引起體外溶血。最后，洗滌劑和其他污染物質(zhì)可以引起溶血。分離血細(xì)胞 后，溶血通過(guò)血清或血漿的紅色來(lái)檢測(cè)。在超過(guò)300 mg/L (18.8 mmol/L)的細(xì)胞外血紅蛋 白濃度，溶血可通過(guò)血清或血漿的紅色檢測(cè)。具有治療性血紅蛋白衍生物的樣品總是強(qiáng)烈 顯紅色的。一些分析系統(tǒng)通過(guò)比較樣品在兩種波長(zhǎng)的吸收測(cè)量溶血的程度。用作血液替代 品的血紅蛋白衍生氧載體的吸收光譜與天然血紅蛋白沒有顯著不同。
[0007] 膽紅素是由血紅蛋白的酶促降解產(chǎn)生的黃色的色素。關(guān)于膽紅素干擾的研究大多 數(shù)基于其中將游離膽紅素或水溶性二牛磺酸膽紅素（di-taurobilirubin)添加至血清的 實(shí)驗(yàn)。在特定條件下，膽紅素分子在其干擾影響中在定性和定量上不同。當(dāng)以增加的濃度 存在于血液中時(shí)，綴合膽紅素出現(xiàn)在尿中。在具有蛋白尿的患者中，結(jié)合至白蛋白的膽紅素 也可以出現(xiàn)在尿中。腦內(nèi)出血后，未綴合（游離）膽紅素引起腦脊液的黃變。在血腦屏障 的通透性增加時(shí)，結(jié)合至白蛋白的膽紅素可以出現(xiàn)在CSF中。膽紅素在340 nm至500 nm 之間的波長(zhǎng)具有高吸光度。因此，使用這些波長(zhǎng)的分光光度測(cè)試因?yàn)橛赡懠t素引起的持續(xù) 高的背景吸光度而顯示出限制。膽紅素干擾導(dǎo)致的結(jié)果的明顯增加或減少是測(cè)定和分析物 濃度依賴的。
[0008] 脂血樣品是由于增加的脂質(zhì)含量而具有混濁或乳狀外觀的血液、血清或血漿的樣 品。無(wú)法避免脂血樣品，因?yàn)橹|(zhì)濃度增加經(jīng)常繼發(fā)于其他疾病狀態(tài)諸如：糖尿病、乙醇使 用、慢性腎衰竭和胰腺炎。脂血的存在可以通過(guò)不同的機(jī)制干擾許多臨床化學(xué)測(cè)試，最常見 的機(jī)制是脂質(zhì)（主要是乳糜微粒和極低密度脂蛋白VLDL)對(duì)光的散射。作為結(jié)果，根據(jù)應(yīng) 用的波長(zhǎng)和脂質(zhì)含量，可以改變測(cè)定的分析物濃度。
[0009] 總之，樣品中血紅蛋白、膽紅素和脂質(zhì)以及其他干擾物質(zhì)的存在可以引起目的在 于定量特定分析物的光度測(cè)定法的測(cè)量結(jié)果的正或負(fù)的干擾。根據(jù)干擾的幅度，結(jié)果可以 導(dǎo)致錯(cuò)誤的解釋和不適當(dāng)?shù)母深A(yù)。
[0010] 為了克服溶血、黃疸和脂血引起的干擾的缺點(diǎn)，幾種方法是文獻(xiàn)中已知的。脂血、 黃疸和溶血干擾可以通過(guò)預(yù)分析過(guò)程中預(yù)處理樣品以去除干擾物質(zhì)而降低，例如在脂血樣 品的情況下通過(guò)高速離心。然而，此類措施增加了工作量，且降低了成本和時(shí)間效率；此類 措施也易于在樣品操作中產(chǎn)生誤差。
[0011] 另一種策略是使用其他對(duì)干擾不敏感的臨床測(cè)試。這可能是挑戰(zhàn)性的，因?yàn)樘娲?測(cè)試可能需要實(shí)驗(yàn)室中沒有的另一個(gè)儀器平臺(tái)；也可能市場(chǎng)上沒有任何替代測(cè)試。
[0012] 通過(guò)使用設(shè)置空白程序校正脂血、溶血和黃疸引起的干擾是克服限制的替代方 案。這涉及添加測(cè)定試劑之前，一旦合適地稀釋，測(cè)量樣品吸光度。從最終吸光度減去測(cè)量 的吸光度。一種實(shí)現(xiàn)這種設(shè)置空白程序的策略是利用2種不同的試劑（空白和測(cè)定試劑） 和2個(gè)杯。這種方法改進(jìn)了結(jié)果，但它具有一個(gè)缺點(diǎn)，使測(cè)試通量減少一半。另一種方法涉 及將試劑依次添加至杯中：在設(shè)定時(shí)間后獲取第一讀數(shù)；此后添加測(cè)定試劑并孵育；最后 獲取第二讀數(shù)。然而，用該程序通常僅實(shí)現(xiàn)很小改進(jìn)。此外，建立的測(cè)定方案可能不與第一 讀數(shù)所需的樣品的新初始稀釋步驟相容。
[0013] 雙色分析也允許校正分析結(jié)果，且經(jīng)常應(yīng)用于自動(dòng)化實(shí)驗(yàn)室測(cè)試中。第二U則） 波長(zhǎng)用于測(cè)量干擾物質(zhì)。待測(cè)定的分析物在該第二波長(zhǎng)不吸收。然后從分析物的測(cè)量值減 去該測(cè)量值。這假設(shè)干擾物質(zhì)的吸光度在兩種波長(zhǎng)是相同的，這種情況是很少的。因此，雙 色原則在降低干擾中只產(chǎn)生輕微的改進(jìn)。此外，可能通過(guò)化學(xué)消除干擾物質(zhì)來(lái)處理干擾，例 如用膽紅素氧化酶消除膽紅素，或用抗壞血酸氧化酶消除維生素C。
[0014] 此外，多通道分析儀是全自動(dòng)化的計(jì)算機(jī)控制系統(tǒng)，其經(jīng)設(shè)計(jì)用于分析常規(guī)化學(xué) 測(cè)定法、免疫測(cè)定法和治療藥物，例如，Roche Cobas 6000使用分光光度法來(lái)進(jìn)行動(dòng)力學(xué)、 終點(diǎn)和非線性反應(yīng)。到一定程度，系統(tǒng)，類似于大多數(shù)現(xiàn)代分析儀，通過(guò)應(yīng)用雙試劑程序和 雙色分光光度法降低了光譜干擾影響。樣品的質(zhì)量可以通過(guò)不同的方法來(lái)確定。一種常見 方法是在實(shí)驗(yàn)室分析儀上運(yùn)行血清指標(biāo)測(cè)試，所述分析儀定量樣品中存在的膽紅素、血紅 蛋白和脂質(zhì)的量。HIL指標(biāo)的實(shí)施改進(jìn)了測(cè)試結(jié)果的精確度和質(zhì)量。
[0015] 然而，仍然存在許多患者樣品顯示溶血、膽紅素和脂質(zhì)的干擾，導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果， 甚至通過(guò)使用HLI指標(biāo)或校正方法。實(shí)驗(yàn)室測(cè)定中溶血、膽紅素和脂質(zhì)的分析干擾是實(shí)驗(yàn) 室醫(yī)學(xué)中最常見的問題。這些改變和錯(cuò)誤的結(jié)果可以導(dǎo)致不正確的解釋、錯(cuò)誤的診斷和可 能不適當(dāng)干預(yù)以及對(duì)于患者的不利結(jié)果。作為結(jié)果，在血紅蛋白、膽紅素和脂質(zhì)的濃度超過(guò) 特定截止水平的情況下，許多樣品必須在預(yù)分析步驟中進(jìn)行預(yù)處理，以去除干擾物質(zhì)，然后 重新測(cè)量。預(yù)處理和重新測(cè)量引起額外費(fèi)用和時(shí)間的損失，這兩個(gè)因素對(duì)于進(jìn)行那些測(cè)定 的實(shí)驗(yàn)室都是關(guān)鍵的。
[0016] 待解決的問題 因此，本發(fā)明解決的問題是提供用于測(cè)定顯示干擾的關(guān)鍵樣品中的特定分析物的改進(jìn) 的測(cè)定方法，其通過(guò)在相應(yīng)的儀器平臺(tái)上使用可商購(gòu)的分光光度實(shí)驗(yàn)室測(cè)試而實(shí)現(xiàn)，而無(wú) 需應(yīng)用預(yù)分析樣品處理或改變測(cè)定方法。
[0017] 本發(fā)明人已經(jīng)令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，顯示干擾的樣品的改進(jìn)精確度通過(guò)本發(fā)明的方法 得到實(shí)現(xiàn)。預(yù)期本發(fā)明（至少部分地）克服了顯示干擾的樣品的預(yù)分析樣品處理和重新測(cè) 量的問題，以在光度測(cè)定法中測(cè)定樣品中特定分析物的正確量。
[0018] 發(fā)明概述 這些目標(biāo)中的至少一個(gè)通過(guò)提供權(quán)利要求和下文中定義的主題來(lái)實(shí)現(xiàn)。
[0019] 在第一個(gè)方面，本發(fā)明涉及用于通過(guò)光度測(cè)定法測(cè)定可以顯示干擾的樣品中特定 分析物的量的方法，其中所述特定分析物從所述分析物與分析物特異性測(cè)定試劑相互作用 后反應(yīng)混合物的光信號(hào)變化來(lái)定量。對(duì)于待測(cè)定樣品的特定分析物，對(duì)于多個(gè)波長(zhǎng)生成多 條校準(zhǔn)曲線，將測(cè)量結(jié)果儲(chǔ)存在儀器平臺(tái)的數(shù)據(jù)管理系統(tǒng)中。同時(shí)進(jìn)行干擾測(cè)試以測(cè)定特 定分析物，用于定量待測(cè)定樣品中存在的干擾物質(zhì)的量。將各干擾物質(zhì)的量與預(yù)定截止值 進(jìn)行比較。在完整反應(yīng)時(shí)間在多個(gè)波長(zhǎng)測(cè)量反應(yīng)混合物中待測(cè)定樣品的特定分析物的光信 號(hào)，且根據(jù)干擾物質(zhì)選擇校準(zhǔn)曲線。最終，通過(guò)與所選波長(zhǎng)的所選校準(zhǔn)曲線比較來(lái)定量待測(cè) 定樣品的特定分析物的量。
[0020] 在第二個(gè)方面，本發(fā)明涉及用于降低顯示溶血和/或黃疸和/或脂血和/或其他 干擾的樣品的基于分光光度的實(shí)驗(yàn)室測(cè)試的干擾的方法，其中將包含測(cè)量波長(zhǎng)、反應(yīng)時(shí)間、 校準(zhǔn)點(diǎn)、校準(zhǔn)模式的特定測(cè)量條件額外應(yīng)用于測(cè)量方案，而無(wú)需應(yīng)用預(yù)分析樣品處理和/ 或改變測(cè)定方法。
[0021] 在進(jìn)一步方面，本發(fā)明涉及額外應(yīng)用于測(cè)量方案的特定測(cè)量條件用于降低測(cè)定顯 示干擾的樣品中特定分析物的量的基于分光光度的實(shí)驗(yàn)室測(cè)試的干擾的用途，所述特定測(cè) 量條件包含測(cè)量波長(zhǎng)、反應(yīng)時(shí)間、校準(zhǔn)點(diǎn)、校準(zhǔn)模式。
[0022] 發(fā)明詳述 本發(fā)明涉及用于通過(guò)光度測(cè)定法測(cè)定可以顯示干擾的樣品的特定分析物的量的方法， 其中在實(shí)驗(yàn)室分析儀上，所述特定分析物從所述分析物與分析物特異性測(cè)定試劑相互作用 后反應(yīng)混合物的光信號(hào)變化來(lái)定量。對(duì)于待測(cè)定樣品的特定分析物，對(duì)于多個(gè)波長(zhǎng)生成多 條校準(zhǔn)曲線，將測(cè)量結(jié)果儲(chǔ)存在儀器平臺(tái)的數(shù)據(jù)管理系統(tǒng)中。
[0023] 任選地，進(jìn)行干擾測(cè)試用于定量待測(cè)定樣品中存在的膽紅素和/或血紅蛋白和/ 或脂質(zhì)和/或其他干擾物質(zhì)的量，并且將每種干擾物質(zhì)的量與預(yù)定截止值進(jìn)行比較。同時(shí)， 在完整反應(yīng)時(shí)間在多個(gè)波長(zhǎng)測(cè)量反應(yīng)混合物中待測(cè)定樣品的特定分析物的光信號(hào)。根據(jù)樣 品中存在的干擾物質(zhì)的量和類型選擇校準(zhǔn)曲線。最終，通過(guò)與所選波長(zhǎng)的所選校準(zhǔn)曲線比 較來(lái)定量待測(cè)定樣品的特定分析物的量。
[0024] 本發(fā)明的方法進(jìn)一步提供了額外應(yīng)用于測(cè)量方案的包含反應(yīng)時(shí)間、校準(zhǔn)點(diǎn)、校準(zhǔn) 模式和測(cè)定類型的特定測(cè)量條件。
[0025] 樣品的質(zhì)量可以通過(guò)不同的方法來(lái)確定。一種常見方法是在實(shí)驗(yàn)室分析儀上運(yùn)行 血清指標(biāo)測(cè)試，所述分析儀定量樣品中存在的膽紅素、血紅蛋白和脂質(zhì)的量。由此，血清指 標(biāo)和特定分析物的光信號(hào)的測(cè)量可以在分析儀上同時(shí)進(jìn)行。有時(shí)，在高濃度的干擾物質(zhì)的 情況下，甚至可能通過(guò)其顏色對(duì)血清樣品目視分類。
[0026] 通過(guò)在特征在于測(cè)量波長(zhǎng)、反應(yīng)時(shí)間、校準(zhǔn)模式、校準(zhǔn)點(diǎn)數(shù)量（其針對(duì)特定分析物 應(yīng)用進(jìn)行預(yù)先確定）的多個(gè)條件下生成多條校準(zhǔn)曲線，現(xiàn)在可能與標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)相比更精確地 測(cè)量這些樣品的特定分析物。選擇一條或多條校準(zhǔn)曲線，所述校準(zhǔn)曲線經(jīng)優(yōu)化用于減少干 擾，導(dǎo)致干擾物質(zhì)的耐受量的擴(kuò)大。
[0027] 通過(guò)使用本發(fā)明的方法，顯示干擾的關(guān)鍵樣品，例如溶血、黃疸和/或脂血樣品， 現(xiàn)在可以使用相應(yīng)的儀器平臺(tái)上可商購(gòu)的分光光度實(shí)驗(yàn)室測(cè)試進(jìn)行測(cè)量。本發(fā)明人已經(jīng)令 人驚訝地發(fā)現(xiàn)，顯示干擾的樣品的改進(jìn)精確度通過(guò)本發(fā)明的方法得到實(shí)現(xiàn)，從而避免了需 要應(yīng)用預(yù)分析樣品處理或改變測(cè)定方法或在最壞情況下拋棄樣品。
[0028] 定義： 如本文中所使用，術(shù)語(yǔ)"測(cè)定"意指從基于濁度、比濁或比色測(cè)量的光度測(cè)定法的反應(yīng) 混合物的光信號(hào)的變化，評(píng)估、診斷、決定、鑒定、評(píng)價(jià)、定量或分類樣品中的特定分析物。
[0029] 如本文中所使用，術(shù)語(yǔ)"量"涵蓋分析物的絕對(duì)量或所述分析物的相對(duì)量和/或濃 度和/或可以與之關(guān)聯(lián)和/或可以因此推導(dǎo)的任何值和/或參數(shù)。
[0030] 如本文中所使用，術(shù)語(yǔ)"凝集"主要是其中大分子之間的表面相互作用導(dǎo)致交聯(lián)且 形成大復(fù)合物的化學(xué)現(xiàn)象。這種大復(fù)合物的形成導(dǎo)致光散射特性的增加，取決于復(fù)合物的 尺寸，這可以用肉眼觀察或使用濁度和比濁檢測(cè)光度監(jiān)測(cè)。
[0031] 術(shù)語(yǔ)"分光光度測(cè)定法"，也稱為"光度測(cè)定法"，是本領(lǐng)域眾所周知的。光度測(cè)定法 涵蓋濁度和比濁免疫測(cè)定法以及比色測(cè)定法。在濁度和比濁免疫測(cè)定法中，特定分析物從 基于所述特定分析物和分析物特異性結(jié)合伴侶的凝集的反應(yīng)混合物的濁度的變化來(lái)定量， 而在比色測(cè)定法中，特定分析物在顯色劑的幫助下來(lái)定量。
[0032] 根據(jù)本發(fā)明的術(shù)語(yǔ)"比色測(cè)定法"通常用于在高度自動(dòng)化的臨床化學(xué)分析儀上 的臨床診斷。由于其容易的一步程序和其短周轉(zhuǎn)時(shí)間，均相比色測(cè)定法是用于在自動(dòng)分 析儀中應(yīng)用的理想候選。實(shí)際上提供用于臨床化學(xué)分析儀的廣泛測(cè)試菜單，例如Roche Diagnostics cobas? c。比色測(cè)定法的特征在于在待定量的分析物存在的情況下顏色的 形成或改變或耗盡，其中顏色的形成或改變或耗盡通常通過(guò)分光光度計(jì)測(cè)量。由于該檢測(cè) 的顏色或光通常在可見區(qū)域中，所以你實(shí)際上可以看到測(cè)定的顏色變化，因此被稱為比色 測(cè)定法。在實(shí)驗(yàn)室分析儀上運(yùn)行的典型比色試驗(yàn)是臨床化學(xué)試驗(yàn)和酶免疫試驗(yàn)（CEDIA， EMIT)。MTT測(cè)定法(使用四唑染料作為底物的氧化還原測(cè)定法）是除了酶促NAD (P)H測(cè)定 法之外的比色測(cè)定法的其他實(shí)例。經(jīng)常使用UV光，因?yàn)楣餐o酶NADH和NADPH以其還原 形式，但不以其氧化形式，吸收UV光。因此，使用NADH作為底物的氧化還原酶可以通過(guò)遵 循當(dāng)其消耗輔酶時(shí)340 nm波長(zhǎng)的UV吸光度的降低來(lái)測(cè)定。甚至當(dāng)酶反應(yīng)不導(dǎo)致光的吸光 度的變化時(shí)，其仍可以可能通過(guò)使用偶聯(lián)測(cè)定法使用酶的分光光度測(cè)定法。在這里，使用一 種反應(yīng)的產(chǎn)物作為另一種可易于檢測(cè)的反應(yīng)的底物。用于偶聯(lián)測(cè)定的一個(gè)實(shí)例是酶己糖激 酶，其可以通過(guò)使用葡萄糖-6-磷酸脫氫酶將葡萄糖-6-磷酸的產(chǎn)生偶聯(lián)至NADPH產(chǎn)生來(lái) 測(cè)定。此類測(cè)定在光度計(jì)中通過(guò)分光光度法檢測(cè)。在cobas? c儀器上檢測(cè)這些測(cè)定基于 具有鹵鎢燈作為照射源和光電二極管陣列（產(chǎn)生340和800 nm之間的12種波長(zhǎng)的12個(gè) 二極管）作為檢測(cè)器的光度計(jì)。O.D.(光密度，吸光度）與有色化合物的濃度成正比。如果 顏色的發(fā)展與溶液中物質(zhì)的濃度相關(guān)，則該濃度可以通過(guò)測(cè)定適當(dāng)波長(zhǎng)的光吸收程度來(lái)測(cè) 量。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案是本發(fā)明的方法，其中在比色測(cè)定法中，特定分析物在顯色劑的 幫助下來(lái)定量。
[0033] 術(shù)語(yǔ)"顯色劑"涵蓋導(dǎo)致測(cè)定的顏色變化、顏色形成或顏色耗盡的任何測(cè)定試劑或 測(cè)定試劑的混合物，所述顏色變化、顏色形成或顏色耗盡可以在光度計(jì)上用范圍為340至 800nm的典型波長(zhǎng)來(lái)測(cè)量。許多比色測(cè)定法涉及在一個(gè)或多個(gè)步驟反應(yīng)中導(dǎo)致有色產(chǎn)物的 酶和對(duì)應(yīng)底物；顏色變化可以通過(guò)對(duì)應(yīng)的酶輔因子如NAD/ NADH、而不是底物本身來(lái)誘導(dǎo)。 還存在基于在一個(gè)或多個(gè)步驟反應(yīng)中導(dǎo)致產(chǎn)生有色產(chǎn)物的分析物與化學(xué)試劑的特異性反 應(yīng)的比色測(cè)定法。在比色免疫測(cè)定法如EMIT (酶多聯(lián)免疫測(cè)定技術(shù)）或CEDIA(克隆酶供 體免疫測(cè)定）中，顏色通常由導(dǎo)致產(chǎn)生具有特征性和可檢測(cè)的吸收特性的產(chǎn)物的報(bào)道酶如 3-半乳糖苷酶或脫氫酶與其對(duì)應(yīng)底物的反應(yīng)形成。
[0034] 報(bào)道酶與底物的反應(yīng)通常在分析物和抗體的免疫反應(yīng)（其然后觸發(fā)或抑制酶反 應(yīng)）之后發(fā)生。在其他比色測(cè)試中，如用于實(shí)驗(yàn)室分析儀的典型臨床化學(xué)測(cè)試中，顏色由分 析物與酶或任何其他特定化學(xué)試劑或其組合的反應(yīng)形成、改變或耗盡。在一些情況下，分析 物本身充當(dāng)酶。甚至當(dāng)酶反應(yīng)不導(dǎo)致光的吸光度的變化時(shí)，其仍可以可能通過(guò)使用偶聯(lián)測(cè) 定法使用酶的分光光度測(cè)定法。在這里，使用一種反應(yīng)的產(chǎn)物作為另一種可易于檢測(cè)的反 應(yīng)的底物。用于偶聯(lián)測(cè)定的一個(gè)實(shí)例是酶己糖激酶，其可以通過(guò)使用葡萄糖-6-磷酸脫氫 酶將葡萄糖-6-磷酸的產(chǎn)生偶聯(lián)至NADPH產(chǎn)生來(lái)測(cè)定。
[0035] 術(shù)語(yǔ)"池度法（turbidimetry)和比池法（nephelometry) "是本領(lǐng)域已知用于基于 測(cè)量濁度對(duì)光的透射和散射的效果測(cè)定溶液中混濁的量或該濁度的方法。液體中的濁度是 由細(xì)分的懸浮顆粒的存在引起的。如果使光束通過(guò)混濁樣品，則其強(qiáng)度由散射而降低，并且 散射光的量取決于顆粒的濃度、尺寸和尺寸分布。分光光度計(jì)測(cè)量增加的濁度（即，強(qiáng)度透 射光中光的減少），這是由于由免疫凝集反應(yīng)導(dǎo)致的漸增的粒徑引起的。這種增加的濁度是 由分析物引起的免疫凝集的直接量度，或由分析物引起的免疫凝集抑制的間接量度。在比 濁法中，測(cè)量散射光的強(qiáng)度，而在濁度法中，測(cè)量透射通過(guò)樣品的光的強(qiáng)度。
[0036] 濁度測(cè)定法涉及測(cè)量當(dāng)入射光束通過(guò)樣品時(shí)入射光束的強(qiáng)度。光束可以通過(guò)懸浮 液或被顆粒吸收、反射或散射。作為結(jié)果，當(dāng)光透射通過(guò)懸浮液時(shí)，光的強(qiáng)度降低。對(duì)于非 吸收性顆粒，由于散射引起的光強(qiáng)度的降低表示為濁度。
[0037] 比濁測(cè)定法是指當(dāng)入射光束通過(guò)樣品時(shí)，測(cè)量從入射光束以定義角度9散射的 光。在比濁法中，測(cè)量一段時(shí)間后的散射光的強(qiáng)度的變化，因?yàn)樯⑸湮镔|(zhì)迅速增加尺寸。當(dāng) 在固定的抗體-膠乳復(fù)合物存在的情況下測(cè)量時(shí)，散射光與初始抗原濃度成比例。進(jìn)一步 的解釋描述于 J.A. Molina-Bolivar 等人，Journal of Macromolecular Science, Part C-Polymer Review, 45:59-98， 2005。
[0038] 本發(fā)明的免疫測(cè)定方法在有和沒有微粒增強(qiáng)的情況下用所有已知凝集試驗(yàn)都起 作用。本發(fā)明中優(yōu)選使用"微粒增強(qiáng)光散射凝集試驗(yàn)"，這也被稱為"顆粒增強(qiáng)濁度免疫測(cè) 定法"（PETIA)。顆粒增強(qiáng)免疫測(cè)定法常規(guī)用于在臨床化學(xué)分析儀上定量血清蛋白、治療性 藥物和濫用藥物的臨床診斷中，因?yàn)樗鼈兙哂凶鳛椴恍枰魏畏蛛x或洗滌步驟的準(zhǔn)均相測(cè) 定的益處。為了增強(qiáng)反應(yīng)混合物中特定分析物和分析物特異性結(jié)合伴侶之間的光檢測(cè)，將 分析物或分析物特異性結(jié)合伴侶連接至合適的顆粒。由此，分析物與用分析物特異性結(jié)合 伴侶包被的顆粒反應(yīng)并凝集。隨著分析物量逐漸增加，復(fù)合物的凝集和尺寸逐漸增加，進(jìn)一 步導(dǎo)致光散射的變化。凝集的顆粒通過(guò)濁度和比濁測(cè)量法來(lái)測(cè)定。
[0039] 分析物包括攜帶對(duì)分析物具有高反應(yīng)性的至少一種結(jié)合伴侶的強(qiáng)光散射特性的 顆粒和攜帶對(duì)分析物具有低反應(yīng)性的至少一種結(jié)合伴侶的弱光散射特性的顆粒的混合物， 如EP 0898169中所述。強(qiáng)光散射特性的顆粒具有比弱光散射特性的顆粒更大的尺寸和/ 或更高的折射率。用于測(cè)定分析物的量的微粒增強(qiáng)光散射免疫測(cè)定法的微粒試劑，其包括 直徑為30至600 nm的微粒的混合物，包括攜帶對(duì)分析物具有高反應(yīng)性伴侶的至少一種結(jié) 合伴侶的強(qiáng)光散射特性的顆粒和攜帶對(duì)分析物具有低反應(yīng)性的至少一種結(jié)合伴侶的弱光 散射特性的顆粒。
[0040] 微粒的材料可以是適合用于微粒增強(qiáng)光散射測(cè)定法的任何無(wú)機(jī)、有機(jī)或聚合物材 料。微粒的材料可以是適合用于微粒增強(qiáng)光散射測(cè)定法的任何無(wú)機(jī)、有機(jī)或聚合物材料。 此類材料包括例如硒、碳、金；碳、硅或鍺的氮化物，例如Si3N4 ;鐵、鈦或硅的氧化物，例如 Ti02或Si02 ;和聚合材料，諸如例如聚苯乙烯、聚（氯乙烯）、環(huán)氧樹脂、聚（偏二氯乙烯）、 聚（甲基丙烯酸a萘酯）、聚（乙烯基萘）或其共聚物，特別是苯乙烯和可共聚的烯鍵式不 飽和化合物的共聚物，例如，苯乙烯_(甲基）丙烯酸酯共聚物。由聚合材料制成的微粒，以 及由從苯乙烯聚合的內(nèi)核和從苯乙烯與可共聚的烯鍵式不飽和化合物的共聚形成的外殼 組成的核-殼顆粒是特別合適的。大部分基于顆粒的測(cè)定法采用膠乳顆粒，其中主要類型 是聚苯乙烯。
[0041] 存在顆粒增強(qiáng)濁度免疫測(cè)定法（PETIA)的不同的測(cè)試形式，競(jìng)爭(zhēng)性形式和直接形 式。直接形式優(yōu)選適用于具有大尺寸的分析物。這些分析物都是具有多個(gè)表位的多價(jià)抗原， 例如，蛋白和微生物。對(duì)于直接形式，顆粒用與分析物凝集的抗體包被。
[0042] 濁度和比濁測(cè)定法也可以以競(jìng)爭(zhēng)性抑制形式進(jìn)行。這種形式最常用于測(cè)量小分 子，諸如半抗原，并且通常適用于診斷濫用藥物測(cè)試和治療藥物監(jiān)測(cè)。在這種形式中，測(cè)定 試劑不僅含有分析物特異性結(jié)合伴侶，而且含有通過(guò)將其連接至微球表面或另一載體分子 諸如蛋白（例如牛血清白蛋白）或可溶性聚合物或寡聚物而獲得的化學(xué)修飾的分析物。與 未修飾的分析物相比，該試劑能夠在分析物特異性結(jié)合伴侶存在的情況下由于分子中存在 的多個(gè)拷貝的分析物而凝集。樣品中的分析物從基于在修飾分析物存在的情況下特定分析 物和分析物特異性結(jié)合伴侶的聚集的反應(yīng)混合物的濁度的變化來(lái)定量。
[0043] 將抗原連接至交聯(lián)劑例如聚半抗原，其與樣品的抗原競(jìng)爭(zhēng)如EP 545350中顯示的 抗體的結(jié)合位點(diǎn)。在這里，可溶性聚合物、蛋白或微粒充當(dāng)多個(gè)拷貝抗原的載體分子。測(cè)試 樣品中未標(biāo)記抗原的量是通過(guò)其與免疫測(cè)定中標(biāo)記的抗原競(jìng)爭(zhēng)的能力來(lái)測(cè)量。未標(biāo)記抗原 阻斷標(biāo)記的抗原結(jié)合的能力，因?yàn)榭贵w上的結(jié)合位點(diǎn)已經(jīng)被占用。因此，在競(jìng)爭(zhēng)性免疫測(cè)定 中，測(cè)定法中測(cè)量的較少標(biāo)記意指存在更多未標(biāo)記的（測(cè)試樣品）抗原。
[0044] 根據(jù)本發(fā)明的術(shù)語(yǔ)"分析物"涵蓋任何"體外診斷化合物"，諸如例如血清蛋白、治 療性藥物和濫用藥物。代表分析物包括但不限于抗原、半抗原、抗體、蛋白、肽、氨基酸、激 素、類固醇、癌細(xì)胞標(biāo)記、組織細(xì)胞、病毒、維生素、核酸、殺蟲劑、酶、酶底物和酶輔因子。如 本文中所使用，"分析物"或"特定分析物"是指樣品中其存在和/或濃度待測(cè)定的物質(zhì)。術(shù) 語(yǔ)"分析物"包括針對(duì)其存在特異性反應(yīng)伴侶，例如，特異性結(jié)合分析物的結(jié)合分子或物質(zhì)， 如抗體，或與分析物特異性反應(yīng)的分子，如酶）或可以針對(duì)其制備特異性結(jié)合伴侶的任何 物質(zhì)。
[0045] 在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)"特定分析物"意指對(duì)于待測(cè)量的樣品中的每種分析 物，可以測(cè)定特定校準(zhǔn)曲線和特定波長(zhǎng)和反應(yīng)時(shí)間，將其針對(duì)每種特定分析物優(yōu)化以定量 濃度，且其可以從分析物至分析物有差異。
[0046] 如本文中所使用，術(shù)語(yǔ)"分析物特異性反應(yīng)伴侶"能夠與特定分析物反應(yīng)，從而形 成反應(yīng)復(fù)合物，如抗原-抗體免疫復(fù)合物，或形成新的產(chǎn)物，如由酶-底物反應(yīng)導(dǎo)致產(chǎn)生的 產(chǎn)物。典型的分析物特異性反應(yīng)伴侶包括，但不限于，在分析物存在的情況下導(dǎo)致顏色變 化的結(jié)合蛋白、抗原、抗原片段、抗體、抗體片段、核酸、受體和顆粒增強(qiáng)結(jié)合伴侶、酶、底物 (在分析物是酶的情況下）、輔因子、特定化學(xué)試劑。對(duì)于給定分析物特異性的此類反應(yīng)伴 侶可以從商業(yè)來(lái)源獲得，或者可以根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)程序制備。分析物特異 性反應(yīng)伴侶對(duì)的實(shí)例包括，但不限于，半抗原：抗體，細(xì)胞：抗體，生物素：抗生物素蛋白，激 素：受體，多肽：抗體，寡核苷酸：互補(bǔ)DNA或RNA，酶-底物，酶-輔因子-底物，酶-介質(zhì)-底 物。對(duì)于導(dǎo)致形成與分析物的結(jié)合復(fù)合物的分析物特異性反應(yīng)伴侶，因?yàn)檫@是抗體的情況， 所以術(shù)語(yǔ)"分析物特異性結(jié)合伴侶"可以同樣用來(lái)代替"分析物特異性反應(yīng)伴侶"。
[0047] 如本文中所使用，術(shù)語(yǔ)"抗體"是指響應(yīng)于外來(lái)物質(zhì)的檢測(cè)產(chǎn)生的免疫球蛋白，并 且包括完整分子以及其功能片段，諸如Fab、F(ab' )2、和Fv。可以用作本發(fā)明的測(cè)定法中 的免疫結(jié)合伴侶的抗體包括任何物種的多克隆抗體，任何物種的單克隆抗體（包括嵌合抗 體和/或重組抗體）。因?yàn)樗鼈儽粺o(wú)限量相同產(chǎn)生的能力，所以單克隆抗體或其片段通常是 優(yōu)選的。
[0048] 如本文中所使用，術(shù)語(yǔ)"抗原"特征在于其在抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)處被結(jié)合的能 力。被抗體識(shí)別且抗體結(jié)合的抗原的區(qū)域被稱為"表位"?？乖钱?dāng)引入動(dòng)物或人體時(shí)能夠 誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，即抗體產(chǎn)生，的物質(zhì)。半抗原是只有當(dāng)連接至大載體諸如蛋白時(shí)才可以引發(fā) 免疫應(yīng)答的小分子。載體可以是自身也不會(huì)引發(fā)免疫應(yīng)答的載體。一旦機(jī)體已經(jīng)生成針對(duì) 半抗原-載體加成物的抗體，小分子半抗原也可以能夠結(jié)合抗體。
[0049] 如本文中所使用，術(shù)語(yǔ)"樣品"是指選自血液即全血、血漿或血清，或尿液，CSF，痰 的體液的樣品，或是指分離的細(xì)胞的樣品，或是指來(lái)自各個(gè)個(gè)體的組織或器官的樣品。體液 樣品可以通過(guò)眾所周知的技術(shù)來(lái)分離。組織或器官樣品可以從任何組織或器官通過(guò)，例如， 組織活檢來(lái)分離。分離的細(xì)胞可以從體液或組織或器官通過(guò)分離技術(shù)諸如離心或細(xì)胞分選 來(lái)分離。優(yōu)選地，來(lái)自細(xì)胞、組織或器官樣品的裂解物從表達(dá)或產(chǎn)生本文所述的肽的那些細(xì) 胞、組織或器官中分離。
[0050] 如本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)"干擾"被定義為樣品中存在的物質(zhì)改變結(jié)果的正確值 的影響。如本文中所使用的顯示干擾的樣品是指具有一種或多種干擾物質(zhì)諸如血紅蛋白、 膽紅素和脂質(zhì)或在通常用于分光光度測(cè)試的波長(zhǎng)吸收或散射光的其他干擾物質(zhì)的樣品。其 他干擾物質(zhì)是由治療、濫用或免疫球蛋白引起的藥物和藥劑。有時(shí)，在高濃度的干擾物質(zhì)的 情況下，甚至可能通過(guò)其顏色對(duì)血清樣品目視分類。
[0051] 術(shù)語(yǔ)"溶血"被定義為紅細(xì)胞和其他血細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)組分釋放到細(xì)胞外液，并且可 以通過(guò)不同的機(jī)制引起。體內(nèi)或體外溶血可以引起結(jié)果的明顯降低或增加。細(xì)胞內(nèi)濃度比 細(xì)胞外濃度高10倍的細(xì)胞組分在溶血過(guò)程中在血漿/血清中增加（例如鉀、乳酸脫氫酶、 天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶）。血漿和血清之間的分析物濃度的差異也是由于血細(xì)胞的裂解（基本上 通過(guò)血小板）：因此，神經(jīng)元特異性烯醇化酶、鉀和酸性磷酸酶在血清中較高。
[0052] 血細(xì)胞成分可以直接或間接干擾分析物的測(cè)量。從紅細(xì)胞釋放的腺苷酸激酶可 以導(dǎo)致肌酸激酶和CK-MB活性的增加，特別是當(dāng)測(cè)定混合物中腺苷酸激酶的抑制劑是不足 時(shí)。相反，CK-MB的免疫化學(xué)定量不受腺苷酸激酶影響。游離血紅蛋白的假過(guò)氧化物酶活 性負(fù)責(zé)通過(guò)抑制重氮顏色形成而干擾Jendrassik和Groof的膽紅素程序。從血細(xì)胞釋放 的蛋白酶可以降低凝血因子的活性，同時(shí)可以增加纖維蛋白裂解產(chǎn)物形成。
[0053] 如本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)"膽紅素"在血漿中作為游離分子存在和共價(jià)結(jié)合至白 蛋白。在使用濁度原理的凝血分析儀中，超過(guò)25 Mffl〇l/L的膽紅素濃度導(dǎo)致抗凝血酶III的 測(cè)量值的臨床相關(guān)的變化。在較高膽紅素濃度，干擾在某些凝血測(cè)試中將是顯著的。膽紅 素由于在堿性條件下的氧化導(dǎo)致的吸收降低是在未去蛋白的情況下膽紅素干擾Jaff6方 法的修改方案的主要原因。
[0054] 在強(qiáng)酸性環(huán)境中，綴合膽紅素的吸收轉(zhuǎn)移到UV波長(zhǎng)，因此引起用鑰磷酸鹽方法通 過(guò)其還原作用測(cè)定磷酸鹽的干擾。
[0055] 膽紅素干擾基于氧化酶/過(guò)氧化物酶的測(cè)試系統(tǒng)。與其濃度成比例，膽紅素可以 與測(cè)試系統(tǒng)中形成的H202反應(yīng)，這引起用于測(cè)量葡萄糖、膽固醇、甘油三酯、尿酸和肌酸酐 的酶促程序的系統(tǒng)性降低的結(jié)果。膽紅素競(jìng)爭(zhēng)性干擾染料與白蛋白的結(jié)合。
[0056] 如本發(fā)明中使用的術(shù)語(yǔ)"脂血"被定義為肉眼可見的血清或血漿樣品中的渾濁。這 通常在高于300 mg/dl (3.4 mmol/L)的甘油三酯濃度觀察到。渾濁的最常見原因是甘油三 酯的濃度增加。脂質(zhì)干擾幾乎所有通過(guò)光散射和吸收的光度測(cè)量。表觀結(jié)果可以基于設(shè)置 空白程序增加或降低。在較高濁度，可能由于該方法線性的限制而無(wú)法測(cè)量。脂蛋白通過(guò) 降低樣品體積的可用水降低分析物的表觀濃度，這是由于分析物濃度的計(jì)算中包括血漿或 血清中的脂蛋白采取的體積。當(dāng)血漿或血清通過(guò)火焰光度法和通過(guò)與直接電勢(shì)測(cè)定法相反 的使用離子敏感電極的間接測(cè)量來(lái)測(cè)量時(shí)，這是脂血血清中較低的鈉和鉀濃度的原因。當(dāng) 脂蛋白沒有均勻分布在血清/血漿樣品中時(shí)，離心后進(jìn)行相同的觀察：水相中溶解的分析 物的濃度在樣品上層中小于樣品下部相中。對(duì)于脂質(zhì)和脂溶性成分（包括脂蛋白結(jié)合的某 些藥物）的濃度，反過(guò)來(lái)也是如此。通過(guò)脂蛋白提取的成分對(duì)于用于檢測(cè)的試劑諸如抗體 可能無(wú)法接近。以類似方式，電泳和層析程序可能受到基質(zhì)中存在的脂蛋白影響。
[0057] 干擾物質(zhì)的存在和量或其不存在可以通過(guò)干擾測(cè)試來(lái)檢測(cè)。干擾測(cè)試的一個(gè)實(shí)例 是"血清指標(biāo)"測(cè)試，其在實(shí)驗(yàn)室分析儀上處理樣品的同時(shí)進(jìn)行：通過(guò)進(jìn)行所謂的血清指標(biāo)， 可以計(jì)算吸光度測(cè)量值，以提供未知樣品中存在的黃疸、溶血或脂血水平的半定量表示。可 以針對(duì)血紅蛋白、膽紅素和脂質(zhì)的主要干擾物質(zhì)生成定量指標(biāo)值，表示為H-指標(biāo)（溶血）、 I-指標(biāo)（黃疸）和L-指標(biāo)（脂血）。對(duì)于脂血（L)的測(cè)量，使用波長(zhǎng)700/660 nm，因?yàn)樵?范圍不受溶血和黃疸影響。溶血（H)在600/570 nm測(cè)量，且針對(duì)由于脂血導(dǎo)致的吸收進(jìn)行 校正。黃疸（I )在505/480 nm測(cè)量，且針對(duì)由于脂血和溶血導(dǎo)致的吸收進(jìn)行校正。可以 在處理樣品的同時(shí)評(píng)價(jià)樣品的質(zhì)量。基于在Roche/Hitachi系統(tǒng)/Cobas Integra系統(tǒng)/ cobas分析儀上測(cè)定的特定分析物的血清和血漿的血清指標(biāo)的干擾的詳細(xì)列表顯示在手冊(cè) "Cobas, serum indices:reduction of clinical errors in laboratory medicine，'中。
[0058] 如本文所使用的術(shù)語(yǔ)"截止值"用于干擾物質(zhì)的定義量。在血清指標(biāo)測(cè)試的情況 下，干擾物質(zhì)的定義量的單位為血清指標(biāo)值，表示為H(用于血紅蛋白）、L(用于脂質(zhì)）和 1(用于膽紅素）值。
[0059] 如本文所使用的術(shù)語(yǔ)"多個(gè)波長(zhǎng)"是指用本領(lǐng)域中已知的多波長(zhǎng)光度計(jì)生成的波 長(zhǎng)。常見光度計(jì)是分光光度計(jì)或用于濁度免疫測(cè)定法的濁度計(jì)和用于比濁免疫測(cè)定法的比 濁計(jì)。優(yōu)選用于比色測(cè)定法和濁度和比濁免疫測(cè)定法的是分光光度計(jì)。在cobas? c儀器 上檢測(cè)這些測(cè)定法基于具有鹵鎢燈作為照射源、用于生成單色光的光柵和光電二極管陣列 (產(chǎn)生340和800 nm之間的12個(gè)波長(zhǎng)的12個(gè)二極管）作為檢測(cè)器的光度計(jì)。光度計(jì)，例 如Roche的分析儀cobas c? 311具有同時(shí)測(cè)量300 nm至800 ± 2 nm之間的12個(gè)波長(zhǎng) 的能力。優(yōu)選使用的是波長(zhǎng) 340、376、415、450、480、505、546、570、600、660、700、800 ±2 nm。如果用于具有同時(shí)測(cè)量多個(gè)波長(zhǎng)的能力的自動(dòng)分析儀，諸如cobas c 311，則本發(fā)明的 方法是特別有利的。根據(jù)選擇的分光光度計(jì)的結(jié)構(gòu)和可用波長(zhǎng)（其從設(shè)備至設(shè)備可不同）， 從多個(gè)波長(zhǎng)選擇一個(gè)或多個(gè)特定波長(zhǎng)。該測(cè)量?jī)?yōu)選在定義溫度，優(yōu)選20和40攝氏度之間， 最優(yōu)選在37 °C進(jìn)行。
[0060] 如本文中所使用，術(shù)語(yǔ)"光信號(hào)"描述通過(guò)進(jìn)行反應(yīng)混合物的吸光度測(cè)量而獲得的 信號(hào)。光信號(hào)可以是在濁度和比色測(cè)定法的情況下的吸光度值，或比濁測(cè)定法的散射光信 號(hào)。樣品中特定分析物的光信號(hào)可以在多個(gè)波長(zhǎng)在反應(yīng)混合物中，優(yōu)選在完整反應(yīng)時(shí)間在 一次運(yùn)行中，同時(shí)測(cè)量。根據(jù)樣品中存在的干擾物質(zhì)，例如膽紅素和/或血紅蛋白和/或脂 質(zhì)和/或其他干擾物質(zhì)，通過(guò)與所選校準(zhǔn)曲線比較來(lái)定量待測(cè)定樣品的特定分析物的量。 用于定量特定分析物的校準(zhǔn)曲線的選擇可以額外根據(jù)對(duì)于樣品中特定分析物獲得的光信 號(hào)的幅度，因此考慮，樣品中特定分析物的濃度是否是低或中或高。
[0061] 通常的做法是通過(guò)使用"校準(zhǔn)曲線"（通常也稱為標(biāo)準(zhǔn)曲線或工作曲線）來(lái)確定 分析物的濃度，所述校準(zhǔn)曲線已經(jīng)通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)樣品中分析物的已知濃度和標(biāo)準(zhǔn)樣品的分 析測(cè)量值（光信號(hào)）諸如光密度之間的相互關(guān)系來(lái)預(yù)先繪制。當(dāng)校準(zhǔn)曲線在定量分析區(qū)域 中的較寬范圍內(nèi)具有足夠線性度時(shí)，校準(zhǔn)曲線可以用相對(duì)較小數(shù)量的標(biāo)準(zhǔn)樣品來(lái)制備，所 述標(biāo)準(zhǔn)樣品靠近定量分析的測(cè)定范圍中的上限、下限和在中間點(diǎn)。然而，在實(shí)踐中，存在許 多通常不是線性的校準(zhǔn)曲線。從特定波長(zhǎng)的吸光度制備的濁度、比濁或比色測(cè)定法的校準(zhǔn) 曲線可以是非線性的S形校準(zhǔn)曲線，其中靈敏度在接近零的濃度處變差，并且在較高濃度 側(cè)是飽和的。S形校準(zhǔn)的確定需要多點(diǎn)校準(zhǔn)，其中必須使用多個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品。
[0062] 當(dāng)生成用于基于反應(yīng)混合物的濁度測(cè)量的凝集測(cè)定法的校準(zhǔn)曲線時(shí)，波長(zhǎng)的選 擇，除了反應(yīng)時(shí)間之外，對(duì)于曲線的斜率（分析靈敏度）和可實(shí)現(xiàn)的上部測(cè)量范圍發(fā)揮至關(guān) 重要的作用。對(duì)于直接測(cè)定形式，小波長(zhǎng)可以導(dǎo)致產(chǎn)生具有高斜率和高信號(hào)的校準(zhǔn)曲線，而 對(duì)于高濃度區(qū)域，曲線可以變得初期平坦，導(dǎo)致對(duì)于高濃度的相當(dāng)?shù)男盘?hào)值，且結(jié)果也導(dǎo)致 低檢測(cè)上限。另一方面，較大波長(zhǎng)可以導(dǎo)致具有小斜率的曲線，但對(duì)于在高濃度區(qū)域?qū)е驴?區(qū)分的信號(hào)值。因此，選擇一個(gè)波長(zhǎng)和對(duì)應(yīng)的反應(yīng)時(shí)間用于目標(biāo)在于生成校準(zhǔn)曲線的信號(hào) 計(jì)算可以是分析靈敏度和上部測(cè)量范圍之間的折衷。在比色測(cè)定法中遇到類似情況。選擇 形成的有色產(chǎn)物的吸收最大值附近的波長(zhǎng)確保了高信號(hào)和高靈敏度，另一方面，對(duì)于高分 析物濃度的信號(hào)可以在檢測(cè)器的指定光范圍之外。
[0063] 本發(fā)明的校準(zhǔn)曲線針對(duì)特定分析物預(yù)先確定，且通過(guò)用于其計(jì)算的參數(shù)進(jìn)行表 征：波長(zhǎng)、反應(yīng)時(shí)間、校準(zhǔn)點(diǎn)數(shù)量、校準(zhǔn)模式和測(cè)定類型。為了測(cè)定樣品的特定分析物，對(duì)于 多個(gè)波長(zhǎng)生成多條校準(zhǔn)曲線，每種校準(zhǔn)曲線針對(duì)以下情況進(jìn)行優(yōu)化： _無(wú)干擾樣品， -溶血樣品 _黃痕樣品 -脂血樣品 -溶血和黃疸樣品 -溶血和脂血樣品 -黃疸和脂血樣品 -溶血、黃疸和脂血樣品 _以及還例如額外考慮樣品中存在的特定分析物的量的樣品情形，高、低或中。
[0064] 作為具有低濃度特定分析物的黃疸樣品的實(shí)例，將校準(zhǔn)曲線優(yōu)化用于降低黃疸干 擾，且同時(shí)實(shí)現(xiàn)高分析靈敏度。
[0065] 將測(cè)量結(jié)果存儲(chǔ)在儀器平臺(tái)的數(shù)據(jù)管理系統(tǒng)中。通過(guò)將樣品與分析物特異性測(cè)定 試劑混合制備測(cè)量樣品之后，允許反應(yīng)混合物反應(yīng)給定的完整反應(yīng)時(shí)間。在完整反應(yīng)時(shí)間 在上述用于記錄校準(zhǔn)曲線的多個(gè)波長(zhǎng)同時(shí)測(cè)量反應(yīng)混合物中待測(cè)定樣品中特定分析物的 光信號(hào)。
[0066] 在樣品測(cè)量的同時(shí)，進(jìn)行干擾測(cè)試，如血清指標(biāo)評(píng)估，用于定量待測(cè)定樣品中存在 的膽紅素和/或血紅蛋白和/或脂質(zhì)和/或其他干擾物質(zhì)的量，并且將每種干擾物質(zhì)的量 與預(yù)定截止值進(jìn)行比較。
[0067] 最后，根據(jù)干擾測(cè)試中發(fā)現(xiàn)的干擾選擇校準(zhǔn)曲線；并且除了干擾以外，也可以考慮 樣品中分析物的量用于選擇校準(zhǔn)曲線，其通過(guò)樣品的光信號(hào)的幅度來(lái)指示。
[0068] 平行于樣品中待測(cè)定的特定分析物的測(cè)量，在實(shí)驗(yàn)室分析儀上進(jìn)行定量血清指標(biāo) 評(píng)價(jià)，用于定量主要干擾物質(zhì)，諸如血紅蛋白、膽紅素和脂質(zhì)血清指標(biāo)。如果針對(duì)待測(cè)定樣 品檢測(cè)干擾物質(zhì)，則選擇波長(zhǎng)用于其定量，所述波長(zhǎng)在干擾物質(zhì)的吸收范圍之外，但鄰近于 待測(cè)定的特定分析物的測(cè)定混合物的吸收最大值，以確保高信號(hào)和最佳靈敏度。
[0069] 對(duì)于本發(fā)明的每種干擾類型及其組合，建立特定校準(zhǔn)曲線。優(yōu)化校準(zhǔn)曲線，以降低 對(duì)于一定濃度范圍的顯示干擾的樣品的干擾。校準(zhǔn)曲線可以在包含測(cè)量波長(zhǎng)、反應(yīng)時(shí)間、校 準(zhǔn)模式、校準(zhǔn)點(diǎn)數(shù)量的多個(gè)條件下生成，并且針對(duì)每種待測(cè)定的特定分析物進(jìn)行預(yù)先確定。 將所有測(cè)量結(jié)果存儲(chǔ)在儀器平臺(tái)的數(shù)據(jù)管理系統(tǒng)中并自動(dòng)評(píng)價(jià)。
[0070] 通過(guò)使用這些替代波長(zhǎng)和反應(yīng)時(shí)間，其意指在干擾物質(zhì)不吸收或在較小程度上吸 收的波長(zhǎng)測(cè)量，實(shí)現(xiàn)了干擾的降低。
[0071] 如本文所使用的術(shù)語(yǔ)"測(cè)定類型"是指分析儀上的兩種基本類型的光度測(cè)定法：終 點(diǎn)測(cè)定法和速率測(cè)定法。測(cè)量由光度計(jì)在特定時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行。如果測(cè)量在反應(yīng)完成后進(jìn)行， 則顯色（或濁度）產(chǎn)品的強(qiáng)度是樣品組分濃度的指標(biāo)。這些被稱為終點(diǎn)測(cè)定法。對(duì)于速率 測(cè)定法，反應(yīng)速率與分析的樣品組分的濃度或活性成比例。測(cè)量在反應(yīng)進(jìn)行時(shí)進(jìn)行。在該 儀器中可能還存在這兩種技術(shù)的改良，以及兩者的組合。
[0072] 如本文中所使用的術(shù)語(yǔ)"反應(yīng)時(shí)間"是在終點(diǎn)測(cè)定的情況下用于計(jì)算其信號(hào)值的 光信號(hào)的第一（或初始）和第二（或最終）測(cè)量之間的時(shí)間段。第一（或初始）測(cè)量在將 最終試劑添加至反應(yīng)混合物之前或之后不久進(jìn)行。在動(dòng)力學(xué)測(cè)量的情況下，反應(yīng)時(shí)間可以 是用于計(jì)算表示每單位時(shí)間的吸光度變化的值的時(shí)間段。"反應(yīng)時(shí)間"可以與"完整反應(yīng)時(shí) 間"相同或比其更短。完整反應(yīng)時(shí)間是允許由樣品和分析物特異性檢測(cè)試劑構(gòu)成的反應(yīng)混 合物在它們混合后反應(yīng)的時(shí)間。
[0073] 如本文所使用的術(shù)語(yǔ)"校準(zhǔn)模式"是指測(cè)量的信號(hào)[吸光度或（對(duì)于速率測(cè)定）吸 光度變化的速率]和目標(biāo)分析物的濃度之間的有效關(guān)系的確定。此類信號(hào)/濃度關(guān)系的圖 形表示是也稱為工作曲線的校準(zhǔn)曲線。分析儀使用不同類型的數(shù)學(xué)模型來(lái)描述這種關(guān)系。 這些數(shù)學(xué)模型被稱為校準(zhǔn)類型或校準(zhǔn)模式。存在兩種基本校準(zhǔn)模式，線性和非線性校準(zhǔn)模 式。當(dāng)針對(duì)校準(zhǔn)物濃度繪制的吸光度讀數(shù)位于一條直線上時(shí)，線性校準(zhǔn)用于測(cè)試。如果線 性校準(zhǔn)基于兩個(gè)校準(zhǔn)物測(cè)量，則它被稱為線性兩點(diǎn)校準(zhǔn)。如果它基于多于兩種校準(zhǔn)物，則其 被稱為線性多點(diǎn)校準(zhǔn)。
[0074] 非線性校準(zhǔn)用于其在不同濃度的吸光度形成非線性、但可重復(fù)的圖的測(cè)試。對(duì)于 校準(zhǔn)需要至少三種和最多六種校準(zhǔn)物。典型的非線性校準(zhǔn)類型是rodbard函數(shù)。此外，存 在校準(zhǔn)類型，其校準(zhǔn)曲線是分段定義的內(nèi)插函數(shù)，如樣條（Spline)。
[0075] 如本文所使用的術(shù)語(yǔ)校準(zhǔn)點(diǎn)的數(shù)量是用于生成校準(zhǔn)曲線的也稱為樣品標(biāo)準(zhǔn)品的 校準(zhǔn)物的數(shù)量。每個(gè)經(jīng)優(yōu)化以降低某種干擾物質(zhì)的干擾的校準(zhǔn)曲線的實(shí)例描述如下： 本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案是用于未顯示干擾的樣品的校準(zhǔn)曲線1。
[0076] 本發(fā)明的一個(gè)進(jìn)一步實(shí)施方案是經(jīng)優(yōu)化用于顯示溶血干擾的樣品的校準(zhǔn)曲線2。
[0077] 本發(fā)明的一個(gè)進(jìn)一步實(shí)施方案是經(jīng)優(yōu)化用于顯示黃疸干擾的樣品的校準(zhǔn)曲線3。
[0078] 本發(fā)明的一個(gè)進(jìn)一步實(shí)施方案是經(jīng)優(yōu)化用于顯示脂血干擾的樣品的校準(zhǔn)曲線4。
[0079] 本發(fā)明的一個(gè)進(jìn)一步實(shí)施方案是經(jīng)優(yōu)化用于顯示溶血和黃疸或脂血干擾的樣品 的校準(zhǔn)曲線5。
[0080] 本發(fā)明的一個(gè)進(jìn)一步實(shí)施方案是經(jīng)優(yōu)化用于在低分析物濃度顯示溶血和/或脂 血和/或黃疸干擾的樣品的校準(zhǔn)曲線6。如本文中所使用的術(shù)語(yǔ)"校準(zhǔn)曲線6"從在經(jīng)優(yōu)化 以實(shí)現(xiàn)令人滿意的檢測(cè)下限的波長(zhǎng)和在經(jīng)優(yōu)化以降低干擾的相同時(shí)間的反應(yīng)混合物的光 信號(hào)生成。在經(jīng)優(yōu)化用于低濃度的特定分析物（從而優(yōu)化檢測(cè)下限）的波長(zhǎng)和在經(jīng)優(yōu)化以 降低干擾的相同時(shí)間記錄校準(zhǔn)曲線6。
[0081] 本發(fā)明的一個(gè)進(jìn)一步實(shí)施方案是經(jīng)優(yōu)化用于在高分析物濃度顯示溶血和/或脂 血和/或黃疸干擾的樣品的校準(zhǔn)曲線7。如本文中所使用的術(shù)語(yǔ)"校準(zhǔn)曲線7"從在經(jīng)優(yōu)化 以實(shí)現(xiàn)令人滿意的檢測(cè)上限的波長(zhǎng)和在經(jīng)優(yōu)化以降低干擾的相同時(shí)間的反應(yīng)混合物的光 信號(hào)生成。在經(jīng)優(yōu)化用于高濃度的特定分析物（從而優(yōu)化檢測(cè)上限）的波長(zhǎng)和在經(jīng)優(yōu)化以 降低干擾的相同時(shí)間記錄校準(zhǔn)曲線7。
[0082] 本發(fā)明的一個(gè)進(jìn)一步實(shí)施方案是使用多于2條校準(zhǔn)曲線，其可以在測(cè)量范圍定 義，各自經(jīng)優(yōu)化以降低某一濃度范圍的樣品的干擾。
[0083] 根據(jù)光信號(hào)值和干擾物質(zhì)，理想地，選擇如上所述的一種合適的校準(zhǔn)曲線，用于定 量特定分析物，且特定分析物的量通過(guò)與選擇的校準(zhǔn)曲線比較來(lái)定量。
[0084] 如本發(fā)明中進(jìn)行的用多條校準(zhǔn)曲線、而不是一條校準(zhǔn)曲線工作還可以顯示進(jìn)一步 的益處，諸如減輕與所需校準(zhǔn)物的數(shù)量和濃度相關(guān)的問題以及用于校準(zhǔn)曲線的曲線擬合程 序。
[0085] 通過(guò)在特征在于測(cè)量波長(zhǎng)、反應(yīng)時(shí)間、校準(zhǔn)模式、校準(zhǔn)點(diǎn)數(shù)量（其針對(duì)特定分析物 應(yīng)用進(jìn)行預(yù)先確定）的多個(gè)條件下生成多條校準(zhǔn)曲線，現(xiàn)在可能與標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)相比更精確地 測(cè)量這些樣品的特定分析物。
[0086] 通過(guò)以下標(biāo)準(zhǔn)選擇在所選波長(zhǎng)和所選反應(yīng)時(shí)間記錄的校準(zhǔn)曲線，用于定量特定分 析物以計(jì)算分析物濃度： 1.為了選擇校準(zhǔn)曲線，理想地在分析儀上自動(dòng)作出決定，樣品是否顯示干擾，如果是， 則何種類型的干擾，溶血、黃疸和/或脂血。通過(guò)將表示為H-指標(biāo)（溶血）、I-指標(biāo)（黃 疸）和L-指標(biāo)（脂血）的對(duì)于每種干擾物質(zhì)獲得的濃度與預(yù)定的截止值比較用從干擾測(cè) 試或血清指標(biāo)測(cè)試獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行這種決定。作為結(jié)果，獲得樣品中存在的干擾的類型：樣 品可以是無(wú)干擾的，或者是溶血的，或者是黃疸的，或者是脂血的，或者是溶血的和/或黃 疸的和/或脂血的組合。根據(jù)存在于樣品中的干擾物質(zhì)，選擇校準(zhǔn)曲線用于其定量：用于以 下的校準(zhǔn)曲線 -無(wú)干擾樣品，在最佳波長(zhǎng)L(無(wú)干擾）和最佳反應(yīng)時(shí)間t(無(wú)干擾）記錄，或 -溶血樣品，在最佳波長(zhǎng)L(H)和最佳反應(yīng)時(shí)間t(H)記錄，或 -黃疸樣品，在最佳波長(zhǎng)L(I)和最佳反應(yīng)時(shí)間t(I)記錄，或 -脂血樣品，在最佳波長(zhǎng)L(L)和最佳反應(yīng)時(shí)間t(L)記錄，或 -溶血和黃疸樣品，在最佳波長(zhǎng)L(HI)和最佳反應(yīng)時(shí)間t(HI)記錄，或 -溶血和脂血樣品，在最佳波長(zhǎng)L(HL)和最佳反應(yīng)時(shí)間t(HL)記錄，或 -黃疸和脂血樣品，在最佳波長(zhǎng)L(IL)和最佳反應(yīng)時(shí)間t(IL)記錄，或 -溶血和黃疸以及脂血樣品，在最佳波長(zhǎng)L(HIL)和最佳反應(yīng)時(shí)間t(HIL)記錄。
[0087] 2.除了干擾以外，還可以通過(guò)考慮樣品中存在的分析物量選擇校準(zhǔn)曲線：此處， 進(jìn)行樣品的特定分析物的測(cè)量的光信號(hào)的幅度與預(yù)定閾值的比較，以決定樣品是否具有高 或低的分析物濃度。在此類情況下，將生成兩條校準(zhǔn)曲線來(lái)覆蓋用于定量分析物的測(cè)量范 圍， -對(duì)于低濃度樣品，在最佳第一波長(zhǎng)和最佳第一反應(yīng)時(shí)間記錄的第一校準(zhǔn)曲線，和 -對(duì)于高濃度樣品，在最佳第二波長(zhǎng)和最佳第二反應(yīng)時(shí)間記錄的第二校準(zhǔn)曲線。
[0088] 根據(jù)測(cè)量的樣品是否產(chǎn)生超過(guò)或低于閾值的其計(jì)算的光信號(hào)或濃度值，將使用兩 條校準(zhǔn)曲線之一用于定量分析物。如果必要，可以考慮更多濃度水平，如高、中和低濃度水 平之間的差異；在這種情況下，定義2個(gè)預(yù)定閾值以選擇校準(zhǔn)曲線。
[0089] 如本文中所使用，術(shù)語(yǔ)"第一波長(zhǎng)"和第一反應(yīng)時(shí)間針對(duì)特定分析物的低濃度進(jìn)行 優(yōu)化，從而盡可能提高檢測(cè)下限。這意指第一波長(zhǎng)組合第一反應(yīng)時(shí)間生成，例如，在直接測(cè) 定形式的情況下的高信號(hào)，導(dǎo)致具有高分析靈敏度的校準(zhǔn)曲線。
[0090] 靈敏度、分析靈敏度、檢測(cè)下限（LDL)、空白限值（L0B)、檢測(cè)限值（L0D)和定量限 值（L0Q)是用來(lái)描述可以通過(guò)分析方法可靠測(cè)量的量度的最小濃度的術(shù)語(yǔ)。所有這些術(shù)語(yǔ) 都相關(guān)，但具有不同的定義（siehe Lit. clin biochem rev 2008，29，49)。例如，術(shù)語(yǔ) "分析靈敏度"被定義為校準(zhǔn)曲線的斜率。如本文中所使用，術(shù)語(yǔ)"檢測(cè)下限"（LDL)也被稱 為較低測(cè)量范圍。估計(jì)LDL的一種典型方法由測(cè)量零校準(zhǔn)物或空白樣品的重復(fù)（諸如n= 21)，確定平均值x和標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD)組成。LDL計(jì)算為x+2SD或x+3SD。這種用于LDL測(cè) 定的方法根據(jù) Kaiser (H. Kaiser, Fresenius Zeitschrift fiir analytische Chemie, 1965，209，Nr. 1，第1-18頁(yè)）描述的方法。如果（在完整反應(yīng)時(shí)間至少在第一和第二波 長(zhǎng)同時(shí)測(cè)量的樣品的光信號(hào)中）樣品的至少一種光信號(hào)或其計(jì)算的至少一個(gè)信號(hào)值低于 對(duì)應(yīng)的預(yù)定閾值，則分析物的濃度通過(guò)與對(duì)于具有漸增校準(zhǔn)曲線的測(cè)定的第一波長(zhǎng)和第一 反應(yīng)時(shí)間的校準(zhǔn)曲線的比較來(lái)確定。
[0091] 如本文中所使用，術(shù)語(yǔ)"第二波長(zhǎng)"和第二反應(yīng)時(shí)間針對(duì)特定分析物的高濃度進(jìn)行 優(yōu)化，從而盡可能提高檢測(cè)上限。這意指第二波長(zhǎng)和第二反應(yīng)時(shí)間生成，例如，在直接測(cè)定 形式的情況下上部測(cè)量范圍中不同分析物濃度的可區(qū)分信號(hào)，導(dǎo)致具有高上部測(cè)量范圍的 校準(zhǔn)曲線。
[0092] 第一和第二波長(zhǎng)是不同的，理想地相差至少5nm，或是相同的，并且，第一和第二反 應(yīng)時(shí)間可以是不同或相同的。
[0093] 如本文中所使用，術(shù)語(yǔ)"檢測(cè)上限"（UDL)也被稱為上部測(cè)量范圍。UDL是可以可 靠地測(cè)定的樣品中分析物的最高量。在本發(fā)明中，UDL通過(guò)評(píng)價(jià)該方法的線性度、然后選擇 線性范圍內(nèi)的最高濃度值作為UDL來(lái)測(cè)定。當(dāng)從一系列樣品溶液的分析物回收率（測(cè)量 值）與樣品溶液中分析物的實(shí)際濃度（真實(shí)值）成比例時(shí)，該方法被稱為是線性的（Arch Pathol Lab Med 2004，128，第44-48頁(yè)）。校準(zhǔn)曲線的形式（其可以是拋物線或S形的） 不應(yīng)當(dāng)與描述測(cè)量值和真實(shí)值之間關(guān)系的方法的線性度混淆。校準(zhǔn)曲線描述信號(hào)和濃度之 間的關(guān)系。
[0094] 在本發(fā)明上下文中的術(shù)語(yǔ)"動(dòng)態(tài)范圍"描述測(cè)定法的測(cè)量范圍的量級(jí)，且在此被定 義為檢測(cè)上限（UDL)與檢測(cè)下限（LDL)的比率。如果沒有另外說(shuō)明，我們使用術(shù)語(yǔ)測(cè)量范 圍作為在LDL開始且在UDL結(jié)束的濃度值。主要地，除了 LDL以外，可以使用其他靈敏度術(shù) 語(yǔ)，如L0D或L0Q，并且除了 UDL以外，描述上部測(cè)量范圍的還有其他術(shù)語(yǔ)也可以用于計(jì)算動(dòng) 態(tài)范圍。
[0095] 根據(jù)用于測(cè)量分析物的現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的波長(zhǎng)是所謂的"主要波長(zhǎng)"。
[0096] 本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案是，任選地，進(jìn)一步波長(zhǎng)被測(cè)定為用于校正干擾和補(bǔ)償光 度噪聲的空白值，也稱為雙色測(cè)量（clin. Chem. 1979，25，1482 - 1484)。對(duì)于兩個(gè)主要 波長(zhǎng)中每一個(gè)，如果記錄進(jìn)一步的波長(zhǎng)用于通過(guò)從主要波長(zhǎng)的信號(hào)減去校正波長(zhǎng)的信號(hào)的 校正目的，這是任選的。
[0097] 對(duì)于選擇用于定量顯示干擾的樣品中的特定分析物的各波長(zhǎng)和反應(yīng)時(shí)間，用同時(shí) 測(cè)量的標(biāo)準(zhǔn)樣品構(gòu)建一條或多條校準(zhǔn)曲線。
[0098] 如本文中所使用的術(shù)語(yǔ)"閾值"用于本方法的分析物的定義吸光度值或定義量，例 如表示為濃度值；優(yōu)選使用濃度值。當(dāng)對(duì)于分析物的定量使用一條或多條校準(zhǔn)曲線覆蓋測(cè) 量范圍時(shí)，將閾值應(yīng)用于本發(fā)明的方法。通常，使用2條校準(zhǔn)曲線，經(jīng)優(yōu)化用于定量具有低 分析物濃度的樣品的第一校準(zhǔn)曲線，和經(jīng)優(yōu)化用于定量具有高分析物濃度的樣品的第二校 準(zhǔn)曲線。理想地，閾值取自兩條校準(zhǔn)曲線從第一校準(zhǔn)曲線改變至第二校準(zhǔn)曲線的點(diǎn)。如實(shí) 施例2和圖3中所示，對(duì)于苯巴比妥測(cè)定，兩條校準(zhǔn)曲線用于定量脂血樣品，第一校準(zhǔn)曲線 覆蓋0至45 Mg/mL的濃度，第二校準(zhǔn)曲線覆蓋45至60 Mg/mL的濃度。在這種情況下的閾 值為45呢/ml。在與臨床決定值不一致的濃度選擇閾值對(duì)于IVD測(cè)定是重要的。
[0099] 對(duì)于閾值的選擇，通常存在廣泛的靈活性。重要的是，在選擇的閾值，兩條校準(zhǔn)曲 線都滿足與該方法的線性度和與精確度以及與靈敏度相關(guān)的要求。例如，第二校準(zhǔn)曲線理 想地應(yīng)當(dāng)具有至少覆蓋在所選閾值的濃度的LDL ;且第一校準(zhǔn)曲線理想地應(yīng)當(dāng)顯示至少直 至所述選擇的閾值的該方法的線性度。
[0100] 一種可能用于選擇用于本發(fā)明的校準(zhǔn)曲線的最佳測(cè)量條件的程序包括以下步 驟： 1.首先，在多個(gè)波長(zhǎng)生成一系列日期。對(duì)于我們的實(shí)施例1和2,在完整反應(yīng)時(shí)間在例 如cobas c 311分析儀上可用的12個(gè)波長(zhǎng)同時(shí)進(jìn)行以下樣品的吸光度值的測(cè)量： -用于校準(zhǔn)的一式兩份的至少2至6種標(biāo)準(zhǔn)品， -用于測(cè)定LDL的21份重復(fù)的空白樣品（分析物濃度=0)， -用于測(cè)定精確度（變異系數(shù)）的21份重復(fù)的至少2種樣品（2種不同的分析物濃 度）， -用于測(cè)定該方法的M)L和線性度的覆蓋例如比已知UDL高2-4倍的分析物濃度的稀 釋系列 _用于模擬含有漸增量干擾物質(zhì)的關(guān)鍵樣品的含有分析物和漸增量的干擾物質(zhì)（血 紅蛋白、膽紅素和/或脂質(zhì)）的樣品。
[0101] 2.根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)的方法完成用于定量無(wú)干擾樣品的校準(zhǔn)曲線的最佳波長(zhǎng)和反應(yīng) 時(shí)間的選擇。
[0102] 3.用于定量具有干擾物質(zhì)的樣品的校準(zhǔn)曲線的最佳波長(zhǎng)和反應(yīng)時(shí)間的選擇通過(guò) 選擇以下波長(zhǎng)來(lái)完成，所述波長(zhǎng)在干擾物質(zhì)的吸收范圍之外或幾乎之外，但其仍然最接近 于對(duì)于待測(cè)定的分析物特異性的測(cè)定混合物吸收最大值，以確保高信號(hào)，和因足夠的靈敏 度。然后使用點(diǎn)1中生成的數(shù)據(jù)通過(guò)試驗(yàn)和誤差方法選擇最佳反應(yīng)時(shí)間： 對(duì)于具有固定分析物濃度且用漸增量的干擾物質(zhì)摻入的樣品系列，在試驗(yàn)和誤差程序 中對(duì)于不同條件（如上定義的最佳波長(zhǎng)，反應(yīng)時(shí)間）確定理論分析物濃度（無(wú)干擾的樣品 的濃度）的回收率。當(dāng)理論分析物濃度的回收率在+/-10%之內(nèi)時(shí)，在給定濃度的干擾物質(zhì) 被定義為耐受的（或者顯示無(wú)干擾）。選擇相比于高濃度的干擾物質(zhì)產(chǎn)生最佳耐受的波長(zhǎng) 和反應(yīng)時(shí)間。
[0103] 對(duì)于這些選擇的波長(zhǎng)和反應(yīng)時(shí)間，計(jì)算UDL和LDL，且選擇產(chǎn)生最佳測(cè)量范圍的條 件（波長(zhǎng)和反應(yīng)時(shí)間）用于校準(zhǔn)曲線。理想地，應(yīng)當(dāng)覆蓋測(cè)量范圍，其與用來(lái)自點(diǎn)2的無(wú)干 擾樣品實(shí)現(xiàn)的測(cè)量范圍相當(dāng)。在實(shí)施例1中，應(yīng)用該程序。
[0104] 4.選擇用于定量具有干擾物質(zhì)的樣品的校準(zhǔn)曲線的最佳波長(zhǎng)和反應(yīng)時(shí)間且同時(shí) 額外考慮分析物量由降低干擾且同時(shí)獲得具有最佳測(cè)量范圍的校準(zhǔn)的目標(biāo)所驅(qū)動(dòng)。為了該 目的，定義至少兩條校準(zhǔn)曲線：用于低分析物濃度且因此覆蓋測(cè)量范圍的低端的在第一波 長(zhǎng)和第一反應(yīng)時(shí)間記錄的第一校準(zhǔn)曲線，和用于高分析物濃度且因此覆蓋測(cè)量范圍的高端 的在第二波長(zhǎng)和第二反應(yīng)時(shí)間記錄的第二校準(zhǔn)曲線。用于選擇最佳條件的可能方法包括： -對(duì)于如點(diǎn)3中所述的給定干擾選擇最佳波長(zhǎng)， _然后，對(duì)于至少一種具有低分析物濃度的樣品系列和一種具有高分析物濃度的樣品 系列，每種樣品系列摻入漸增量的干擾物質(zhì)，在試驗(yàn)和誤差程序中對(duì)于不同條件（如點(diǎn)3中 定義的最佳波長(zhǎng)，反應(yīng)時(shí)間）確定理論分析物濃度（無(wú)干擾的樣品的濃度）的回收率。當(dāng) 理論分析物濃度的回收率在+/-10%之內(nèi)時(shí)，在給定濃度的干擾物質(zhì)被定義為耐受的（或者 顯示無(wú)干擾）。選擇相比于高濃度的干擾物質(zhì)產(chǎn)生最佳耐受的波長(zhǎng)和反應(yīng)時(shí)間。
[0105] 對(duì)于這些選擇的波長(zhǎng)和反應(yīng)時(shí)間，計(jì)算UDL(對(duì)于高分析物樣品）和LDL(對(duì)于低 分析物樣品），且選擇產(chǎn)生最佳測(cè)量范圍的條件（波長(zhǎng)和反應(yīng)時(shí)間）用于第一校準(zhǔn)曲線（低 分析物樣品）和第二校準(zhǔn)曲線（高分析物樣品）。理想地，應(yīng)當(dāng)覆蓋測(cè)量范圍，其與用來(lái)自 點(diǎn)2的無(wú)干擾樣品實(shí)現(xiàn)的測(cè)量范圍相當(dāng)。在實(shí)施例2中，應(yīng)用該程序。
[0106] 本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案是提供用于校正校準(zhǔn)曲線的情況。
[0107] 如本文中所使用，術(shù)語(yǔ)"完整反應(yīng)時(shí)間"是在多個(gè)波長(zhǎng)測(cè)量特定分析物的時(shí)間段。 為了選擇最佳的兩個(gè)波長(zhǎng)（目的在于生成兩條校準(zhǔn)曲線），在cobas c?儀器上可用的12 個(gè)不同波長(zhǎng)同時(shí)測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)品。僅考慮處于檢測(cè)器的光學(xué)范圍內(nèi)的吸光度值（〇.〇〇〇〇 -3. 0000吸光度）。
[0108] 本免疫測(cè)定時(shí)間的典型完整反應(yīng)時(shí)間在1到20分鐘之間變化。優(yōu)選地，多波長(zhǎng)分 光光度計(jì)光度計(jì)的完整反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選為10分鐘左右。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案是在完整反 應(yīng)時(shí)間過(guò)程中測(cè)量特定分析物的光信號(hào)。最優(yōu)選地，至少在第一和第二主要波長(zhǎng)同時(shí)測(cè)量 特定分析物的光信號(hào)。如本文中所使用，術(shù)語(yǔ)"時(shí)間延遲"是用于檢測(cè)特定分析物的第一和 第二主要波長(zhǎng)之間的時(shí)間段。
[0109] 如本發(fā)明中所使用，術(shù)語(yǔ)"同時(shí)"可意指小于60X秒的時(shí)間延遲，例如小于10x秒、 優(yōu)選小于lx秒、最優(yōu)選小于1 ms或者甚至小于0. lx ms的時(shí)間延遲。最優(yōu)選地，術(shù)語(yǔ)"同 時(shí)"意指沒有時(shí)間延遲。
[0110] 本發(fā)明的一個(gè)進(jìn)一步方面是用于降低顯示溶血和/或黃疸和/或脂血干擾的樣品 的基于分光光度的實(shí)驗(yàn)室測(cè)試的干擾的方法，其中將包含測(cè)量波長(zhǎng)、測(cè)定點(diǎn)、校準(zhǔn)點(diǎn)和校準(zhǔn) 模式的特定測(cè)量條件額外應(yīng)用于測(cè)量方案，而無(wú)需應(yīng)用預(yù)分析樣品處理和/或改變測(cè)定方 法。
[0111] 一個(gè)實(shí)施方案進(jìn)一步是根據(jù)本發(fā)明的方法，其中根據(jù)樣品是否是溶血的和/或脂 血的和/或黃疸的選擇多條校準(zhǔn)曲線中的一條或多條，且通過(guò)與選擇的校準(zhǔn)曲線的比較定 量特定分析物的量。
[0112] 本發(fā)明的一個(gè)進(jìn)一步方面是額外應(yīng)用于測(cè)量方案的特定測(cè)量條件用于降低測(cè)定 可以顯示溶血和/或黃疸和/或脂血干擾的樣品中特定分析物的量的基于分光光度的實(shí)驗(yàn) 室測(cè)試的干擾的用途，所述特定測(cè)量條件包含測(cè)量波長(zhǎng)、反應(yīng)時(shí)間、校準(zhǔn)點(diǎn)、和校準(zhǔn)模式。
[0113] 本發(fā)明的一個(gè)進(jìn)一步方面是使用用于測(cè)量樣品中特定分析物的量的可商購(gòu)的分 光光度實(shí)驗(yàn)室測(cè)試的儀器平臺(tái)，所述樣品可以顯示溶血和/或黃疸和/或脂血干擾，其中所 述儀器平臺(tái)的數(shù)據(jù)管理系統(tǒng)能夠處理反應(yīng)時(shí)間、校準(zhǔn)點(diǎn)、校準(zhǔn)模式、波長(zhǎng)、血清指標(biāo)的數(shù)據(jù)， 用于選擇最佳擬合校準(zhǔn)曲線。
[0114] 附圖簡(jiǎn)述 m顯示干擾物質(zhì)膽紅素、血紅蛋白和脂質(zhì)的吸收光譜。
[0115] Ml顯示如實(shí)施例1中所述根據(jù)本發(fā)明的方法用于降低CRP測(cè)定中的溶血干擾的 可能工作流程。
[0116] Ml顯示如實(shí)施例2中所述根據(jù)本發(fā)明的方法用于降低苯巴比妥測(cè)定中的脂血干 擾的可能工作流程。 實(shí)施例
[0117] 實(shí)施例1 :CRP測(cè)定中溶血干擾的降低 本發(fā)明用于降低溶血樣品的干擾的方法的益處使用Roche的商業(yè)CRP L3測(cè)定法、膠乳 增強(qiáng)池度免疫測(cè)定法和Roche的cobas c311分析儀進(jìn)行評(píng)價(jià)。
[0118] 儀器 cobas c311: 具有多波長(zhǎng)分光光度計(jì)作為檢測(cè)單兀的Roche的（Roche Diagnostics GmbH) cobas c311分析儀用于本實(shí)驗(yàn)。該儀器自動(dòng)移取樣品和檢測(cè)試劑至反應(yīng)室（reaction cells)?？?以將多達(dá)3種不同試劑R1、R2和R3添加至樣品。該儀器使用鹵鎢燈作為照射源（12 V / 50 W)，并用由12個(gè)光電二極管組成的光電二極管陣列在12種不同波長(zhǎng)（在340、376、415、 450、480、505、546、570、600、660、700 和 800 ± 2 nm)同時(shí)測(cè)量吸光度。光路長(zhǎng)度為 5. 6 mm，且檢測(cè)器的光范圍為0.0000 - 3. 0000吸光度。對(duì)于每個(gè)反應(yīng)室（reaction cell)，測(cè) 量水空白，然后在10分鐘（在這里也稱為完整反應(yīng)時(shí)間）內(nèi)57次采集吸光度讀數(shù)，因此對(duì) 于每個(gè)波長(zhǎng)的吸光度得到總共57個(gè)測(cè)量點(diǎn)，也稱為光度點(diǎn)或測(cè)定點(diǎn)。濃度可以通過(guò)使用這 些測(cè)量點(diǎn)中的至少一個(gè)來(lái)計(jì)算。在該儀器上存在兩種基本類型的光度測(cè)定法：終點(diǎn)測(cè)定法 和速率測(cè)定法。測(cè)量在37攝氏度進(jìn)行。
[0119] CRP L3 測(cè)定法： Roche的CRP L3測(cè)試（CRPL3，目錄號(hào)04956842)的測(cè)定原理：具有用單克隆抗CRP 抗體包被的膠乳顆粒的人CRP凝集物；濁度測(cè)定該聚集物。
[0120] cobas c包裝中提供用于所有Roche測(cè)試的試劑。這些盒（cassettes)包含一至 三個(gè)特別設(shè)計(jì)的試劑瓶，且具有詳細(xì)的相關(guān)試劑和測(cè)試的條形碼標(biāo)記。對(duì)于CRP L3測(cè)試， 盒中使用兩種試劑：R1 (具有牛血清白蛋白和防腐劑的TRIS緩沖液）和R2 (用甘氨酸緩 沖液中的抗CRP(小鼠）、免疫球蛋白（小鼠）和防腐劑包被的膠乳顆粒）。來(lái)自CRP L3測(cè) 試的包裝插頁(yè)中描述的程序用作標(biāo)準(zhǔn)方法。
[0121] 移取方案：隨后將2 ii L樣品和150 ii L試劑R1添加至反應(yīng)室，隨后添加48耵試 劑R2,用24 yl稀釋液（水）稀釋，并混合反應(yīng)混合物。
[0122] 測(cè)量條件：對(duì)于測(cè)量，使用570nm作為主要波長(zhǎng)，且使用800nm作為校正波長(zhǎng)。測(cè) 定類型是兩點(diǎn)終點(diǎn)測(cè)定法。兩點(diǎn)終點(diǎn)測(cè)定法是執(zhí)行樣品空白的終點(diǎn)測(cè)定法。在這里考慮在 兩個(gè)不同測(cè)量點(diǎn)的兩個(gè)吸光度讀數(shù)：通常在添加最終試劑之前或之后不久采集第一讀數(shù)； 在添加最終試劑之后任何時(shí)間點(diǎn)采集第二讀數(shù)。用于校準(zhǔn)曲線和因此用于濃度計(jì)算的吸光 度值通過(guò)從第二讀數(shù)減去第一讀數(shù)而獲得。對(duì)于CRP L3,第一讀數(shù)是在測(cè)量點(diǎn)8,且意指添 加最終試劑之后不久，第二讀數(shù)在測(cè)量點(diǎn)18,其對(duì)應(yīng)于2. 0分鐘的反應(yīng)時(shí)間。為了生成校準(zhǔn) 曲線，一式兩份測(cè)量來(lái)自Roche (目錄號(hào)11355279)的6份標(biāo)準(zhǔn)品，使用樣條（spline)作 為校準(zhǔn)模式，其擬合通過(guò)三階多項(xiàng)式近似的測(cè)量校準(zhǔn)物的數(shù)據(jù)點(diǎn)之間的范圍，從而使得獲 得平滑校準(zhǔn)曲線。
[0123] 用于評(píng)價(jià)干擾的稈序: CRP L3測(cè)定用無(wú)干擾和溶血樣品運(yùn)行，其使用包裝插頁(yè)文獻(xiàn)中描述的標(biāo)準(zhǔn)方法（參 見下文，a)，和與標(biāo)準(zhǔn)方法相比使用其他波長(zhǎng)用于吸光度測(cè)量的新方法（參見下文，b)。在 cobas c311上一式三份測(cè)量樣品。最后，評(píng)價(jià)用兩種方法獲得的溶血干擾的幅度：對(duì)于所 有含有血紅蛋白的樣品計(jì)算測(cè)量的CRP濃度的回收率（中值），并與用無(wú)干擾樣品獲得的 CRP值進(jìn)行比較。當(dāng)初始CRP濃度值的回收率在+/- 10%內(nèi)時(shí)，樣品是無(wú)干擾的；落在該回 收率區(qū)域內(nèi)的結(jié)果是可報(bào)道（準(zhǔn)確）的結(jié)果。
[0124] 溶血血清樣品：通過(guò)將不同的血紅蛋白量添加至?154和?1397 mg/dL之間的濃度 且用人CRP摻入至5 mg/L而生成。
[0125] 無(wú)干擾血清樣品：通過(guò)用人CRP摻入至5 mg/L而生成。
[0126] a)標(biāo)準(zhǔn)方法： ?主要波長(zhǎng)：570 nm ?次要波長(zhǎng)（用于校正目的）：800 nm ?完整反應(yīng)時(shí)間/反應(yīng)時(shí)間：10 min / 2. 0 min ? 6點(diǎn)校準(zhǔn) 籲校準(zhǔn)模式：樣條（spline) 籲測(cè)定類型：終點(diǎn)（2點(diǎn)終點(diǎn)） b)新方法： ?主要波長(zhǎng)：600 nm ?次要波長(zhǎng)（用于校正目的）：800 nm ?測(cè)定時(shí)間/反應(yīng)時(shí)間：10 min / 2. 0 min ? 6點(diǎn)校準(zhǔn) 籲校準(zhǔn)模式：樣條（spline) 籲測(cè)定類型：終點(diǎn)（2點(diǎn)終點(diǎn)）。
[0127] 結(jié)果: 如表1中所不，當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)方法時(shí)，在最1?達(dá)612的H指標(biāo)（612 mg/dl的血紅蛋白濃 度）沒有發(fā)現(xiàn)溶血的干擾。對(duì)于較高的H指標(biāo)，回收率在+/- 10%窗口之外。
[0128] 如表2中所示，當(dāng)使用新方法時(shí)，在最高達(dá)至少1397的H指標(biāo)C1397 mg/dl的血 紅蛋白濃度）沒有發(fā)現(xiàn)溶血的干擾。
[0129] 該結(jié)果顯示當(dāng)使用新方法時(shí)關(guān)于測(cè)定耐受的溶血程度改進(jìn)約2. 3倍。換言之，通 過(guò)應(yīng)用新方法，溶血干擾降低2. 3倍。對(duì)于新方法的實(shí)施，不需要試劑配制的任何變化；只 有分析儀的軟件必須適用于方法的完全自動(dòng)化處理。
[0130] CRPL3測(cè)定的新方法的應(yīng)用由于波長(zhǎng)和反應(yīng)時(shí)間的變化導(dǎo)致測(cè)定表現(xiàn)的一些變 化：盡管檢測(cè)上限（UDL)保持類似于標(biāo)準(zhǔn)方法，但檢測(cè)下限（LDL )稍微受損（0. 06 mg/L至 0. 09 mg/L)。
[0131] 對(duì)于該測(cè)定，根據(jù)本發(fā)明的分析儀上的可能工作流程將是（也參見圖2): -對(duì)于CRP生成校準(zhǔn)曲線 -在標(biāo)準(zhǔn)條件下記錄的校準(zhǔn)曲線（標(biāo)準(zhǔn)方法a) -在新條件下記錄的校準(zhǔn)曲線（新方法b) _在以下測(cè)定中同時(shí)測(cè)量樣品 -血清指標(biāo)測(cè)定和 -至少在以下波長(zhǎng)的CRPL3測(cè)定：570nm、600nm、800nm -基于血清指標(biāo)測(cè)定中獲得的H指標(biāo)值和其與截止值的比較（H= 612，H= 1397)，由 分析儀選擇相應(yīng)的校準(zhǔn)曲線用于定量樣品中的CRP : -612:在標(biāo)準(zhǔn)條件下記錄的校準(zhǔn)曲線（標(biāo)準(zhǔn)方法a) -H> 612，1397:在新條件下記錄的校準(zhǔn)曲線（新方法b) -H> 1397:拋棄樣品 -通過(guò)光信號(hào)與所選校準(zhǔn)曲線的比較測(cè)定樣品中的CRP量。 衣I:標(biāo)複.//法的數(shù)慰
【權(quán)利要求】
1. 用于通過(guò)光度測(cè)定法測(cè)定可以顯示干擾的樣品的特定分析物的量的方法，其中所述 特定分析物從所述分析物與分析物特異性測(cè)定試劑相互作用后反應(yīng)混合物的光信號(hào)中的 變化來(lái)定量，所述方法包括以下步驟： a) 對(duì)于待測(cè)定樣品的特定分析物，對(duì)于多個(gè)波長(zhǎng)生成多條校準(zhǔn)曲線，且將測(cè)量結(jié)果儲(chǔ) 存在儀器平臺(tái)的數(shù)據(jù)管理系統(tǒng)中， b) 同時(shí)進(jìn)行干擾測(cè)試以測(cè)定特定分析物，用于定量待測(cè)定樣品中存在的干擾物質(zhì)的 量，且將每種干擾物質(zhì)的量與預(yù)定截止值進(jìn)行比較， c) 在多個(gè)波長(zhǎng)測(cè)量所述反應(yīng)混合物中待測(cè)定樣品的特定分析物的光信號(hào)， d) 根據(jù)所述干擾物質(zhì)選擇步驟a的相應(yīng)校準(zhǔn)曲線，和 e) 通過(guò)與所選波長(zhǎng)的所選校準(zhǔn)曲線的比較來(lái)定量待測(cè)定樣品的特定分析物的量。
2. 根據(jù)前述權(quán)利要求的方法，其中將包含反應(yīng)時(shí)間、校準(zhǔn)點(diǎn)、校準(zhǔn)模式和測(cè)定類型的特 定測(cè)量條件額外應(yīng)用于測(cè)量方案。
3. 根據(jù)前述權(quán)利要求的方法，其中顯示干擾的樣品可以在相應(yīng)的儀器平臺(tái)上使用可 商購(gòu)的分光光度實(shí)驗(yàn)室測(cè)試來(lái)定量，而無(wú)需應(yīng)用預(yù)分析樣品處理和/或改變測(cè)定制劑和程 序。
4. 根據(jù)前述權(quán)利要求之一的方法，其中在波長(zhǎng)1記錄的校準(zhǔn)曲線1用于未顯示干擾的 樣品。
5. 根據(jù)前述權(quán)利要求之一的方法，其中使用在波長(zhǎng)2記錄的校準(zhǔn)曲線2,其經(jīng)優(yōu)化用于 顯示溶血干擾的樣品。
6. 根據(jù)前述權(quán)利要求之一的方法，其中使用在波長(zhǎng)3記錄的校準(zhǔn)曲線3,其經(jīng)優(yōu)化用于 顯示黃疸干擾的樣品。
7. 根據(jù)前述權(quán)利要求之一的方法，其中使用在波長(zhǎng)4記錄的校準(zhǔn)曲線4,其經(jīng)優(yōu)化用于 顯示脂血干擾的樣品。
8. 根據(jù)前述權(quán)利要求之一的方法，其中使用在波長(zhǎng)5記錄的校準(zhǔn)曲線5,其經(jīng)優(yōu)化用于 顯示溶血和黃疸或脂血干擾的樣品。
9. 根據(jù)前述權(quán)利要求之一的方法，其中使用在波長(zhǎng)6記錄的校準(zhǔn)曲線6,其經(jīng)優(yōu)化用于 在低分析物濃度顯示溶血干擾的樣品。
10. 根據(jù)前述權(quán)利要求之一的方法，其中使用在波長(zhǎng)7記錄的校準(zhǔn)曲線7,其經(jīng)優(yōu)化用 于在高分析物濃度顯示溶血干擾的樣品。
11. 根據(jù)前述權(quán)利要求之一的方法，其中可以在測(cè)量范圍定義多于2條校準(zhǔn)曲線，各自 經(jīng)優(yōu)化以降低某一濃度范圍的樣品的干擾。
12. 用于降低顯示溶血和/或黃疸和/或脂血和/或其他干擾的樣品的基于分光光度 的實(shí)驗(yàn)室測(cè)試的干擾的方法，其中將包含測(cè)量波長(zhǎng)、反應(yīng)時(shí)間、校準(zhǔn)點(diǎn)、校準(zhǔn)模式的特定測(cè) 量條件額外應(yīng)用于測(cè)量方案，而無(wú)需應(yīng)用預(yù)分析樣品處理和/或改變測(cè)定方法。
13. 額外應(yīng)用于測(cè)量方案的特定測(cè)量條件用于降低測(cè)定可以顯示溶血和/或黃疸和/ 或脂血干擾的樣品中特定分析物的量的基于分光光度的實(shí)驗(yàn)室測(cè)試的干擾的用途，所述特 定測(cè)量條件包含測(cè)量波長(zhǎng)、反應(yīng)時(shí)間、校準(zhǔn)點(diǎn)、和校準(zhǔn)模式。
14. 儀器平臺(tái)，其使用用于測(cè)定可以顯示溶血和/或黃疸和/或脂血干擾的樣品中特定 分析物的量的可商購(gòu)的分光光度實(shí)驗(yàn)室測(cè)試，其中所述儀器平臺(tái)的數(shù)據(jù)管理系統(tǒng)能夠處理 反應(yīng)時(shí)間、校準(zhǔn)點(diǎn)、校準(zhǔn)模式、波長(zhǎng)、血清指標(biāo)的數(shù)據(jù)，用于選擇最佳擬合校準(zhǔn)曲線。
15.根據(jù)前述權(quán)利要求的方法，其中進(jìn)行包含測(cè)量波長(zhǎng)、反應(yīng)時(shí)間、校準(zhǔn)模式、校準(zhǔn)點(diǎn)數(shù) 量的測(cè)量結(jié)果的額外校正，且針對(duì)彼此進(jìn)行抵消。
【文檔編號(hào)】G01N21/27GK104395729SQ201380033722
【公開日】2015年3月4日 申請(qǐng)日期:2013年4月25日 優(yōu)先權(quán)日:2012年4月26日
【發(fā)明者】G.庫(kù)爾茨, E.洛佩斯-卡勒 申請(qǐng)人:霍夫曼-拉羅奇有限公司
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