專利名稱：呋喃妥因代謝物檢測試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及呋喃妥因代謝物檢測試劑盒。
背景技術(shù)：
硝基呋喃類藥物是人工合成的廣譜抗生素,它有非常好的抗菌作 用和藥動力學(xué)的特性，曾經(jīng)被廣泛應(yīng)用作為家畜、家禽、人工養(yǎng)殖水 產(chǎn)品的促生長添加劑。但通過長期的實驗室研究發(fā)現(xiàn),硝基呋喃類藥 物和代謝物均可以使實驗動物發(fā)生癌變和基因突變,并由此推斷，人 類長期使用該類藥物或長期食用添加該類促生長劑的家畜、家禽、人 工養(yǎng)殖水產(chǎn)品，同樣也可發(fā)生癌變和基因突變。所以此類藥物禁止在 治療和飼料中使用。
我國于2002年頒布了禁止使用硝基呋喃類抗生素的禁令，在農(nóng) 業(yè)部發(fā)布的193號公告的《食品動物禁用獸藥及其他化合物清單》中，
硝基呋喃類抗生素在所有食品動物和所有用途中都被禁止使用。
歐盟委員會于2003年通過了 2003/181/EC委員會決議，建立了用
于檢測禽肉產(chǎn)品和水產(chǎn)品中硝基呋喃類藥物的代謝物的各種方法的 最小要求性能限值(Minimum Required Performance Limits, MRPL) 為lug/kg，歐盟從第三國進口的動物性產(chǎn)品中硝基呋喃類藥物的代謝物的含量不得超過1 U g/kg。 2004年美國FDA公布了禁止在進口動 物源性食品中使用的ll種藥物名單，其中包括呋喃妥因。因此，為確 保動物源性食品的安全和對外出口貿(mào)易的發(fā)展，建立準確可靠，靈敏 度高的定性定量方法是十分必要的。
由于呋喃妥因在體內(nèi)很快就能被代謝，而在組織中結(jié)合的代謝產(chǎn) 物(AHD)則能存留較長的一段時間，所以在分析此類藥物的殘留時經(jīng) 常要分析其代謝后的產(chǎn)物，檢測監(jiān)管部門就以檢測代謝產(chǎn)物為手段達 到檢測呋喃妥因殘留的目的。
國內(nèi)外現(xiàn)已開發(fā)出檢測呋喃妥因的酶聯(lián)免疫試劑盒，但是現(xiàn)在國 內(nèi)大部分需求是從國外進口的，國內(nèi)生產(chǎn)的試劑盒在準確性、靈敏度、 特異性等方面還不能優(yōu)于進口試劑盒。
發(fā)明內(nèi)容
為了克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述缺陷。
本發(fā)明提供一種檢測呋喃妥因代謝物(AHD)的酶聯(lián)免疫試劑 盒，包括有包被呋喃妥因代謝物衍生物抗原的酶聯(lián)板與酶標記呋喃 妥因代謝物衍生物特異性抗體或包被呋喃妥因代謝物衍生物特異性 抗體的酶聯(lián)板與酶標記呋喃妥因代謝物衍生物抗原；所述呋喃妥因代 謝物衍生物抗原是采用活性酯法將呋喃妥因代謝物衍生物半抗原與 載體蛋白進行偶聯(lián)得到的。
上述載體蛋白為牛血清白蛋白、雞卵清蛋白、兔血清蛋白、人血 清白蛋白、人血纖維蛋白或血藍蛋白。
權(quán)利要求
1.一種呋喃妥因代謝物檢測試劑盒，包括有包被呋喃妥因代謝物衍生物抗原的酶聯(lián)板與酶標記呋喃妥因代謝物衍生物特異性抗體或包被呋喃妥因代謝物衍生物特異性抗體的酶聯(lián)板與酶標記呋喃妥因代謝物衍生物抗原；所述呋喃妥因代謝物衍生物抗原是采用活性酯法將呋喃妥因代謝物衍生物半抗原與載體蛋白進行偶聯(lián)得到的。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的呋喃妥因代謝物檢測試劑盒，其特征 在于，所述載體蛋白為牛血清白蛋白、雞卵清蛋白、兔血清蛋白、人 血清白蛋白、人血纖維蛋白或血藍蛋白。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的呋喃妥因代謝物檢測試劑盒，其特征 在于，所述酶聯(lián)板是以聚苯乙烯、纖維素、聚丙烯酰胺、聚乙烯、聚 丙烯、交聯(lián)葡聚糖、玻璃、硅橡膠或瓊脂糖凝膠為載體，用pH值9. 6、 0.05mol/L、含有0.59iv/v甲醇的碳酸鹽緩沖液作為包被緩沖液，含 有8%-15%w/v的脫脂奶和l%w/v惰性蛋白的溶液作為封閉液制備而成 的。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的呋喃妥因代謝物檢測試劑盒，其特征 在于，所述酶聯(lián)板的制備方法如下(l)用包被緩沖液將呋喃妥因代謝物衍生物半抗原與載體蛋白偶 聯(lián)物或抗抗體以0. 02-0. 084g/ml濃度稀釋成抗原稀釋液或抗體稀釋 液；(2)向酶聯(lián)板的每孔中加入已經(jīng)稀釋好的抗原稀釋液或抗 抗體稀釋液，37'C溫育2h，傾去包被液，用洗滌液洗滌4次，每次 15-30s，拍干；(3)向酶聯(lián)板的每孔中加入150-200W封閉液，37'C溫育l-2h， 傾去孔內(nèi)液體，干燥后用鋁膜真空密封保存。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的呋喃妥因代謝物檢測試劑盒，其特征 在于，所述酶為過氧化物酶或半乳糖甘酶。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的呋喃妥因代謝物檢測試劑盒，其特征 在于，所述酶標記呋喃妥因代謝物衍生物特異性抗體是采用戊二醛法 進行偶聯(lián)制得。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的呋喃妥因代謝物檢測試劑盒，其特征 在于，所述酶標記抗原是采用戊二酸法將標記酶與呋喃妥因代謝物半 抗原進行偶聯(lián)得到。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的呋喃妥因代謝物檢測試劑盒，其特征 在于，所述呋喃妥因代謝物衍生物特異性抗體為鼠源單克隆抗體或兔 源多克隆抗體。
9.據(jù)權(quán)利要求1所述的呋喃妥因代謝物檢測試劑盒，其特征在 于，所述試劑盒還包含呋喃妥因代謝物衍生物標準品溶液、底物顯色 液、終止液、濃縮洗滌液和濃縮復(fù)溶液。
10.據(jù)權(quán)利要求9所述的呋喃唑酮代謝物檢測試劑盒，其特征在 于，所述底物顯色液為單底物液。
全文摘要
本發(fā)明涉及呋喃妥因代謝物檢測試劑盒。本發(fā)明提供一種檢測呋喃妥因代謝物的酶聯(lián)免疫試劑盒，包括有包被呋喃妥因代謝物衍生物抗原的酶聯(lián)板與酶標記呋喃妥因代謝物衍生物特異性抗體或包被呋喃妥因代謝物衍生物特異性抗體的酶聯(lián)板與酶標記呋喃妥因代謝物衍生物抗原；所述呋喃妥因代謝物衍生物抗原是采用活性酯法將呋喃妥因代謝物衍生物半抗原與載體蛋白進行偶聯(lián)得到的。本發(fā)明提供的試劑盒內(nèi)生產(chǎn)的試劑盒使用方便，而且在準確性、靈敏度、特異性等方面均性能良好。
文檔編號G01N33/577GK101526529SQ20091004516
公開日2009年9月9日 申請日期2009年1月12日 優(yōu)先權(quán)日2009年1月12日
發(fā)明者青 吳, 俊 唐, 成 李, 宏 楊, 楊宗繁, 溫俊梅, 聶繼斌, 欣 齊 申請人:深圳市綠詩源生物技術(shù)有限公司
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