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抗Lp(a)單克隆抗體及Lp(a)膠乳增強(qiáng)免疫比濁檢測(cè)試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了抗Lp(a)單克隆抗體及Lp(a)膠乳增強(qiáng)免疫比濁檢測(cè)試劑盒。本發(fā)明提供了一株微生物保藏號(hào)是：CGMCC?No.8509的穩(wěn)定分泌抗Lp(a)單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。本發(fā)明雜交瘤細(xì)胞株能夠穩(wěn)定地生產(chǎn)抗Lp(a)單克隆抗體，可以實(shí)現(xiàn)自身配對(duì)、特異性結(jié)合Lp(a)且與Kringle?IV-2無結(jié)合。LPa-3單抗所配Lp(a)試劑盒檢測(cè)病人血清樣本的試驗(yàn)表明，用本發(fā)明抗Lp(a)單克隆抗體制備的膠乳增強(qiáng)免疫比濁檢測(cè)試劑盒與市售試劑盒測(cè)值符合度高，準(zhǔn)確度可靠，可以應(yīng)用于Lp(a)的檢測(cè)。
【專利說明】抗Lp (a)單克隆抗體及Lp (a)膠乳增強(qiáng)免疫比濁檢測(cè)試劑
合
Si
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及雜交瘤細(xì)胞株以及分泌的單克隆抗體，尤其涉及一種抗脂蛋白(a)[Lipoprtein (a)，Lp (a)]的單克隆抗體以及分泌該單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株,本發(fā)明進(jìn)一步Lp (a)膠乳增強(qiáng)免疫比濁檢測(cè)試劑盒，屬于脂蛋白(a)的檢測(cè)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]脂蛋白(a) [Lipoprotein (a) ,Lp (a)]是人體內(nèi)一種獨(dú)特的脂蛋白，由低密度脂蛋白(LDL)樣微粒和載脂蛋白(a) [apolipoprotein(a)，apo(a)]組成。Apo (a)與纖溶酶原的基因高度同源，屬于人類纖溶酶原基因超家族成員。Apo (a)由多拷貝的纖溶酶原KringleIV樣的重復(fù)片斷和單拷貝的Kringle V和絲氨酸蛋白酶區(qū)域構(gòu)成。Apo (a)有10種纖溶酶原Kringle IV樣的基序(命名為Kringle IV-1 ~Kringle IV-10),除了 Kringle IV-2外,每種Kringle IV都是單拷貝。Apo (a)多態(tài)性受基因控制，不同apo (a)亞型Kringle IV-2的拷貝數(shù)為3-40不等。關(guān)于Lp(a)的最大的流行病學(xué)研究已證明Lp (a)水平與心臟疾病和缺血性腦卒中存在連續(xù)的獨(dú)立的中等程度的相關(guān)，高Lp (a)作為心腦血管動(dòng)脈粥樣硬化性疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素已得到公認(rèn)。
[0003]Lp (a)濃度檢測(cè)常用的方法有雙抗體夾心ELISA法、免疫比濁法與膠乳增強(qiáng)免疫比濁法。這三種方法均需 要用到Lp (a)抗體，其中后兩種方法在臨床檢驗(yàn)上應(yīng)用更多，特別是膠乳增強(qiáng)免疫比濁法。由于Lp(a)分子量大，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，目前還無法通過人工表達(dá)手段制備Lp(a)抗原。多克隆抗體(多抗)制備用Lp(a)抗原只能從血清中純化制備，由于Lp (a)在不同人之間具有多態(tài)性，受血清來源的限制，Lp (a)抗原的批間差較難控制，最終導(dǎo)致Lp (a)多抗的批間差較大。另外，由于apo (a)分子Kringle IV-2拷貝數(shù)的差異，用針對(duì)該位點(diǎn)的單抗或多抗作為原料制備的試劑盒會(huì)受到抗原多態(tài)性的影響，造成檢測(cè)結(jié)果的不準(zhǔn)確。
[0004]多克隆抗體(多抗)制備用Lp (a)抗原只能從血清中純化制備，由于Lp (a)在不同人之間具有多態(tài)性，受血清來源的限制，Lp (a)抗原的批間差較難控制，最終導(dǎo)致Lp (a)多抗的批間差較大。單克隆抗體(單抗)雖然不依賴Lp (a)抗原，但現(xiàn)有單抗要么識(shí)別多態(tài)性位點(diǎn)，要么需要與其他單抗進(jìn)行配對(duì)使用。以膠乳增強(qiáng)免疫比濁試劑為例:試劑配制中，抗體種類的增加會(huì)相應(yīng)的偶聯(lián)工序與濃度調(diào)整工序，工作量成倍增長(zhǎng)，試劑盒性能差異變大的風(fēng)險(xiǎn)也會(huì)由此產(chǎn)生。
[0005]開發(fā)識(shí)別apo (a)分子Kringle IV_2以外抗原表位的單克隆抗體,可以很好解決抗體批間差大與apo (a)多態(tài)性影響的問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的之一是提供一株能生產(chǎn)自身配對(duì)，特異性結(jié)合Lp (a)，且能穩(wěn)定分泌抗體的雜交瘤細(xì)胞株；[0007]本發(fā)明的目的之二是提供由所述雜交瘤細(xì)胞株分泌的單克隆抗體；
[0008]本發(fā)明的進(jìn)一步目的是將該單克隆抗體應(yīng)用于檢測(cè)Lp(a)并提供一種Lp(a)膠乳增強(qiáng)免疫比濁檢測(cè)試劑盒。
[0009]本發(fā)明的上述目的是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的:
[0010]本發(fā)明人用Lp(a)分子中的多態(tài)性片段Kringle IV_2為篩選抗原，采用間接ELISA法進(jìn)行Lp(a)特異性單克隆抗體篩選，用棋盤法進(jìn)行單抗的配對(duì)篩選，最終獲得了 I株能夠產(chǎn)生自身配對(duì)、特異性結(jié)合Lp (a)、且與Kringle IV-2無結(jié)合的單抗目標(biāo)細(xì)胞株,從而完成了本發(fā)明。
[0011]本發(fā)明首先提供一株產(chǎn)生能自身配對(duì)、特異性結(jié)合Lp (a)且與Kringle IV_2無結(jié)合的抗Lp (a)單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。
[0012]本發(fā)明將所篩選得到的雜交瘤細(xì)胞株將其保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)=CGMCC N0.8509 ;分類命名為:脂蛋白(a)單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株；保藏日期:2013年11月20日；保藏單位:中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏地址:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所。
[0013]本發(fā)明還提供了一種制備所述的雜交瘤細(xì)胞株的方法，包括:用Lp(a)分子中的多態(tài)性片段Kringle IV-2為篩選抗原，采用間接ELISA法和雙抗夾心ELISA法進(jìn)行Lp (a)特異性單克隆抗體篩選的工序， 篩選得到所述雜交瘤細(xì)胞株。
[0014]本發(fā)明中的雜交瘤細(xì)胞株與抗Lp (a)單克隆抗體可以通過下文所述的方法產(chǎn)生。進(jìn)一步，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以使用這些根據(jù)下文描述及本領(lǐng)域中已知技術(shù)改造過的更適合的方法。
[0015](I)免疫原的制備
[0016]本發(fā)明采用天然提取純化的Lp (a)分子為免疫原?？梢允荓p (a)校準(zhǔn)品抗原經(jīng)過分子篩，如GE公司S-200填料分離純化得到，也可以是商品化的高純度Lp (a)天然抗原，還可以從Lp (a)含量較高的血清中按文獻(xiàn)方法進(jìn)行制備。
[0017](2)檢測(cè)抗原的制備
[0018]檢測(cè)抗原包括Lp (a)天然抗原、APOB抗原和Lp (a)Kringle IV-2原核表達(dá)抗原。Lp (a)天然抗原、APOB抗原可以通過購(gòu)買或其他方式獲得。Lp(a)Kringle IV-2通過原核表達(dá)純化獲得，具體的為:從NCBI網(wǎng)站上獲得Kringle IV-2的氨基酸序列(SEQ ID N0.2),用Vector NTI軟件反譯成大腸桿菌偏愛的密碼子基因序列(SEQ ID N0.1)，送外包公司進(jìn)行全基因合成，插入表達(dá)載體中，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)，進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)與蛋白純化。
[0019](3)單克隆抗體的制備
[0020]Lp (a)分子量大，容易誘導(dǎo)產(chǎn)生抗體，本發(fā)明采用Lp(a)天然抗原免疫小鼠，進(jìn)行3-5次免疫。在最后一次免疫接種2-5天(優(yōu)選3天)后收集脾細(xì)胞，將這些組織中產(chǎn)生抗體的細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合后選擇與Lp (a)具有特異性結(jié)合的雜交瘤，從而制備產(chǎn)單克隆抗體的細(xì)胞。
[0021]融合可以按照公知的方法進(jìn)行，例如可以舉出如下方法:將脾細(xì)胞與瘤細(xì)胞按5-10:1的比例混合，離心去上清后，向沉淀物中加入融合促進(jìn)試劑，然后用DMEM培養(yǎng)基終止融合促進(jìn)試劑的作用。離心棄上清后細(xì)胞用合適體積的HAT培養(yǎng)基重懸，制成融合細(xì)胞，融合細(xì)胞在培養(yǎng)雜交瘤的孔格中進(jìn)行培養(yǎng)。對(duì)于骨髓瘤細(xì)胞可以使用公知的骨髓瘤細(xì)胞，例如可以舉出 SP2/0-Agl4(SP2/0)、P3/X63_Ag8 (X63)、P3/X63_Ag8.653 (X63_Ag8.653)、P3/NS1-l-Ag4-l (NS-1)等小鼠來源的細(xì)胞系，其中優(yōu)選為SP2/0。融合促進(jìn)試劑可以為聚乙二
Si1450 (PEG1450)、聚乙二醇側(cè)(peg4_)等，優(yōu)選為 peg145。。
[0022]單克隆抗體的選擇可以根據(jù)已知的方法進(jìn)行。一般地是在添加有HAT的用于動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)基中進(jìn)行的。用于選擇與培養(yǎng)的培養(yǎng)基例如可以舉出:體積比為5%-20%胎牛血清的DMEM或RPM1-1640培養(yǎng)基。細(xì)胞一般在5-10%C02氣體的環(huán)境中于36.5 0C -37.5°C，培養(yǎng) 10-14 天。
[0023]從培養(yǎng)雜交瘤的孔格中收集培養(yǎng)物的上清液，分泌目的抗體的培養(yǎng)孔可通過間接ELISA方法來選擇。首先，Lp (a)天然抗原反應(yīng)、APOB抗原和Kringle IV-2等3種抗原被固定在96孔酶標(biāo)板中，并用吐溫-20磷酸鹽緩沖液(PBST)洗滌酶標(biāo)板，然后將培養(yǎng)上清樣品加入到不同抗原包被孔中，37°C溫育30分鐘后，加入1:10000稀釋的作為酶標(biāo)二抗的羊抗鼠-HRP，37°C溫育30分鐘后加入過氧化氫脲-四甲基聯(lián)苯胺底物(H2O2-TMB)作為底物進(jìn)行顯色，用酸終止反應(yīng)后，測(cè)量450nm下的吸光值。
[0024]選取與Lp (a)天然抗原反應(yīng)，而與APOB抗原和Kringle IV-2無反應(yīng)的培養(yǎng)孔，通過公知的有限稀釋法進(jìn)行克隆。通過培養(yǎng)該雜交瘤細(xì)胞株可以大量的獲得抗Lp (a)單克隆抗體。該抗Lp(a)單克隆抗體的獲取方法，大地可以劃分為兩種。一種是使用培養(yǎng)基，在燒瓶等培養(yǎng)容器中進(jìn)行培養(yǎng)，從該上清液中獲取抗體的方法。例如為體積比是10%-20%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液。另一種方法是將用培養(yǎng)容器培養(yǎng)的雜交瘤細(xì)胞株通過同系小鼠體內(nèi)誘生法接種到同系的動(dòng)物中，來獲得抗Lp(a)的單克隆抗體。
[0025]本發(fā)明的采用間接ELISA法進(jìn)行Lp (a)特異性單克隆抗體的篩選的工序中，
[0026]包括將抗原抗原固定在96孔酶標(biāo)板中，并用吐溫-20磷酸鹽緩沖液(PBST)洗滌酶標(biāo)板的包被酶標(biāo)板；將培養(yǎng)上清樣品加入到不同抗原包被孔中，37°C溫育30分鐘后，用PBST洗滌酶標(biāo)板的添加培養(yǎng)上清樣品的工序；加入1:10000稀釋的作為酶標(biāo)二抗的羊抗鼠-HRP，37°C溫育30分鐘后用PBST洗滌酶標(biāo)板的添加酶標(biāo)二抗的工序；以及進(jìn)行顯色的工序。
[0027]本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種由該雜交瘤細(xì)胞株所產(chǎn)生的抗Lp (a)單克隆抗體。本發(fā)明的雜交瘤細(xì)胞株能夠穩(wěn)定地生產(chǎn)抗Lp (a)單克隆抗體，而由該雜交瘤細(xì)胞株產(chǎn)生的抗Lp (a)單克隆抗體可以實(shí)現(xiàn)自身配對(duì)、特異性結(jié)合Lp (a),且與Kringle IV-2無結(jié)合。由于該抗Lp(a)單克隆抗體能夠很好地滿足Lp (a)檢測(cè)的要求，因此可以應(yīng)用于Lp (a)檢測(cè)試劑盒中。
[0028]因此，本發(fā)明提供了一種Lp (a)膠乳增強(qiáng)免疫比濁檢測(cè)試劑盒，由彼此獨(dú)立的試劑I (Rl)與試劑2 (R2)組成；其中，Rl試劑I的成分包括緩沖液，防腐劑等；試劑2的成分包括緩沖液、牛血清白蛋白(BSA)或小牛血清(NCS)、偶聯(lián)有抗Lp (a)單克隆抗體的膠乳微球等。
[0029]具體的，試劑I的成分可以是:1) 10-50mM, pH7.4磷酸鹽緩沖液(PBS)，0.02%-0.1% 疊氮鈉(NaN3)；或 2) 50-200mM, ρΗ7.4Tris_HCl 緩沖液，0.02%_0.l%NaN3 ；或3) 50-200mM, ρΗ7.4M0PS 緩沖液，0.02%_0.l%NaN3。優(yōu)選為:20mM, ρΗ7.4 磷酸鹽緩沖液，
0.l%NaN30
[0030]試劑2的成分可以是，l)10-50mM，pH7.4磷酸鹽緩沖液，(λ 1-0.5%BSA或5_15%NCS，0.125%-0.25%偶聯(lián)有抗體的膠乳微球(抗體偶聯(lián)比:0.5-2mg/10mg膠乳微球；膠乳微球粒徑:80-200nm)；或 2) 50-200mM, pH7.4Tris-HCl 緩沖液，0.1-0.5%BSA 或 5_15%NCS，0.125%-0.25%偶聯(lián)有抗體的膠乳微球(抗體偶聯(lián)比:0.5-2mg/10mg膠乳微球；膠乳微球粒徑:80-200nm);或 3)50-200mM, ρΗ7.4M0PS 緩沖液，0.1-0.5%BSA 或 5_15%NCS，0.125%_0.25%偶聯(lián)有抗體的膠乳微球(抗體偶聯(lián)比:0.5-2mg/10mg膠乳微球；膠乳微球粒徑:80_200nm)；優(yōu)選為:20mM，pH7.4磷酸鹽緩沖液，0.1%BSA，0.2%偶聯(lián)有抗體的膠乳微球(抗體偶聯(lián)比:lmg/10mg膠乳微球；膠乳微球粒徑:124nm)。
[0031]本發(fā)明的雜交瘤細(xì)胞株能夠穩(wěn)定地生產(chǎn)抗Lp (a)單克隆抗體，而由該雜交瘤細(xì)胞株產(chǎn)生的抗Lp (a)單克隆抗體可以實(shí)現(xiàn)自身配對(duì)、特異性結(jié)合Lp (a),且與Kringle IV-2無結(jié)合。LPa-3單抗所配Lp (a)試劑盒檢測(cè)病人血清樣本的試驗(yàn)表明，由本發(fā)明的抗Lp (a)單抗配制的檢測(cè)試劑盒與德賽公司Lp (a)試劑盒測(cè)值符合度高，準(zhǔn)確度可靠，可以應(yīng)用于Lp (a)試劑盒中。
[0032]本發(fā)明所涉及的術(shù)語定義
[0033]本發(fā)明所說的“Lp (a) ”除非特別說明，是指人血清或血漿中脂蛋白(a)及其相關(guān)產(chǎn)物，如的脂蛋白(a)前體、成熟形式或片段。
[0034]本發(fā)明所說的“特異性結(jié)合”是指抗Lp (a)單抗僅與Lp (a)結(jié)合，而不與載脂蛋白B (APOB)結(jié)合。
[0035]本發(fā)明所說的“抗體”是指能夠與完整的全長(zhǎng)度的Lp (a)分子或Lp (a)片段特異性結(jié)合的單抗，或者這些抗體的部分片段。
[0036]本發(fā)明所說的自身 配對(duì)是指一種單抗能以兩個(gè)或以上的形式結(jié)合到同一個(gè)抗原分子上的現(xiàn)象，產(chǎn)生這種現(xiàn)象的原因是抗原分子上存在兩個(gè)或以上相同或相似的抗原表位。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0037]圖1為由LPa-3雜交瘤細(xì)胞株所產(chǎn)生的單抗應(yīng)用于試劑盒中的相關(guān)性分析圖。具體實(shí)施例
[0038]下面結(jié)合具體實(shí)施方案來進(jìn)一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)將會(huì)隨著描述而更為清楚。但這些實(shí)施例僅是范例性的，并不對(duì)本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
[0039]實(shí)施例1雜交瘤細(xì)胞株的構(gòu)建
[0040]用Lp (a)抗原免疫4只6周齡雌性Balb/c小鼠，首次免疫采用弗氏完全佐劑將抗原進(jìn)行乳化，每只小鼠注射40ug抗原，然后采用弗氏不完全佐劑乳化抗原，以21天為間隔進(jìn)行第2-3次免疫。完成3次免疫后眼眶采血檢測(cè)血清抗體效價(jià)，選取效價(jià)較高的小鼠進(jìn)行細(xì)胞融合。融合前3天用不加佐劑的Lp (a)抗原對(duì)選定的小鼠進(jìn)行沖擊免疫，3天后將小鼠斷頸椎處死，無菌分離脾臟，制備脾細(xì)胞懸液，將脾細(xì)胞與體外培養(yǎng)的SP2/0細(xì)胞按10:1比例混勻，離心洗滌后用PEG1450進(jìn)行細(xì)胞融合，融合細(xì)胞培養(yǎng)8天，采用間接ELISA法對(duì)融合細(xì)胞培養(yǎng)上清進(jìn)行篩選，檢測(cè)抗原為L(zhǎng)p (a)、APOB和Kringle IV-2。用0.05MpH9.6Na2C03-NaHC03 緩沖液將 Lp (a)、APOB 和 Kringle IV-2 稀釋至 lug/ml，三種抗原按列交叉包被，每孔IOOul加到酶標(biāo)板中，4°C放置過夜，用0.15M pH7.4含0.05%吐溫-20磷酸鹽緩沖液(PBST)洗滌酶標(biāo)板I次,完成抗原包被；將培養(yǎng)上清加到酶標(biāo)板中，每個(gè)培養(yǎng)孔取樣3次，分別加到Lp (a)、APOB和KringleIV-2包被孔中，每孔60ul，37°C溫育30min，用PBST洗板2次；將HRP-羊抗小鼠IgG稀釋至工作濃度，每孔IOOul加到酶標(biāo)板中，37°C溫育30min，用PBST洗板3次；加入TMB-H202底物，37°C避光顯色I(xiàn)Omin ;每孔加入50ul2MH2S04終止顯色，在酶標(biāo)儀上讀取450nm的吸光值。選取與Lp (a)呈強(qiáng)陽性反應(yīng)，但與APOB和Kringle IV-2呈陰性反應(yīng)的培養(yǎng)孔克隆化，并建立雜交瘤細(xì)胞株。
[0041 ] 實(shí)施例2抗Lp (a)單抗的配對(duì)篩選 [0042]將克隆建株的Lp (a)單抗雜交瘤細(xì)胞用腹水法制備出Lp (a)單抗腹水,用ProteinG柱純化出Lp(a)單抗，過碘酸鈉法對(duì)Lp (a)單抗進(jìn)行HRP標(biāo)記，然后用棋盤法對(duì)各株Lp (a)單抗的配對(duì)特性進(jìn)行分析。將各株Lp (a)單抗用0.05M pH9.6Na2C03-NaHC03緩沖液稀釋至5ug/ml,每孔IOOul包被酶標(biāo)板,每種單抗包被I列孔條；用PBST將Lp (a)抗原稀釋成
0.lug/ml，每孔IOOul，37°C溫育30min，用PBST洗板2次；用PBST將各株單抗的HRP標(biāo)記物稀釋至工作濃度，每種單抗標(biāo)記物加入I排板孔，每孔IOOul，37°C溫育30min，用PBST洗板3次；加入TMB-H202底物，37°C避光顯色lOmin，每孔加入50ul2M H2S04終止顯色，在酶標(biāo)儀上讀取0D450值。陽性反應(yīng)孔對(duì)應(yīng)的包被單抗與HRP標(biāo)記單抗即為配對(duì)的單抗。選取配對(duì)效果較好的單抗作夾心ELISA法的初步應(yīng)用。單抗配對(duì)篩選的數(shù)據(jù)見表1
[0043]表1Lp (a)單抗棋盤法配對(duì)分析結(jié)果
[0044]
【權(quán)利要求】
1.一株穩(wěn)定分泌抗Lp (a)單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，其特征在于，其微生物保藏號(hào)是:CGMCC N0.8509。
2.—種構(gòu)建權(quán)利要求1所述雜交瘤細(xì)胞株的方法，其特征在于，包括:用Lp (a)分子中的多態(tài)性片段Kringle IV-2為篩選抗原，采用間接ELISA法和雙抗夾心ELISA法進(jìn)行Lp (a)特異性單克隆抗體篩選得到所述雜交瘤細(xì)胞株。
3.由權(quán)利要求1所述的雜交瘤細(xì)胞株分泌的抗Lp(a)單克隆抗體。
4.權(quán)利要求3所述的抗Lp(a)單克隆抗體在制備檢測(cè)脂蛋白(a)試劑中的用途。
5.一種檢測(cè)脂蛋白(a)的試劑盒，其特征在于:含有權(quán)利要求3所述的抗Lp (a)單克隆抗體。
6.一種Lp (a)膠乳增強(qiáng)免疫比濁檢測(cè)試劑盒，由彼此獨(dú)立的試劑I與試劑2組成；其中，試劑I的成分包括緩沖液，防腐劑；試劑2的成分包括緩沖液、牛血清白蛋白或小牛血清、偶聯(lián)有抗Lp(a)單克隆抗體的膠乳微球；其特征在于:所述的抗Lp(a)單克隆抗體是權(quán)利要求I的雜交瘤細(xì)胞株所分泌。
7.按照權(quán)利要求6所述的Lp(a)膠乳增強(qiáng)免疫比濁檢測(cè)試劑盒，其特征在于:試劑I的成分包括:20mM，pH7.4磷酸鹽緩沖液，0.l%NaN3。
8.按照權(quán)利要求6所述的Lp(a)膠乳增強(qiáng)免疫比濁檢測(cè)試劑盒，其特征在于:試劑2的成分為:20mM，pH7.4磷酸鹽緩沖液，0.1%BSA，0.2%偶聯(lián)有抗體的膠乳微球；其中抗體偶聯(lián)比:lmg/10mg膠乳微球；膠乳微球粒徑為124nm。
【文檔編號(hào)】G01N33/577GK103627677SQ201310611398
【公開日】2014年3月12日 申請(qǐng)日期:2013年11月26日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月26日
【發(fā)明者】不公告發(fā)明人 申請(qǐng)人:北京利德曼生化股份有限公司