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一種睡蓮花的檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種睡蓮花的檢測(cè)方法，包括睡蓮花樣品上C18色譜柱，采用甲醇-水進(jìn)行梯度洗脫，得到色譜圖，其中，水的體積百分?jǐn)?shù)隨時(shí)間變化為：0～10min，由95%降至90%；10～20min，由90%降至75%；20～40min，由75%降至55%；40～50min，由55%降至15%；50～60min，由15%降至0%；再將從色譜圖上得到?jīng)]食子酸、沒食子酸甲酯、煙花苷和槲皮素的色譜峰面積，標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出睡蓮花樣品中沒食子酸、沒食子酸甲酯、煙花苷和槲皮素的含量。本發(fā)明方法可以定量檢測(cè)睡蓮花中的沒食子酸、沒食子酸甲酯、煙花苷和槲皮素，且具有良好的準(zhǔn)確度和重復(fù)性，從而實(shí)現(xiàn)睡蓮花質(zhì)量的有效控制。
【專利說(shuō)明】一種睡蓮花的檢測(cè)方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種睡蓮花的檢測(cè)方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 睡蓮花為睡蓮科雪白睡蓮)的干燥花蕾，分布于我國(guó) 新疆的南部地區(qū)，具有降熱止咳、益心護(hù)腦、安神止痛功效，臨床主要用于感冒發(fā)熱、頭痛咳 嗽、咽痛等表癥，是維吾爾醫(yī)常用的單方或復(fù)方抗病毒藥中的主要藥物。對(duì)睡蓮花質(zhì)量的有 效控制是保證藥物獲得穩(wěn)定、可靠的療效的前提。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的是提供一種睡蓮花的檢測(cè)方法，以提高現(xiàn)有睡蓮花的質(zhì)量控制水 平。
[0004] 本發(fā)明實(shí)現(xiàn)上述目的所采用的技術(shù)方案如下： 一種睡蓮花的檢測(cè)方法，步驟包括： (1) 睡蓮花樣品上C18色譜柱，采用甲醇-水進(jìn)行梯度洗脫，得到色譜圖，其中，水的體 積百分?jǐn)?shù)隨時(shí)間變化為：〇?10 min，由95%降至90% ;10?20 min，由90%降至75% ;20? 40 min，由 75% 降至 55% ;40 ?50 min，由 55% 降至 15% ;50 ?60 min，由 15% 降至 0% ; (2) 用沒食子酸、沒食子酸甲酯、煙花苷和槲皮素的標(biāo)準(zhǔn)溶液繪制濃度-色譜峰面積的 標(biāo)準(zhǔn)曲線； (3) 從步驟（1)的色譜圖上得到?jīng)]食子酸、沒食子酸甲酯、煙花苷和槲皮素的色譜峰面 積，再代入步驟（2)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出睡蓮花樣品中沒食子酸、沒食子酸甲酯、煙花苷和槲皮 素的含量。
[0005] 進(jìn)一步，步驟（1)中，用甲醇將睡蓮花樣品配制成甲醇溶液。
[0006] 本發(fā)明方法可以定量檢測(cè)睡蓮花中的沒食子酸、沒食子酸甲酯、煙花苷和槲皮素， 且具有良好的準(zhǔn)確度和重復(fù)性，從而可以實(shí)現(xiàn)對(duì)睡蓮花質(zhì)量的有效控制。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0007] 圖1.供試樣品溶液的色譜圖； 圖2.標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖； 圖3.供試樣品溶液中沒食子酸的一級(jí)質(zhì)譜圖； 圖4.標(biāo)準(zhǔn)溶液中沒食子酸的一級(jí)質(zhì)譜圖； 圖5.供試樣品溶液中沒食子酸甲酯的一級(jí)質(zhì)譜圖； 圖6.標(biāo)準(zhǔn)溶液中沒食子酸甲酯的一級(jí)質(zhì)譜圖； 圖7.供試樣品溶液中煙花苷的一級(jí)質(zhì)譜圖； 圖8.標(biāo)準(zhǔn)溶液中煙花苷的一級(jí)質(zhì)譜圖； 圖9.供試樣品溶液中槲皮素的一級(jí)質(zhì)譜圖； 圖10.標(biāo)準(zhǔn)溶液中槲皮素的一級(jí)質(zhì)譜圖； 圖11.供試樣品溶液中沒食子酸的二級(jí)質(zhì)譜圖； 圖12.標(biāo)準(zhǔn)溶液中沒食子酸的二級(jí)質(zhì)譜圖； 圖13.供試樣品溶液中沒食子酸甲酯的二級(jí)質(zhì)譜圖； 圖14.標(biāo)準(zhǔn)溶液中沒食子酸甲酯的二級(jí)質(zhì)譜圖； 圖15.供試樣品溶液中煙花苷的二級(jí)質(zhì)譜圖； 圖16.標(biāo)準(zhǔn)溶液中煙花苷的二級(jí)質(zhì)譜圖； 圖17.供試樣品溶液中槲皮素的二級(jí)質(zhì)譜圖； 圖18.標(biāo)準(zhǔn)溶液中槲皮素的二級(jí)質(zhì)譜圖。

【具體實(shí)施方式】
[0008] 以下結(jié)合實(shí)施例及附圖對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。
[0009] 6批睡蓮花藥材分別采購(gòu)于新疆奇康哈博維藥有限公司、維吾爾藥業(yè)、維吾爾醫(yī) 院，經(jīng)鑒定為睡蓮科雪白睡蓮妙?/Aaea 的干燥花蕾。沒食子酸對(duì)照品(批 號(hào)：110831-2012054,中國(guó)食品藥品檢定研究院)、沒食子酸甲酯對(duì)照品、煙花苷對(duì)照品（新 疆藥物研究所）、槲皮素對(duì)照品(批號(hào)=20111013,上海源葉生物科技有限公司） 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀：包括Agilent 1200高效液相色譜儀，1100型紫外檢測(cè)器，6310 ion trap液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)，美國(guó)Agilent公司。
[0010] 檢測(cè)過(guò)程如下： 1、供試樣品溶液的制備：將6批睡蓮花藥材分別粉碎，分別精確稱取1 g睡蓮花藥材粉 末，置于100 mL具塞錐形瓶中，加入50 mL甲醇，稱重，超聲處理30 min (功率80 W，頻率 100 Hz)，放冷，再次稱重，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，過(guò)濾，取濾液，用0. 45 μ m微孔濾膜過(guò)濾， 備用。
[0011] 2、標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：精確稱取沒食子酸、沒食子酸甲酯、煙花苷和槲皮素，混合，用 甲醇溶解，得到一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。
[0012] 3、供試樣品溶液用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行測(cè)定，色譜條件：采用C18色譜 柱，以甲醇為流動(dòng)相A、水為流動(dòng)相B進(jìn)行梯度洗脫，流速：lmL/min ;進(jìn)樣量：20 μ L ;柱溫： 30°C，梯度洗脫時(shí)，流動(dòng)相Β (水）體積百分?jǐn)?shù)隨時(shí)間變化為：0?10 min，由95%線性降至 90% ;10 ?20 min，由 90% 線性降至 75% ;20 ?40 min，由 75% 線性降至 55% ;40 ?50 min， 由55%線性降至15% ;50?60 min，由15%線性降至0%。得到的色譜圖如圖1所示。
[0013] 4、將一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液在相同的色譜條件進(jìn)行測(cè)定。以濃度為橫坐標(biāo)、 色譜峰面積為縱坐標(biāo)繪制相應(yīng)沒食子酸、沒食子酸甲酯、煙花苷和槲皮素的濃度-色譜峰 面積標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到?jīng)]食子酸的線性回歸方程為Y= 16065X - 462 (r = 0.9991)，沒食子 酸甲酯的線性回歸方程為Y = 74059X - 110. 43 (r = 0. 9991)，煙花苷線的性回歸方程為 Y = 8558. 6X - 360. 59 (r = 0· 9997)，槲皮素的線性回歸方程為 Y = 17285X - 76. 10 (r =0. 9991)。結(jié)果表明，沒食子酸、沒食子酸甲酯、煙花苷和槲皮素分別在0. 818?6. 428Pg、 0· 152?1.68Pg、l. 182?n.OOOPg和0· 124?1.02Pg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。得到 的色譜圖如圖2所示。
[0014] 如圖1和圖2的色譜圖可以看出，供試樣品出現(xiàn)與標(biāo)準(zhǔn)溶液保留時(shí)間一致的色譜 峰。
[0015] 相應(yīng)聯(lián)用的質(zhì)譜分析可進(jìn)一步明確其中的A即為沒食子酸、B即為沒食子酸甲酯、 C即為煙花苷、D即為槲皮素。具體如下：質(zhì)譜條件為：電噴霧負(fù)離子掃描模式（ESI+);霧 化氣(氮?dú)猓毫?0 psi ;離子噴霧電壓為3500 V ;干燥氣(氮?dú)猓囟葹?50°C ;干燥氣 流速為12 L/min ;-級(jí)質(zhì)譜掃描范圍為m/z 100?650 ;二級(jí)質(zhì)譜掃描范圍為m/z 100? 650。在全掃描一級(jí)質(zhì)譜中，標(biāo)準(zhǔn)溶液中沒食子酸出現(xiàn)m/zl68. 7分子離子峰，供試樣品出現(xiàn) 的分子離子峰與之一致（圖3?4);標(biāo)準(zhǔn)溶液中沒食子酸甲酯出現(xiàn)m/zl82. 7分子離子峰， 供試樣品出現(xiàn)的分子離子峰與之一致（圖5?6);標(biāo)準(zhǔn)溶液中煙花苷出現(xiàn)m/z593. 3分子離 子峰，供試樣品出現(xiàn)的分子離子峰與之一致（圖7?8);標(biāo)準(zhǔn)溶液中槲皮素出現(xiàn)m/z300. 8分 子離子峰，供試樣品出現(xiàn)的分子離子峰與之一致（圖9?10)。在全掃描二級(jí)質(zhì)譜中，以m/ zl68. 7作為母離子，破碎電壓0. 4 V，標(biāo)準(zhǔn)溶液中沒食子酸出現(xiàn)顯著的離子碎片m/zl24. 7， 供試樣品同樣出現(xiàn)相應(yīng)的離子碎片（圖11?12);以m/zl82. 7作為母離子，破碎電壓0.4V， 標(biāo)準(zhǔn)溶液中沒食子酸甲酯出現(xiàn)顯著的離子碎片m/zl23. 7、m/zl67. 6,供試樣品同樣出現(xiàn)相 應(yīng)的離子碎片（圖13?14);以m/z593. 3作為母離子，破碎電壓1 V，標(biāo)準(zhǔn)溶液中煙花苷出 現(xiàn)顯著的離子碎片m/z284. 7,供試樣品同樣出現(xiàn)相應(yīng)的離子碎片（圖15?16);以m/z300. 8 作為母離子，破碎電壓〇. 6 V，標(biāo)準(zhǔn)溶液中槲皮素出現(xiàn)顯著的離子碎片m/zl06. 7、m/zl50. 6、 m/z 178. 6,供試樣品同樣出現(xiàn)相應(yīng)的離子碎片（圖17?18)。
[0016] 由從步驟3得到的色譜圖上分別測(cè)出沒食子酸、沒食子酸甲酯、煙花苷和槲皮素 的色譜峰面積，并將得到的色譜峰面積代入步驟4相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線或回歸線性方程，分別 得到6批睡蓮花藥材中沒食子酸、沒食子酸甲酯、煙花苷和槲皮素的含量如下：

【權(quán)利要求】
1. 一種睡蓮花的檢測(cè)方法，步驟包括： (1) 睡蓮花樣品上C18色譜柱，采用甲醇-水進(jìn)行梯度洗脫，得到色譜圖，其中，水的體 積百分?jǐn)?shù)隨時(shí)間變化為：〇?10 min，由95%降至90% ;10?20 min，由90%降至75% ;20? 40 min，由 75% 降至 55% ;40 ?50 min，由 55% 降至 15% ;50 ?60 min，由 15% 降至 0% ; (2) 用沒食子酸、沒食子酸甲酯、煙花苷和槲皮素的標(biāo)準(zhǔn)溶液繪制濃度-色譜峰面積的 標(biāo)準(zhǔn)曲線； (3) 從步驟（1)的色譜圖上得到?jīng)]食子酸、沒食子酸甲酯、煙花苷和槲皮素的色譜峰面 積，再代入步驟（2)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出睡蓮花樣品中沒食子酸、沒食子酸甲酯、煙花苷和槲皮 素的含量。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述睡蓮花的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟（1)中，用甲醇將睡蓮花 樣品配制成甲醇溶液。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK104267114SQ201410456354
【公開日】2015年1月7日 申請(qǐng)日期:2014年9月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月10日
【發(fā)明者】周曉英, 季志紅, 陳金成, 李潔, 李柯翱, 丁文歡 申請(qǐng)人:新疆奇康哈博維醫(yī)藥研究院（有限公司）