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一種檢測食品中鄰苯二甲酸酯的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種檢測食品中鄰苯二甲酸酯（PAEs）的方法，本發(fā)明的特點在于：（1）采用適量有機溶劑作為食品樣品中PAEs的萃取劑；（2）用液液微萃取技術(shù)對食品樣品的提取液進行萃?。唬?）通過HPLC進行測定，對照PAEs的工作曲線判斷PAEs的含量。與現(xiàn)有的檢測技術(shù)相比，本發(fā)明的方法優(yōu)勢在于：操作簡單；綠色環(huán)保；成本低廉；準確度高；重現(xiàn)性好；檢測時間短。適用于食品安全檢測，具有廣泛的應(yīng)用潛力和廣闊的市場前景。
【專利說明】—種檢測食品中鄰苯二甲酸酯的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]發(fā)明屬于分析化學(xué)領(lǐng)域，更具體涉及一種食品中鄰苯二甲酸酯的檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]塑化劑又稱增塑劑，為鄰苯二甲酸酯類(PAEs)化合物，因增大產(chǎn)品的可塑性和柔韌性而廣泛地應(yīng)用于日常生活中，在潤滑劑、驅(qū)蟲劑、化妝品、去泡劑、食品包裝材料、醫(yī)療用具、人造革等生產(chǎn)中都有使用。它具有種類多，難以降解等特點，對人體、生物體、植物體都有較大的毒性，最主要的表現(xiàn)其對生殖系統(tǒng)危害和對嬰兒的致畸性，并有極強的致癌性和免疫抑制性，成為全球性最普遍的污染物之一。在塑料制品中，由于鄰苯二甲酸酯與聚烯烴類塑料分子是相溶的，兩者間并沒有嚴格的化學(xué)結(jié)合鍵，因此在使用過程中，鄰苯二甲酸酯很容易從塑料中遷移到外環(huán)境，造成對食品、土壤、水和空氣的污染。由于塑料制品使用方便，在日常生活被廣泛的用來盛裝食品，如各種塑料盒、塑料袋及塑料罐等食品容器等往往都含有PAEs，而PAEs又很容易從塑料中溶出，所以日常生活中喝的水、飲料、吃的蔬菜、水果、畜產(chǎn)品、甚至是熟食的包裝袋都可能含有PAEs。基于上述原因，PAEs污染已受到全世界的高度重視。美國、日本以及歐洲許多國家都將PAEs列入優(yōu)先監(jiān)測的黑名單，美國環(huán)保局129種重點控制的污染物黑名單中列入了 6種鄰苯二甲酸酯。因此，尋找一種簡便、快速、精確的檢測食品中PAEs的方法是非常必要，也是勢在必行的。
[0003]國內(nèi)外對食品中檢測的報道較多，基本以氣相色譜檢測為主，以液相色譜為輔，另外還有一些使用熒光分光光度法檢測。這些檢測方法一般都結(jié)合了一些樣品前處理技術(shù)，目前主要采用的有液液萃取(LLE)、濁點萃取(CPE)、固相萃取(SPE)和固相微萃取(SPME)。這些方法在萃取PAEs上或多或少都有自己的缺點。本發(fā)明采用的長鏈脂肪酸或者長鏈醇類作為萃取劑進行微萃取是一種綠色的樣品前處理技術(shù)，具有萃取率高，綠色環(huán)保等優(yōu)點，與色譜技術(shù)連用能達到較低的檢出限，得到較好的效果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的就是針對現(xiàn)有檢測PAEs的方法所存在的弊端，研究出一種食品中的PAEs經(jīng)過液液微萃取以后，然后進行HPLC分析的方法，該方法快速簡便、成本低廉、準確性高、重現(xiàn)性好的適用于食品中PAEs的檢測方法。
[0005]本發(fā)明的目的是通過以下方案來實現(xiàn)的:
(I)工作曲線的繪制:在10ng/mL-1000ng/mL范圍配置不同濃度梯度的混合標準工作溶液，按照確定的最佳檢測條件，以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標制作標準工作曲線，測定PAEs的回歸方程、相關(guān)系數(shù)、相對標準偏差和回收率。
[0006](2)樣品處理
①固體樣品(面包、餅干等)
稱取2.00-5.0Og固體樣品，粉碎后放于潔凈錐形瓶中，向錐形瓶中加入3-6mL無水乙醇、2-4mL丙酮，然后振搖5-10min后，將萃取液用普通漏斗過濾，將濾液移至容量瓶中用蒸餾水稀釋至25mL，制得樣品提取液。
[0007]②牛奶樣品
取5-10mL牛奶樣品于IOmL離心管中，加入0.1-0.2g乙酸鈉、0.4-0.8g硫酸鎂和
0.5-1.0mL乙腈,在3000_6000r/minl離心5_10min沉淀蛋白質(zhì),上清液轉(zhuǎn)移至另一只離心管中，重復(fù)上述的操作，取上清液用0.5%的磷酸二氫鉀緩沖溶液(pH=6.0)稀釋至5mL,然后移至25mL定容瓶中定容,制得樣品提取液。
[0008]③食用油
取食用油5-10mL于潔凈分液漏斗中，向分液漏斗中加入l_2mL無水甲醇和l_2mL乙腈，振搖，靜置分層，取出上清液，萃取兩次，合并上清液，然后移至25mL容量瓶中定容，制得樣品提取液。
[0009]④果汁樣品
取果汁樣品5-10mL使用普通漏斗過濾，濾液移至25mL容量瓶中定容，制得樣品提取液。
[0010](3)取適量樣品提取液于具塞試管中，用緩沖溶液調(diào)pH，然后加入適量兩性溶劑和長鏈脂肪酸或長鏈脂肪醇，渦旋，離心，移除下層溶液，取上層溶液用甲醇稀釋，取適量甲醇溶液進液相色譜分析，對照工作曲線判斷PAEs的含量。
[0011]所述長鏈脂肪酸或長鏈脂肪醇為:正癸酸、正己酸、正壬酸、正辛酸、正庚酸、正丁醇、正辛醇、正己醇、正癸醇之一種。
[0012]所述緩沖溶液為pH=8.0磷酸緩沖溶液,將樣品調(diào)至7.0-8.0。
[0013]所述長鏈脂肪酸或長鏈脂肪醇萃取劑體積為0.1-1.0mL。
[0014]所述渦旋時間為l_3min，離心轉(zhuǎn)速2500-5000 r/min時間為5 -1Omin0
[0015]所述萃取溶液用甲醇稀釋至1.0mL。
[0016]所述色譜條件為:采用的設(shè)備為高效液相色譜儀,流動相:乙腈:水(O-1Omin:55%-80 乙臆;10min_12min:80%-100% 乙臆;12min_20min: 100% 乙臆；v/v);流速 1.0 mL/min ;檢測波長:225nm。
[0017]本發(fā)明的特點以及與現(xiàn)有技術(shù)相比所具有的優(yōu)點:
1.本方法選擇長鏈脂肪酸和長鏈脂肪醇作為萃取劑萃取食品中的PAEs，由于所選萃取劑只需通過渦旋即可產(chǎn)生乳化均相，之后離心又可分相完全，對PAEs有較高的萃取率，萃取劑用量少，達到了分散液液微萃取的效果，而又沒有加入分散劑，對環(huán)境友好。該檢測具有較高的靈敏度，能達到較低的檢出限。
[0018]2.操作簡單，不需加熱，所需時間短，只用到渦旋器、小型離心機進行樣品前處理，一般實驗室都能進行。
[0019]3.本方法適用范圍廣，可用于一般食品中PAEs的檢測，并可用于相關(guān)部門的檢測。
【具體實施方式】
[0020]下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步地說明，但本發(fā)明的保護范圍并不限于此。
[0021]具體實施例1
牛奶中PAEs的含量檢測方法，包括以下步驟:(1)工作曲線的繪制:將DBEP、DMEP,BBP、DBP、DNOP, DCHP 100 μ g/mL 的標準儲備液用甲醇分別稀釋成 0.1 μ g/mL、0.5 μ g/mL、
1.0 μ g/mL、5.0 μ g/mL、10.0 μ g/mL、20.0 μ g/mL、40.0 μ g/mL,然后在下面的色譜條件下進樣:C18 柱(150 mmX4.6 mm, 1.d, 5 μ m);進樣量:20 μ L ;流動相:乙腈:水(O-lOmin:55%-80 乙臆;10min_12min:80%-100% 乙臆;12min_20min: 100% 乙臆；v/v);流速 1.0 mL/min ;檢測波長:225 nm?；貧w方程、相關(guān)系數(shù)、相對標準偏差、回收率等見表1 ;
(2)樣品處理:取5mL牛奶樣品于IOmL離心管中，加入0.1g乙酸鈉，在6000r/minl離心6min沉淀蛋白質(zhì)，上清溶液轉(zhuǎn)移至另一只離心管中，重復(fù)上述的操作，取上清溶液用0.5%的磷酸二氫鉀緩沖溶液(pH=6.0)稀釋至5mL，然后移至25mL定容瓶中定容，制得樣品提取液；(3)取5mL牛奶樣品提取液，用pH =8.0的磷酸緩沖液調(diào)節(jié)pH至8，取0.5mL正己酸加入離心管，渦旋lmin，然后在5000 r/min離心5 min，用吸管移除下層溶液，取上層有機相
0.4 mL用甲醇溶解至1.0 mL。取所得甲醇溶液20yL，與測定工作曲線相同的色譜條件，得到相應(yīng)峰面積，代入表1工作曲線，求得牛奶中PAEs的含量:、DMEP、BBP、DBP、DCHP分別為
0.01、0.07、0.10、0.09M<g /mL。
[0022]表1 PAEs的線性方程
【權(quán)利要求】
1.一種檢測食品中鄰苯二甲酸酯的方法，包括以下步驟: (1)工作曲線的繪制:在10ng/mL-1000ng/mL范圍配置不同濃度梯度的PAEs標準工作溶液，按照確定的最佳檢測條件，以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標制作標準工作曲線，測定PAEs的回歸方程、相關(guān)系數(shù)、相對標準偏差和回收率； (2)樣品處理 ①固體樣品(面包、餅干等) 稱取2.00-5.0Og固體樣品，粉碎后放于潔凈錐形瓶中，向錐形瓶中加入3-6mL無水乙醇、2-4mL丙酮，然后振搖5-10min后，將萃取液用普通漏斗過濾，將濾液移至容量瓶中用蒸餾水稀釋至25mL，制得樣品提取液； ②牛奶樣品 取5-10mL牛奶樣品于IOmL離心管中，加入0.1-0.2g乙酸鈉、0.4-0.8g硫酸鎂或0.5-1.0mL乙腈中一種,在3000-8000r/minl離心5_10min沉淀蛋白質(zhì),上清溶液轉(zhuǎn)移至另一只離心管中，重復(fù)上述的操作，取上清溶液用0.5%的磷酸二氫鉀緩沖溶液(pH=6.0)稀釋至5mL,然后移至25mL定容瓶中定容,制得樣品提取液； ③食用油 取食用油5-10mL于潔凈 分液漏斗中，向分液漏斗中加入l_2mL無水甲醇和l_2mL乙腈，振搖，靜置分層，取出上清液，萃取兩次，合并上清液，然后移至25mL容量瓶中定容，制得樣品提取液； ④果汁樣品 取果汁樣品5-10mL于潔凈的錐形瓶中，加入l_2mL無水乙醇和l_2mL丙酮，震搖5-10min,使用普通漏斗過濾，濾液移至25mL容量瓶中定容，制得樣品提取液； (3)取適量樣品提取液于具塞試管中，用緩沖溶液調(diào)pH，加入適量長鏈脂肪酸或長鏈脂肪醇，渦旋，離心，移除下層溶液，取上層溶液用甲醇稀釋，取適量甲醇溶液進液相色譜分析，對照工作曲線判斷PAEs的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求書I所述的一種檢測食品中PAEs的方法，其特征在于PAEs包括:鄰苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯(DBEP)、鄰苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯(DMEP)、鄰苯二甲酸丁基芐基酯(BBP)、鄰苯二甲酸二丁酯(DBP)、鄰苯二甲酸二正辛酯(DN0P)、鄰苯二甲酸二環(huán)己酯(DCHP)中一種或幾種。
3.根據(jù)權(quán)利要求書I所述的一種檢測食品中PAEs的方法，其特征在于長鏈脂肪酸或長鏈脂肪醇為:正癸酸、正己酸、正壬酸、正辛酸、正庚酸、正丁醇、正辛醇、正己醇、正癸醇之一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求書I所述的一種檢測食品中PAEs的方法，其特征在于緩沖溶液為pH=8.0磷酸緩沖溶液，將樣品調(diào)至7.0-8.0。
5.根據(jù)權(quán)利要求書I所述的一種檢測食品中PAEs的方法，其特征在于加入的長鏈脂肪酸或長鏈脂肪醇體積為0.1-1.0mL。
6.根據(jù)權(quán)利要求書I所述的一種檢測食品中PAEs的方法，其特征在于渦旋時間為l-3min，離心轉(zhuǎn)速 2500-5000 r/min 時間為 5-10 min。
7.根據(jù)權(quán)利要求書I所述的一種檢測食品中PAEs的方法，其特征在于萃取溶液用甲醇稀釋至 1.0-1.5mL。
8.根據(jù)權(quán)利要求書I所述的一種檢測食品中PAEs的方法，其特征在于色譜條件為:采用的設(shè)備為高效液相色譜儀，流動相:乙腈:水(O-1Omin:55%-80乙腈；10min_12min:80%-100% 乙臆;12min_20min:10`0% 乙臆；v/v);流速 1.0 mL/min ;檢測波長:225nm。
【文檔編號】G01N30/02GK103760274SQ201410054509
【公開日】2014年4月30日 申請日期:2014年2月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月18日
【發(fā)明者】楊亞玲, 廉源沛, 楊超 申請人:云南健牛生物科技有限公司