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專利名稱：視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞層體外分離制備的方法
技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞層體外分離制備的方法。
技術(shù)背景:
世界衛(wèi)生組織(WHO)統(tǒng)計(jì)資料顯示，全球約有1.6億視力障礙者，4000萬(wàn)法定盲人，中國(guó)是全世界盲人最多的國(guó)家，約有700萬(wàn)盲人，而中國(guó)每年約有45萬(wàn)人失明，每分鐘新增一例盲人。如果我國(guó)盲人快速增加的趨勢(shì)無(wú)法有效地控制，到2020年預(yù)期中國(guó)的盲人將增加到2000萬(wàn)，因致盲性眼病造成的傷害以及給社會(huì)造成的沉重負(fù)擔(dān)將無(wú)法估量。視網(wǎng)膜疾病是發(fā)達(dá)國(guó)家致盲的最常見(jiàn)原因(超過(guò)50%)，我國(guó)每年因此類(lèi)疾病失明的患者近20萬(wàn)(占45%)，是目前國(guó)際上尚無(wú)有效治療手段的嚴(yán)重致盲性眼病。因此，為發(fā)病率高、危害重的致盲性視網(wǎng)膜疾病尋找治療手段，是我國(guó)經(jīng)濟(jì)、社會(huì)和人民健康的重大需求。因此，大力開(kāi)展視網(wǎng)I吳的基礎(chǔ)與臨床研究，尋找有效的治療措施的研究迫在眉睦。實(shí)驗(yàn)眼科學(xué)領(lǐng)域，關(guān)于視網(wǎng)膜基礎(chǔ)與臨床研究中，對(duì)于視網(wǎng)膜發(fā)育及其功能、各種視網(wǎng)膜疾病的發(fā)病機(jī)制的研究，均需要把不同種屬動(dòng)物來(lái)源的眼球或人體捐獻(xiàn)來(lái)源的眼球內(nèi)的視網(wǎng)膜分離取出后，再進(jìn)行各類(lèi)相關(guān)性的細(xì)胞、分子、基因、核酸或蛋白質(zhì)等水平的檢測(cè)。視網(wǎng)膜是眼部結(jié)構(gòu)的重要組成部分，是位于眼球壁內(nèi)層的一層透明薄膜，由視網(wǎng)膜神經(jīng)層和視網(wǎng)膜色素上皮層組成，視網(wǎng)膜神經(jīng)層與色素上皮層之間有一腔隙，為視網(wǎng)膜下腔，視網(wǎng)膜色素上皮層與脈絡(luò)膜緊密相連。目前，國(guó)內(nèi)外常用的取出視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞層的方法是用酶消化和顯微解剖分離來(lái)獲得，一般需要時(shí)間為15-25分鐘。酶消化的最大缺點(diǎn)是把視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞層相鄰部位的視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞或脈絡(luò)膜色素細(xì)胞消化下來(lái)，造成細(xì)胞之間的污染，使視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞純度下降；顯微解剖分離的方法耗時(shí)較長(zhǎng)，視網(wǎng)膜暴露在空氣中時(shí)間越長(zhǎng)，神經(jīng)細(xì)胞的死亡數(shù)目越多，而且嫻熟的顯微操作技巧需要長(zhǎng)時(shí)間的訓(xùn)練。由于視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞隨著離體時(shí)間的延長(zhǎng)死亡數(shù)量增加，一般視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞離體15-25分鐘后，視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞死亡率占40-60%，可造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果的嚴(yán)重錯(cuò)誤。如何解決視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞層的快速分離，得到具有活性的視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞層，多年來(lái)是眼科領(lǐng)域科學(xué)家面對(duì)的困擾，也是我們急需解決的重點(diǎn)難題。發(fā)明內(nèi)容:
本發(fā)明目的是提供一種視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞層體外分離制備的方法，能夠克服常用的視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞層的分離所用時(shí)間長(zhǎng)的缺點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞層的快速分離。本發(fā)明提供一種視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞層體外分離制備的方法，包括如下步驟:
A.提供實(shí)驗(yàn)動(dòng)物眼球或遺體捐獻(xiàn)眼球；
B.清潔步驟A中所述眼球；
C.將步驟B中所述眼球固定在眼球固定器上；
D.提供視網(wǎng)膜取出器，所提供的視網(wǎng)膜取出器，包括手柄，所述手柄一端設(shè)有視網(wǎng)膜取出勺，另一端設(shè)有刀片，所述視網(wǎng)膜取出勺所在平面與手柄水平軸線呈傾斜夾角，所述刀片的前端設(shè)有刀尖；E.在解剖顯微鏡下，用步驟D中所述視網(wǎng)膜取出器的刀片沿角鞏膜緣或平坦部切開(kāi)眼球全周的眼球壁全層，形成一個(gè)眼杯；
F.用步驟D中所述視網(wǎng)膜取出勺進(jìn)入眼杯，把晶狀體和玻璃體取出；
G.沿眼球壁的切口全周分離眼球壁的內(nèi)層，再用步驟D中所述視網(wǎng)膜取出勺沿眼球壁的弧度進(jìn)入視網(wǎng)膜下腔，取出完整的視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞層。優(yōu)選方案:還包括將步驟G取出的視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞層放在預(yù)冷的離心管中，用于下一步的實(shí)驗(yàn)。優(yōu)選方案:所述步驟B中清潔的方法包括下列步驟，先用預(yù)冷的PH7.4的磷酸鹽緩沖液充分沖洗眼球，根據(jù)眼球來(lái)源，評(píng)估是否有細(xì)菌污染或感染，選擇相應(yīng)濃度的抗生素加入預(yù)冷的生理鹽水內(nèi)充分沖洗眼球，一般預(yù)防感染，使用慶大霉素則每毫升生理鹽水內(nèi)含有20IU，將沖洗過(guò)的眼球放在裝有冰塊的眼球固定器上，最后去除眼球壁表面的所有血樣附屬物和其他附屬的組織，保留四條直肌。優(yōu)選方案:所述預(yù)冷，是把裝有PH7.4的磷酸鹽緩沖液和生理鹽水的瓶子事先埋在冰里，使PH7.4的磷酸鹽緩沖液和生理鹽水的溫度保持在O度左右，清潔的步驟在溫度處于0-4度的環(huán)境下進(jìn)行。優(yōu)選方案:將所述的四條直肌固定在與眼球大小相應(yīng)的裝有冰塊的眼球固定器上。優(yōu)選方案:所述步驟E中，沿眼角鞏膜緣后1-4_切開(kāi)眼球壁的全層，切開(kāi)眼球壁的深度為0.6-1.5mm,眼球壁全層切口圓周度數(shù)為360度，去除眼前段組織，保留眼杯內(nèi)的組織結(jié)構(gòu)；
優(yōu)選方案:切開(kāi)眼球壁全層之前，預(yù)先用標(biāo)記筆畫(huà)出所要切開(kāi)的部位，以免錯(cuò)位。
·
優(yōu)選方案:所述步驟G中的分離，用一把無(wú)齒鑷輕輕夾住眼球壁呈灰白色的內(nèi)層邊緣，用虹膜分離器的前端沿眼球壁切口的全周給予充分的分離，分離深度在2-5_左右，一般小鼠2-2.5mm,大動(dòng)物3_4mm,人眼多為5mm左右。有益效果:快速取出視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞層，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果反應(yīng)出真實(shí)性，解決了多年來(lái)困擾眼科領(lǐng)域科學(xué)家的問(wèn)題；快速取出視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞層，簡(jiǎn)便了取出方法，保存了視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞的活性，提高了效率，關(guān)鍵是能正確反應(yīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，為視網(wǎng)膜發(fā)病機(jī)制、視網(wǎng)膜發(fā)育和基因調(diào)控機(jī)制的研究，創(chuàng)造了堅(jiān)實(shí)有利的基礎(chǔ)條件。采用本專利中研制的視網(wǎng)膜取出器，5秒內(nèi)快速完整的從動(dòng)物來(lái)源的眼球或遺體捐獻(xiàn)的眼球中取出視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞層，確保視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞的活性，能準(zhǔn)確的檢測(cè)來(lái)源于不同種屬的脊椎動(dòng)物、不同發(fā)育階段動(dòng)物眼球或遺體捐獻(xiàn)眼球的視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞的RNA水平、蛋白表達(dá)水平、基因表達(dá)水平等，使各種實(shí)驗(yàn)結(jié)果具備最真實(shí)性，為視網(wǎng)膜發(fā)育的研究和視網(wǎng)膜早期病變的研究提供了技術(shù)支撐。本專利方法與常規(guī)的酶消化和解剖分離視網(wǎng)膜的三種方法比較研究:定量分析出生后14天的小鼠，每一對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞中光感受器細(xì)胞內(nèi)Rho和Mop兩種視蛋白，節(jié)細(xì)胞內(nèi)Thyl蛋白含量的檢測(cè)，結(jié)果顯示:本專利方法獲得的視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞中，三種蛋白的表達(dá)水平分別為90%、80%、75% ;酶消化法分別為35%、31%、26% ;解剖分離法為36%、30%、25% ；三種蛋白的總體水平比現(xiàn)有的方法提高2倍以上；每一對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞中Rho、Mop和Thyl三種蛋白水平定性分析，結(jié)果顯示，本專利方法獲得的視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)三種蛋白的水平明顯高于另外兩種方法；對(duì)每只小鼠一對(duì)視網(wǎng)膜的總RNA水平定量顯示，本專利方法為98%，酶消化法為40%，顯微解剖法為35%。附圖及


圖1.本專利與常規(guī)的酶消化、解剖分離三種方法獲得視網(wǎng)膜神經(jīng)層，三種視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)蛋白水平定量分析比較 圖2.本專利與常規(guī)的酶消化、解剖分離三種方法中Rho、Mop和Thyl三種蛋白水平定性分析比較 圖3.本專利與常規(guī)的酶消化、解剖分離三種方法中視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞總RNA水平定量分析比較圖。
具體實(shí)施方式
:
實(shí)施例1:對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小鼠眼球進(jìn)行的一種視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞層體外分離制備的方法，采取的步驟如下:
(I)清潔眼球:首 先用預(yù)冷的磷酸鹽緩沖液(PH7.4)充分沖洗小鼠來(lái)源的眼球，再用每毫升含有20IU的慶大霉素液的預(yù)冷生理鹽水充分沖洗眼球；眼球放在裝有冰塊的眼球固定器上，去除眼球表面的所有血樣附著物和其他附屬組織，保留四條直肌。在該步驟中注意事項(xiàng)如下:因?yàn)閬?lái)自動(dòng)物(或遺體捐獻(xiàn)的眼球)眼球表面有許多血樣附著物和其他附屬的組織，為了防止組織細(xì)胞之間的污染，小心用彎剪刀仔細(xì)剪除眼球表面的組織和血樣附著物，保留四條直肌。因?yàn)檠矍虮谳^薄，小動(dòng)物眼球壁大約厚度0.6-0.8_，大動(dòng)物眼球壁厚度大約0.8-1.2mm,人的眼球壁厚度大約1.0-1.5mm,切記不要把眼球壁剪破。該步驟要求動(dòng)作準(zhǔn)確迅速，確保在0°-4°低溫條件下操作，以保證視網(wǎng)膜神經(jīng)層各種細(xì)胞的活性。每一個(gè)眼球，需要更換一次眼球固定器的一次性保潔膜，以防污染。(2)固定眼球:將清潔處理過(guò)的小鼠眼球的四條直肌固定在與眼球大小相應(yīng)的裝有冰塊的眼球固定器上。注意事項(xiàng):為了防止污染，每一只眼球在沖洗后，更換一張眼球固定器的一次性保潔膜。在固定眼球時(shí)，千萬(wàn)注意不要強(qiáng)行牽拉四條直肌，因?yàn)橹奔§柲じ街c(diǎn)的鞏膜厚度大約為0.2-0.3mm,以免造成眼球破裂。選擇大小合適的眼球固定器，以眼球的直徑大小為依據(jù)來(lái)選擇。如果眼球固定器大小不適宜，切開(kāi)眼球壁的時(shí)候，嚴(yán)重者可造成眼內(nèi)容物的脫出，也可帶來(lái)操作的不便。(3)切開(kāi)眼球壁:在解剖顯微鏡下，用視網(wǎng)膜取出器一端的刀片在小鼠眼球上，沿角鞏膜緣后Imm切開(kāi)全層的眼球壁360度。注意事項(xiàng):刀片必須確保其刀刃的鋒利，以確保手術(shù)時(shí)避免對(duì)眼球施加不必要的壓力，避免重復(fù)使用，以防止污染；根據(jù)不同眼球壁的厚度，掌握好切開(kāi)球壁的深度，一般成年小動(dòng)物眼球壁厚度大約為0.6-0.8_。該步驟必須在顯微鏡下仔細(xì)操作，不要切開(kāi)的過(guò)淺或過(guò)深，二者均可造成眼球組織細(xì)胞的損傷。小動(dòng)物眼球壁切開(kāi)是沿著角膜緣外Imm切開(kāi)，預(yù)先用標(biāo)記筆畫(huà)出所要切開(kāi)的部位，以免錯(cuò)位。(4)清除眼內(nèi)容物:去除眼前段，用視網(wǎng)膜取出器一端的視網(wǎng)膜取出勺，沿著眼球壁的切口進(jìn)入眼內(nèi)，把晶狀體和玻璃體輕輕托出。注意事項(xiàng):操作時(shí)不要對(duì)眼杯施加任何壓力，小動(dòng)物用視網(wǎng)膜取出勺從眼球壁的切口沿球壁的弧形進(jìn)入，輕輕將晶狀體和玻璃體一起托出；視網(wǎng)膜取出勺進(jìn)入眼內(nèi)操作時(shí)，動(dòng)作一定要輕柔，切記不可使用其攪動(dòng)眼內(nèi)物，以免牽拉視網(wǎng)膜，造成人為的視網(wǎng)膜脫離。(5)取出視網(wǎng)膜神經(jīng)層:用一把無(wú)齒鑷輕輕夾住眼球壁呈灰白色的內(nèi)層邊緣，用虹膜分離器的前端沿眼球壁切口的全周給予充分的分離，分離深度在2-2.5mm左右，更換取出勺沿著球壁已分離的內(nèi)層組織下進(jìn)入視網(wǎng)膜下腔，取出完整的視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞層。注意事項(xiàng):由于眼球離體后，離體時(shí)間越長(zhǎng)，視網(wǎng)膜神經(jīng)層越容易與視網(wǎng)膜色素上皮層脫離，該步驟操作時(shí)動(dòng)作一定要輕柔，沿著視網(wǎng)膜下腔的自然弧度進(jìn)入，將全層視網(wǎng)膜神經(jīng)層取出。根據(jù)眼球的大小，選擇相適應(yīng)直徑的視網(wǎng)膜取出勺。調(diào)整視網(wǎng)膜取出勺一定恰當(dāng)?shù)慕嵌群筮M(jìn)入視網(wǎng)膜下腔，切記操作動(dòng)作不要粗暴，這一步最容易造成視網(wǎng)膜取出不完全，或視網(wǎng)膜呈碎片狀。(6)取出視網(wǎng)膜神經(jīng)層后的處理:取出視網(wǎng)膜神經(jīng)層后，立即放在預(yù)冷的離心管中，進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn)。為了證實(shí)本專利方法的優(yōu)越性和可靠性，利用本專利方法視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞層分離制備與常規(guī)的酶消化和解剖分離方法，獲取出生后14天小鼠的視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞層，對(duì)其中視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞所含的Rho、Mop和Thyl三種蛋白水平進(jìn)行定量和定性分析；并對(duì)三種方法獲得的視網(wǎng)膜進(jìn)行RNA提取后，進(jìn)行視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞總RNA水平定量檢測(cè)。圖1.采用本專利方法提取視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞層與常規(guī)的酶消化和解剖分離的方法進(jìn)行比較研究:取出生后14天同窩小鼠的視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞,進(jìn)行Rho、Mop和Thyl三種蛋白水平定量分析，該方法獲取的視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞中三種蛋白的含量明顯高于其它兩種方法的2倍。圖2.采用本方法提取視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞層與常規(guī)的酶消化和解剖分離的方法進(jìn)行比較研究:取出生后14天同窩小鼠的視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞，進(jìn)行Rho、Mop和Thyl三種視網(wǎng)膜神經(jīng)層光感受器細(xì)胞和節(jié)細(xì)胞內(nèi)主要蛋白水平定性分析，該方法獲取的視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞中三種蛋白的含量明顯高于其它兩種方法；β-Actin在視網(wǎng)膜內(nèi)普遍存在的蛋白作為陽(yáng)性對(duì)照組，三種視網(wǎng)膜神經(jīng)層取出方法對(duì)比該蛋白無(wú)明顯差異。該實(shí)驗(yàn)直觀的顯示，快速取出視網(wǎng)膜神經(jīng)層細(xì)胞，可正確的反應(yīng)視網(wǎng)膜神經(jīng)層內(nèi)各種相關(guān)蛋白的含量。圖3.視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞總RNA水平定量檢測(cè):每只小鼠一對(duì)視網(wǎng)膜的總RNA水平定量顯示，本專利方法為98% ，酶消化法為40%，顯微解剖法為35%。實(shí)施例2:是對(duì)人遺體捐獻(xiàn)眼球進(jìn)行的一種視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞層體外分離制備的方法，與實(shí)施例1相同的步驟不再重述，不同之處在于:切開(kāi)眼球壁步驟中，在解剖顯微鏡下，用視網(wǎng)膜取出器一端的刀片在人體捐獻(xiàn)眼球上沿角鞏膜緣后4mm切開(kāi)全層的眼球壁360度。清除眼內(nèi)容物步驟中，先用視網(wǎng)膜取出勺沿眼球壁切口水平進(jìn)入將晶狀體托出，然后沿球壁的弧形進(jìn)入將玻璃體輕輕托出。用虹膜恢復(fù)器分離眼球切口全周的內(nèi)層時(shí)，一般分離深度為5mm左右。
權(quán)利要求
1.一種視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞層體外分離制備的方法，包括如下步驟: A.提供實(shí)驗(yàn)動(dòng)物眼球或遺體捐獻(xiàn)眼球； B.清潔步驟A中所述眼球； C.將步驟B中所述眼球固定在眼球固定器上； D.提供視網(wǎng)膜取出器，所提供的視網(wǎng)膜取出器，包括手柄，所述手柄一端設(shè)有視網(wǎng)膜取出勺，另一端設(shè)有刀片，所述視網(wǎng)膜取出勺所在平面與手柄水平軸線呈傾斜夾角，所述刀片的前端設(shè)有刀尖； E.在解剖顯微鏡下，用步驟D中所述視網(wǎng)膜取出器的刀片沿角鞏膜緣或平坦部切開(kāi)眼球全周的眼球壁全層，形成一個(gè)眼杯； F.用步驟D中所述視網(wǎng)膜取出勺進(jìn)入眼杯，把晶狀體和玻璃體取出； G.沿眼球壁的切口全周分離眼球壁的內(nèi)層，再用步驟D中所述視網(wǎng)膜取出勺沿眼球壁的弧度進(jìn)入視網(wǎng)膜下腔，取出完整的視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞層。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞層體外分離制備的方法，其特征在于:還包括將步驟G取出的視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞層放在預(yù)冷的離心管中。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞層體外分離制備的方法，其特征在于:所述步驟B中離體眼球清潔包括下列步驟，先用預(yù)冷的PH7.4的磷酸鹽緩沖液充分沖洗眼球，再根據(jù)眼球來(lái)源，評(píng)估是否有細(xì)菌污染或感染，選擇相應(yīng)濃度的抗生素加入預(yù)冷的生理鹽水內(nèi)沖洗眼球，將沖洗過(guò)的眼球放在裝有冰塊的眼球固定器上，最后去除眼球表面的所有血樣附著物和其他附屬的組織，保留四條直肌。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞層體外分離制備的方法，其特征在于:所述預(yù)冷，是把裝有PH7.4的磷酸鹽緩沖液和生理鹽水的瓶子事先埋在冰里，使PH7.4的磷酸鹽緩沖液和生理鹽水的溫度保持在O度左右，清潔的步驟在溫度處于0-4度的環(huán)境下進(jìn)行。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞層體外分離制備的方法，其特征在于:將所述的四條直肌固定在與眼球大小相應(yīng)的裝有冰塊的眼球固定器上。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞層體外分離制備的方法，其特征在于:所述步驟E中，沿眼角鞏膜緣后1-4_切開(kāi)眼球壁全層，切開(kāi)眼球壁的深度為0.6-1.5mm,眼球壁全層切口圓周度數(shù)為360度。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞層體外分離制備的方法，其特征在于:切開(kāi)眼球壁全層之前，預(yù)先用標(biāo)記筆畫(huà)出所要切開(kāi)的部位，以免錯(cuò)位。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞層體外分離制備的方法，其特征在于:所述步驟G中的分離，用一把無(wú)齒鑷夾住眼球壁呈灰白色的內(nèi)層邊緣，用虹膜恢復(fù)器的前端沿眼球壁切口的全周給予分離，分離深度為2-5mm。
全文摘要
本發(fā)明提供一種視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞層體外分離制備的方法，包括如下步驟提供實(shí)驗(yàn)動(dòng)物眼球或遺體捐獻(xiàn)眼球；清潔眼球；固定眼球；提供視網(wǎng)膜取出器；用視網(wǎng)膜取出器的刀片沿角鞏膜緣或平坦部切開(kāi)眼球全周的眼球壁全層，形成一個(gè)眼杯；視網(wǎng)膜取出勺進(jìn)入眼杯，把晶狀體和玻璃體取出；沿眼球壁的切口全周分離眼球壁的內(nèi)層邊緣，再用視網(wǎng)膜取出勺沿眼球壁的弧度進(jìn)入視網(wǎng)膜下腔，取出完整的視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞層。本發(fā)明能夠?qū)崿F(xiàn)快速取出視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞層，保存了視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞的活性，提高了效率，能正確反應(yīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
文檔編號(hào)G01N1/04GK103234774SQ201310162180
公開(kāi)日2013年8月7日 申請(qǐng)日期2013年5月6日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月6日
發(fā)明者彭廣華 申請(qǐng)人:鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院