專利名稱：：抗Lp(a)抗體制備及檢測Lp(a)的診斷試劑盒的制作方法抗Lp(a)抗體制備及檢測Lp(a)的診斷試劑盒
技術領域：
J本發(fā)明涉及抗血清Lp(a)抗體的制備方法，以及用該抗體制成的用于臨床Juk清Lp(a討全測的體外診斷試劑盒，本發(fā)明屬于檢驗醫(yī)學M物
技術領域：
。
背景技術：
：脂蛋白(a)即LP(a)是一種類似低密度脂蛋白(LDL)的脂質，一種特殊獨立的血漿脂蛋白，主要在肝臟合成后分泌入血，其含量的變化在血栓性疾病，腎臟疾病，糖尿病等疾病中具有非常重要的臨床意義。Lp(a)是1963年挪威遺傳學家Berg在研究低密度脂蛋白的遺傳學變異時發(fā)現(xiàn)的。人群中Lp(a)的濃度個體差異極大，濃度范圍可在0~1000mg/L，這種差異最主要由apo(a)基因位點決定(《血清脂蛋白a(Lp(a))的生物學特性及臨床應用分析》，齊魯醫(yī)學檢驗，2004年第15巻第4期。)。Lp(a)是一種富含膽固醇的脂蛋白，核心部分為中性脂質和apoB-100分子，其外圍包繞著親水性的apo(a),二者以二硫鍵共價連接；其中apo(a)是Lp(a)的特征性糖蛋白成分，主要由一種被稱為Kringle的,形狀頗似丹麥蛋糕的結構組成。Kringle有多種，分別命名為K1、K2、K3、K4和K5。Lp(a)只含一個K5，K5的一端連接有37個K4,第36個K4中含有一個額外未配對的半胱氨酸，推測此處可能是apo(a)以二辟"建與apoB100結合的部位。Lp(a)中的K4有75%~85%的氨基酸與纖維蛋白溶酶原(PG)Kringle4的氨基酸殘基相同，有共同的抗原簇，表現(xiàn)兩者有交叉免疫反應(《脂蛋白(a)的研究近況一分子生物學與疾病的相關性》，國外醫(yī)學遺傳學分冊1999年第22巻第2期)。對脂蛋白(a)含量的臨床意義，早期檢測Lp(a)多用電泳法，但此法靈敏度低，多用于定性檢測。隨后相繼研制開發(fā)出一些直接測定Lp(a)的免疫化學檢測法，如輻射狀免疫擴散法(RID)、電免疫擴散法(EID)、放射免疫測定法(RIA)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、免疫濁度法[包括免疫散射比濁法(INA)和免疫透射比濁法(ITA)]、解離增強配體熒光免疫測定法(DELFIA)等。RID法與EID法因操作簡便，不需特殊設備，仍有一些基層單位實驗室采用，但缺點是靈敏度低。RIA法的缺點是操作復雜，有放射性核素污染。DELFIA法因需特殊儀器，國內也較少應用。各種方法測定Lp(a)所得參考值相近，目前國內外所采用的判斷標準基本相同。一般認為300mg/L為臨界水平，大于300mg/L以上為病理水平。目前主要釆用的方法主要是酶聯(lián)免疫吸附測定法和免疫透射比濁法(《脂蛋白(a)的測定方法與臨床意義》，檢驗醫(yī)學信息網。)酶聯(lián)免疫吸附測定法不受Plg干擾，該法是根據(jù)Lp(a)含有apo(a)、apoB兩種抗原位點而設計，其相關性好，但是操作繁瑣，無法用于自動化分析儀器，易受外界污染等。免疫透射比濁法測定Lp(a)含量時，由于Plg與試劑中的抗體發(fā)生交叉免疫反應，從而對Lp(a)含量測定產生干擾，這也是該方法測定Lp(a)含量時的主要干擾因素。另外，由于Lp(a)與Plg具有高度同源性，致使Lp(a)抗體與Plg發(fā)生免疫交叉反應，進而干擾測定結果。這也是目前最主要的干擾因素，Lp(a)蛋白質分子顆粒大小的多態(tài)性和結構的復雜性，以致測定的結果受血清中apo(a)分子大小及抗體特性的影響，致使室間差很大。同時，檢測Lp(a)所需抗體的制備及抗原提取的方法直接關系到抗體質量的高低。已知的方法是采用倍比稀釋的密度梯度超離心技術收集到電泳級別的抗原，再進行動物免疫實驗。上述方法的缺點是超離心所用時間長，而且在提取過程中目標抗原蛋白容易變性而改變了目標抗原的免疫原性，得到的抗體血清自然效價^l低。另外，采用該種方法得到的抗體容易與纖維溶酶原蛋白發(fā)生交叉免疫反應。
發(fā)明內容本發(fā)明的目的在于為了克服上述
背景技術：
中所提及目前檢測Lp(a)5方法的不足，提供一種具有準確性高、重復性好、抗干擾能力強、基質穩(wěn)定、適用于可見光/紫外半、全自動生化分析儀等特點的用于檢測Lp(a)的試劑盒。[技術方案〗由健康人群中的多人份的混合血清中提取出Lp(a)與佐劑混合后制備成免疫用的Lp(a)免疫抗原，多次接種對Lp(a)抗原敏感但又不易產生免疫耐受的健康動物，獲得的含抗Lp(a)抗體的高免血清；利用該高免血清配制成含抗Lp(a)抗體的檢測試劑及Lp(a)標準液；本發(fā)明描述的Lp(a)4企測雙試劑盒，配合具有340nm波長、lcm光徑、37。C恒溫裝置的自動生化分析儀進行人血樣品脂蛋白(a)的檢測。本發(fā)明的具體實施方式抗Lp(a)抗體制備的基本操作的如下1.抗原的制備(1)將300ml混合血清(從健康人群不同個體獲得的血清的混合)與400ml的脂肪族表面活性劑(如:異丙基苯磺酸銨，羊毛脂等)在攪拌器中混勻，使其形成表面活性劑-血清復合物。(2)將38%的磷鴿酸-鎂200ml在攪拌器上慢慢加入到以上表面活性劑-血清復合物中，脂蛋白沉淀后用生理鹽水洗滌。(3)將洗滌后的脂蛋白沉淀物加入到預冷的無水乙醇/無水乙醚(3:2)混合液中，不斷攪拌，12小時過夜后，在4。C離心，棄上清，將收集的沉淀物后重復一次該^操作。(4)將上述脫脂后的沉淀物用已知的SDS-PAGE凝膠電泳，將Lp(a)凝膠帶收集，搗碎，析出Lp(a),真空干燥后，于-20。C保存。(5)免疫抗原的制備將提取的真空干燥的Lp(a)抗原按(W/V)用生理鹽水稀釋成液體抗原(濃度為100mg/ml)，再分別經FCA(弗氏完全佐劑)或FIA(弗氏不完全佐劑)等比例混合，置于混合器上使之劇烈振蕩1Omin使抗原充分乳化，獲得FCA免疫抗原和FIA免疫抗原。2.抗體的制備用免疫抗原接種本發(fā)明中抗體制備過程為(1)動物本發(fā)明中的實驗免疫動物的選擇可以是只要對Lp(a)抗原敏感但又不易產生免疫耐受的健康兔子，羊、牛中任一種動物制備含抗Lp(a)抗體的高免血清。本發(fā)明中優(yōu)先選擇的是同一直系兔做為免疫對象。(2)動物免疫待免疫的用兔移入接種動物舍，大概需要四天適應期，在免疫接種抗原前釆取兔血，提取血清制備成用于抗體檢測時作為陰性對照血清。免疫方法可采用背部多點皮下注射法，劑量0.40.6ml/只，每點注O.lml,每間隔2周后再于上述部位選不同點注射(不要選擇臨近位點，否則潰瘍愈合不好)。在免疫3~4次后可以獲得較高效價的抗體，為此第3次免疫后一周進行檢測抗體效價的試血，用單向免疫擴散法測定抗體效價(《實用臨床免疫學檢驗》，江蘇科技出版社。)如抗體效價符合要求(抗人脂蛋白(a)抗體效價在1:32~1:64)，可于最后一次注射后一周放血。用羊、牛制備高免血清免疫方法和程序相同，但免疫劑量應按體重增加，即按每千克體重0.20.3ml計，每點注射0.5~l.Oml。(3)抗體的提取將上述頸動脈血置于2530。C條件下24小時，3000r/min離心30min，棄沉淀，獲得含Lp(a)抗體的血清?？蓪p(a)抗體的血清中加入非還原型糖，丙三醇，乙二胺四乙酸二納鹽中的一種來保持抗體的效價穩(wěn)定，同時可以用疊氮鈉，乙基汞硫代硫酸鈉等中的一種作為防腐。3.檢測人血清中Lp(a)含量試劑盒的制備測定人血清中Lp(a)含量的試劑盒的原理是在緩沖體系中，樣品血清中的Lp(a)與抗Lp(a)抗體發(fā)生免疫反應，生成的免疫復合物使光透射強度或散射強度發(fā)生變化；用Lp(a)校準品的濃度和與之相應的光透射強度或散射強度的標準曲線查出待檢測樣品中Lp(a)的含量。由于本發(fā)明涉及的試劑盒用的是免疫透射比濁的檢測方法，其顯著的特色就是選擇脂蛋白(a)與纖維蛋白溶酶原無同源的抗體結合位點，通過抗原決定簇掩蔽的方法消除了內源性同源蛋白(Pig)的干護"同時利用《連激酶-聚氧乙烯烷基芳醚溶液消除屏蔽，進一步減少Plg和其他雜蛋白的干擾。用于血清中Lp(a)含量的檢測試劑盒，它由反應劑(試劑1),抗體試劑(試劑2)和標準液組成。本試劑盒應用時必需配合具有340nm波長、lcm光徑、37。C恒溫裝置的自動生化分析儀進行人血清樣品脂蛋白(a)的檢測。(1)反應劑(試劑1)，其組成為Tris緩沖液(pH=7.2)250~350ml氯化鈉5~8g聚乙烯二醇800050~70g對羥基苯曱酸酯4~6g鏈激酶-聚氧乙烯烷基芳醚溶液*80~120ml小牛血清白蛋白60~80g其余為純化水補足到1000ml*:鏈激酶-聚氧乙烯烷基芳醚溶液是將IOOOU鏈激酶溶解于100ml聚氧乙烯烷基芳醚，制成溶液，其中鏈激酶可以用尿激酶替代，聚氧乙烯烷基芳醚可以用聚苯乙烯苯醚或聚氧乙烯烷基醚替代。本發(fā)明選取Tris緩沖液，緩沖液還可選擇磷酸緩沖液、Tris緩沖液、PIPES緩沖液、HEPES緩沖液、TAPS緩沖液、甘氨酸緩沖液、硼酸緩沖液等替代，pH值為7.0~10.0。本試劑盒的加速劑采用聚乙二醇8000,但也可以選用分子量1000~20000中其他的聚乙二醇。本試劑盒的防腐劑釆用對羥基苯曱酸酯。但也可以采用疊氮鈉、乙基汞碌d^碌u酸鈉。以上處方中的小牛血清白蛋白也可以選用EDTA-Na、氯化鎂、牛血清白蛋白、乙二醇、甘露醇等替代。本試劑選用非離子表面活性劑吐溫系列、聚氧乙烯醚類。表面活性劑還可以選用陰離子表面活性劑、兩性表面活性劑。(2)抗體試劑(試劑2)，其組成為兔抗人Lp(a)抗體的血清稀釋液1000ml兔抗人Lp(a)抗體的血清(抗體效價1:32-1:64)1000ml柳氮磺胺吡啶-丙二醇溶液*150ml*:柳氮磺胺吡啶-丙二醇溶液將柳氮磺胺吡啶80g溶于50~150ml丙二醇中配成。配方中的柳氮磺胺吡咬，可以采用丁基羥基茴香醚、辟b代二丙酸二月桂酯、二丁基羥基曱苯、苯多酚、甘草抗氧化物、磷脂等。其中兔抗人Lp(a)抗體的血清稀釋液Tris緩沖液(pH=7.2)聚乙烯二醇8000對羥基苯曱酸酯小牛血清白蛋白純化水加到(3)標準液校準液是決定試劑準確度的重要因素之一。Lp(a)在液體狀態(tài)下，在體外過度金屬離子氧化、化學修飾、細胞氧化，均可引起Lp(a)發(fā)生氧化修飾，使標準液的值在短時間內發(fā)生很大的下降，所以用柳氮磺胺吡啶-丙二醇溶液來減緩其氧化速度。而目前大多數(shù)的氧化劑都根據(jù)其氧化劑自身的強還原性，從而阻止其標準液中的Lp(a)被氧化，因此抗氧化劑化效果隨著時間的推移而下降。有研究發(fā)現(xiàn)，具有抗氧化作用物質在被還原的同時，會產生一定量的自由基。為了提高標準液在液態(tài)狀態(tài)下的穩(wěn)定性，我們在其中加入了適量的檸檬酸，增加柳氮磺胺吡啶-丙二醇溶液的穩(wěn)定性，從而本發(fā)200~250ml30~50g2~6g50~70g函Oml明制備的Lp(a)標準液，在28。C一年內保持幾乎不變。本發(fā)明的Lp(a)標準液的定值為10.0g/L,因此標準液制備時，加入純度為90%(高壓液相色譜法測定)、效價在1:16-1:32(單向免疫擴散法測定)的純化Lp(a)抗原10.0g/L。其標準液的主要組成包括pH6~8Tris緩沖液200mlLp(a)抗原(抗體效價1:16~1:32)10g柳氮磺胺吡啶-丙二醇溶液*90~150ml山梨酸鹽0.1~0.5g小牛血清白蛋白40~60g過氧乙酸納4~7g檸檬酸4~7g純化水加到1000ml*:柳氮磺胺吡啶-丙二醇溶液將柳氮磺胺吡啶60g溶于150ml丙二醇中配成。本標準液選取Tris緩沖液。也可采用PBS、TAPS、HEPPS、CHES、甘氨酸、雙甘氨肽等替代。其中柳氮磺胺吡啶可以用丁基羥基茴香醚、硫代二丙酸二月桂酯、二丁基羥基甲苯、甘草抗氧化物等替代。小牛血清白蛋白可以穩(wěn)定標準液中的抗原，防止抗原蛋白氧化，變性等引發(fā)的活性降低。4.檢測人血清中Lp(a)含量試劑盒的使用(1)檢測儀器本發(fā)明涉及的Lp(a)檢測雙試劑盒，必需配合具有340nm波長、1cm光徑、37。C恒溫裝置的自動生化分析儀進行檢測。(2)>險測樣品的準備樣品為新鮮血清，血清中LP(a)室溫保存可穩(wěn)定1天，28。C可穩(wěn)定7天，冰凍可穩(wěn)定3個月。(3)操作步驟如下1)在全自動生化分析儀上設定溫度37。C,反應時間10min,主波長10340nm,副波長800nm。測定試劑和樣品的體積比為20:1，將最終反應物置于生化分析儀下，檢測在主波長340nm吸光度的變化。2)加樣及記錄結果表i樣品檢測操作術式<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>混勻，37。C預溫5min，在主波長340nm/輔助波長800nm下讀取各管吸光度值A1。R20.100.100.10混勻，37。C預溫5min，在主波長340nm/輔助波長800nm下讀取各管吸光度值A2，AA-A2-A1。結果計算樣品管Lp(a)的含量(mg/L)—示準液濃度XAA/AA(標準管)。正常人群參考值為0300mg/L。(4)試劑盒檢驗結果驗證特異性通過采用本發(fā)明的試劑盒分別檢測含Lp(a)和已除去Lp(a)的人血清，根據(jù)檢測結果顯示，含Lp(a)的人血清的檢出率為99%,不含Lp(a)的人血清的檢出率2%,但檢測出的含量卻很低。準確性取710mg/L的Lp(a)定值標準血清，采用同批次的本試劑盒在外部條件相同的條件下，用自動生化分析儀測定，測定結果如下表2:表2準確性測定結果表<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>準確度為-0.029%重復性測定數(shù)據(jù)如下表3:表3重復性測定數(shù)據(jù)結果表<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>本試劑盒的精密度的批內差為CV《8°/。。批間差為CV《10%。準確度的相對偏差控制在士10%的范圍內。線性范圍控制在01000mg/L。本發(fā)明的積極意義在于本發(fā)明所述的抗體制備是提取健康人群血清中的脂蛋白(a)(Lp(a))制備成抗原后，用其多次免疫敏感動物，獲得的高免血清中含有與人血清中Lp(a)抗原有高度特異反應性的抗體，制備過程中應具有無須超速離心處理，制備時間短、抗體的效價高的特點；用該抗體所配制的檢測試劑盒配合可見光/紫外半、全自動生化分析儀測定人血清中的脂蛋白(a)具有準確性高、重復性好、抗干擾能力強、基質穩(wěn)定、線性范圍寬等優(yōu)點。本發(fā)明中所使用的各種試劑和藥品均購置于國內試劑公司和藥品商店的分析純或化學純級。以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的保護范圍。實施例l抗原的制備取300ml混合血清(從健康人群不同個體獲得的血清的混合)與400ml的脂肪族表面活性劑(羊毛脂)在攪拌器中混勻，再慢慢加入38%的磷鵠酸-鎂200ml，待形成脂蛋白沉淀后用生理鹽水對其進行洗滌；將洗滌后的脂蛋白沉淀物加入到預冷的無水乙醇/無水乙醚(3:2)混合液中，不斷攪拌，12小時過夜后，在4。C離心，棄上清，將收集的沉淀物后重復一次該操作；將上述脫脂后的沉淀物用已知的SDS-PAGE凝膠電泳，將Lp(a)凝膠帶收集，搗碎，析出Lp(a),真空千燥成Lp(a)凍干制品，保存于-20°C。將提取的真空干燥的Lp(a)凍干制品按(W/V)用生理鹽水稀釋成液體抗原(濃度為100mg/ml),再分別經FCA(弗氏完全佐劑)或FIA(弗氏不完全佐劑)等比例混合，置于混合器上使之劇烈振蕩10min使抗原充分乳化，獲得FCA免疫抗原乳劑和FIA免疫抗原乳劑。實施例2抗體的制備選取20只健康家兔作為免疫動物移入兔房后，經過4天的適應期，在免疫接種抗原乳劑前采取兔血，提取血清制備成用于抗體檢測時作為陰性對照。第一次免疫接種采用FCA免疫抗原乳劑，免疫方法可采用背部多點皮下注射法，劑量0.40.6ml/只，每點注O.lml，從第二次免疫接種起改用FIA免疫抗原乳劑。每間隔2周后再于上述部位選不同點注射。第3次免疫后一周進行檢測抗體效價的試血，用單向免疫擴散法測定抗體效價，如抗體效價達到1:32以上，可于第4次注射后一周頸動脈放血并提取血清，即為含Lp(a)抗體的血清。實施例3可用健康的綿羊、牛和馬等，只要對抗原敏感但又不易產生免疫耐受的動物取代實施例中的家兔制備含Lp(a)抗體的血清。實施例4檢測Lp(a)的診斷試劑盒各組分中相關溶液的配制1.鏈激酶-聚氧乙烯烷基芳醚溶液IOOOU鏈激酶溶解于100ml聚氧乙烯烷基芳醚，制成溶液。2.柳氮磺胺吡啶-丙二醇溶液柳氮磺胺吡啶80g溶于150ml丙二醇中配成。3.兔抗人Lp(a)抗體的血清稀釋液pH7.2Tris緩沖液200ml聚乙烯二醇800050g13對羥基苯曱酸酯4g小牛血清白蛋白60g純化水加至1000ml實施例5實施例4中鏈激酶-聚氧乙烯烷基芳醚溶液的配方中可以選聚苯乙烯苯醚，聚氧乙烯烷基醚取代聚氧乙烯烷基芳醚；選用尿激酶替代鏈激酶。實施例6實施例4柳氮石黃胺吡啶-丙二醇溶液配方中的柳氮石黃胺吡啶，可以采用丁基羥基茴香醚、硫代二丙酸二月桂酯、二丁基羥基曱苯、苯多酚、甘草抗氧化物、磷脂等替代。實施例7檢測Lp(a)的診斷試劑盒各組分的配制l.試劑I:pH-7.2Tris緩沖液氯化鈉聚乙烯二醇8000對羥基苯曱酸酯鏈激酶-聚氧乙烯烷基芳醚溶液小牛血清白蛋白純化水加至250ml5g50g4g80ml60g1000ml兔抗人Lp(a)抗體的血清稀釋液兔抗人Lp(a)抗體的血清(抗體效價1:32柳氮磺胺吡啶-丙二醇溶液3.標準液pH7.2Tris緩沖液Lp(a)抗原(抗體效價1:16~1:32)1000ml64)1000ml150ml200ml10g柳氮磺胺吡咬-丙二醇溶液90ml山梨酸鹽0.3g小牛血清白蛋白40g過氧乙酸納4g檸檬酸4g純化水加至1000ml實施例8:檢測Lp(a)的診斷試劑盒各組分的配制l.試劑I:pH=7.2Tris緩沖液300ml氯化鈉7g聚乙烯二醇800060g對羥基苯曱酸酯6g尿激酶-聚氧乙烯烷基芳醚溶液90ml小牛血清白蛋白60g純化水加至1000ml2.試劑II:兔抗人Lp(a)抗體的血清稀釋液1000ml兔抗人Lp(a)抗體的血清(抗體效價1:32~1:64)1000ml柳氮磺胺吡咬-丙二醇溶液150ml3.標準液HEPPS緩沖液200mlLp(a)抗原(抗體效價1:16~1:32)10g丁基羥基茴香醚-丙二醇溶液90ml疊氮鈉0.5g小牛血清白蛋白45g過氧乙酸納7g15檸檬酸6g純化水加至1000ml實施例9:檢測Lp(a)的診斷試劑盒各組分的配制1.試劑I:磷酸緩沖液250ml氯化鈉7g聚乙烯二醇800070g疊氮鈉6g尿激酶-聚苯乙烯苯醚溶液100ml小牛血清白蛋白70g純化水加至1000ml2.試劑II:兔抗人Lp(a)抗體的血清稀釋液兔抗人Lp(a)抗體的血清(抗體效價1:32~1:64)柳氮磺胺p比咬-丙二醇溶液3.標準液PBS緩沖液200mlLp(a)抗原(抗體效價1:16~1:32)柳氮磺胺吡啶-丙二醇溶液100ml疊氮鈉0.3g小牛血清白蛋白50g過氧乙酸納5g檸檬酸5g純化水加到1000ml實施例10l,試劑I1000ml腦Oml150ml10gTris緩沖液(pH=7.2)300ml氯化鈉8g聚乙烯二醇800070g對羥基苯曱酸酯6g鏈激酶-聚氧乙烯烷基芳醚溶液120ml小牛血清白蛋白80g純化水補足到1000ml.試劑II:兔抗人Lp(a)抗體的血清稀釋液兔抗人Lp(a)抗體的血清(抗體效價1:32~1:64)杉卩氮磺胺吡啶-丙二醇溶液(3)標準液PBS緩沖液200mlLp(a)抗原(抗體效價1:16~1:32)10g柳氮磺胺吡啶-丙二醇溶液150ml山梨酸鹽0.5g小牛血清白蛋白60g過氧乙酸納7g檸檬酸7g純化水加到1000ml.1000ml1000ml150ml權利要求1.一種抗Lp(a)抗體的制備方法，其特征在于1)由多人份的混合血清中提取出Lp(a)與佐劑混合后制備成免疫用的Lp(a)免疫抗原；2)用免疫抗原多次接種對Lp(a)抗原敏感但又不易產生免疫耐受的健康動物，獲得的含抗Lp(a)抗體的高免血清。2.—種檢測Lp(a)的診斷試劑盒，其特征在于該試劑盒含有反應劑、由權利要求1制備的含抗Lp(a)抗體的高免血清配制成抗體試劑及由權利要求1由多人份的混合血清中提取出Lp(a)配制的標準液。3.如權利要求2所述的一種檢測Lp(a)的診斷試劑盒，其特征在于反應劑是由以下成分所配制pH=7.2Tris緩沖液250~350ml,氯化鈉5~8g，聚乙烯二醇800050~70g，對羥基苯甲酸酯4~6g，鏈激酶-聚氧乙烯烷基芳醚溶液80~120ml，小牛血清白蛋白60~80g,純化水補足到1000ml。4.如權利要求2,3所述的一種檢測Lp(a)的診斷試劑盒，其特征在于其中的鏈激酶-聚氧乙烯烷基芳醚溶液是由以下成分所配制1000U鏈激酶溶解于100ml聚氧乙烯烷基芳醚，制成溶液。5.如權利要求2所述的一種檢測Lp(a)的診斷試劑盒，其特征在于抗體試劑是由以下成分所配制兔抗人Lp(a)抗體的血清稀釋液1000ml,兔抗人Lp(a)抗體的血清(抗體效價1:32~1:64)lOOOml，柳氮磺胺吡咬-丙二醇溶液150ml。6.如權利要求2，5所述的一種檢測Lp(a)的診斷試劑盒，其特征在于其中的柳氮磺胺吡啶-丙二醇溶液是由以下成分所配制柳氮磺胺吡咬80g溶于150ml丙二醇中配成。7.如權利要求2所述的一種檢測Lp(a)的診斷試劑盒，其特征在于標準液是由以下成分所配制pH6~8的Tris緩沖液200ml，效價為1:16~1:32的Lp(a)抗原lOg,柳氮磺胺吡啶-丙二醇溶液90150ml，疊氮鈉0.5g,小牛血清白蛋白4060g,過氧乙酸納47g，檸檬酸4~7g,純凈水加至lOOOml。8.—種檢測Lp(a)的診斷試劑盒的應用，其特征在于權利要求2所述的一種檢測Lp(a)的診斷試劑盒配合具有340nm波長、lcm光徑、37。C恒溫裝置的自動生化分析儀進行人血樣品脂蛋白(a)的檢測。全文摘要本發(fā)明涉及一種抗Lp(a)抗體制備及檢測Lp(a)的診斷試劑盒。本發(fā)明所述的抗體制備是提取健康人群血清中的脂蛋白(a)(Lp(a))制備成抗原后，用其多次免疫敏感動物，獲得的高免血清中含有與人血清中Lp(a)抗原有高度特異反應性的抗體，制備過程中應具有無須超速離心處理，制備時間短、抗體的效價高的特點；用該抗體所配制的檢測試劑盒配合可見光/紫外半、全自動生化分析儀測定人血清中的脂蛋白(a)具有準確性高、重復性好、抗干擾能力強、基質穩(wěn)定、線性范圍寬等優(yōu)點。文檔編號G01N33/53GK101451993SQ20091000073公開日2009年6月10日申請日期2009年1月9日優(yōu)先權日2009年1月9日發(fā)明者王賢俊申請人:王賢俊
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