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一種含麗春紅的蛋白質(zhì)芯片點(diǎn)樣緩沖液及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，公開了一種含麗春紅的蛋白質(zhì)芯片點(diǎn)樣緩沖液，由麗春紅、Na2CO3、NaHCO3、甘油和去離子水組成，所述的甘油和去離子水的體積比為3:1～1:20，在所述的點(diǎn)樣緩沖液中，所述的Na2CO3的質(zhì)量百分比濃度為0.05％～1％，所述的NaHCO3的質(zhì)量百分比濃度為0.05％～2％，所述的麗春紅的質(zhì)量百分比濃度為0.01％～50％。本發(fā)明將麗春紅染色劑直接加入到蛋白質(zhì)芯片的點(diǎn)樣緩沖液中，使得該緩沖液呈現(xiàn)紅色，并用該緩沖液稀釋待點(diǎn)樣物質(zhì)，于基片上點(diǎn)樣，使得蛋白質(zhì)芯片上的樣點(diǎn)在芯片使用前即可通過圖像軟件或目視觀察分析，對蛋白質(zhì)芯片上樣點(diǎn)的圓潤及均勻程度起到一個(gè)預(yù)判的作用。
【專利說明】一種含麗春紅的蛋白質(zhì)芯片點(diǎn)樣緩沖液及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】:
[0001]本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種蛋白質(zhì)芯片點(diǎn)樣緩沖液，具體來說是一種含麗春紅的蛋白質(zhì)芯片點(diǎn)樣緩沖液及其制備方法。
【背景技術(shù)】:
[0002]生物芯片技術(shù)是上世紀(jì)90年代初發(fā)展起來的一種高通量、大規(guī)模并行分析檢測技術(shù)，曾被Science雜志兩度評為年度十大科技突破之一，它是利用分子間特異相互作用的原理，將多種技術(shù)(如生物化學(xué)、微加工、微電子、計(jì)算機(jī)等)融為一體的一項(xiàng)分析檢測技術(shù)。與傳統(tǒng)分析檢測方法所不同的是，它形成的微陣列使生化分析反應(yīng)過程高度集成于某一載體之上，高通量地分析檢測成百上千種DNA、RNA、多肽、蛋白質(zhì)等分子。目前常見的生物芯片有:基因芯片、蛋白質(zhì)芯片、糖芯片以及其他小分子生物芯片。
[0003]在基因組學(xué)的研究背景下，為了滿足人類對數(shù)以萬計(jì)基因功能的大規(guī)模研究，基因芯片應(yīng)運(yùn)而生?；蛐酒且罁?jù)堿基互補(bǔ)配對原則，將大量已知序列的核酸探針高密度有序固定于某一載體表面，從而對待檢樣品中大量核酸成分進(jìn)行分析檢測的技術(shù)，其高通量、快速、簡便等優(yōu)點(diǎn)滿足了人們對基因的大規(guī)模分析檢測的需求。目前，基因芯片主要應(yīng)用于基因表達(dá)檢測、雜交測序、疾病預(yù)測和診斷等領(lǐng)域。但是，基因水平上的研究只能初步了解基因表達(dá)產(chǎn)物的變化，而作為直接影響生命活動變化的蛋白質(zhì)則需要經(jīng)過轉(zhuǎn)錄、翻譯、加工等多個(gè)調(diào)控步驟才能形成，所以對其功能和結(jié)構(gòu)的研究將具有重大的科學(xué)意義。隨著蛋白組學(xué)研究的興起，如同起初對基因組學(xué)的研究一樣，在利用傳統(tǒng)方法對蛋白質(zhì)組功能進(jìn)行分析研究時(shí)，同樣遇到了現(xiàn)有技術(shù)耗時(shí)、繁瑣、通量低等一系列問題。在彌補(bǔ)這些研究方法缺陷時(shí)，人們自然而然地模仿了基因芯片的原理，從而研制出了蛋白質(zhì)芯片。
[0004]蛋白質(zhì)芯片是將各種蛋白質(zhì)(如抗原、抗體)、多肽以及受體、配體等有序固定于某一載體(如濾膜、凝膠、玻片、納米微珠和微孔板)之上，以分析檢測樣品中能與之特異相互作用的成分。雖然蛋白質(zhì)芯片是在蛋白質(zhì)組學(xué)的研究背景下產(chǎn)生的，但其應(yīng)用不僅僅只局限于蛋白質(zhì)組學(xué)。凡是有關(guān)抗體一抗原、蛋白質(zhì)一蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)一核酸、蛋白質(zhì)一脂類、蛋白質(zhì)一小分子以及酶與底物相互作用的研究中，蛋白質(zhì)芯片技術(shù)均有其獨(dú)特的用途。目前主要應(yīng)用于蛋白質(zhì)組學(xué)、食品檢驗(yàn)、疾病診斷、藥物篩選、農(nóng)林畜牧業(yè)、司法鑒定等領(lǐng)域。
[0005]雖然，蛋白質(zhì)芯片經(jīng)過20多年的發(fā)展，但目前所遇到的問題及技術(shù)難點(diǎn)仍較多，其中一難點(diǎn)即是，批量化生產(chǎn)固相蛋白質(zhì)芯片中樣點(diǎn)的質(zhì)量控制問題。因當(dāng)前在蛋白質(zhì)芯片的實(shí)際應(yīng)用中，所使用的點(diǎn)樣緩沖液多為無色的碳酸鹽或磷酸鹽緩沖液，使得芯片在點(diǎn)樣后樣點(diǎn)仍成無色狀態(tài)，導(dǎo)致芯片在使用前無法對其樣點(diǎn)的形態(tài)進(jìn)行預(yù)判，樣點(diǎn)是否呈現(xiàn)圓潤的狀態(tài)，是否會在檢測顯色后呈現(xiàn)“咖啡環(huán)”現(xiàn)象，從而嚴(yán)重影響定量檢測信號值的讀取，甚至點(diǎn)樣抗體是否已經(jīng)點(diǎn)在基片上，這些都無從知曉，而現(xiàn)今并沒有一種方法可以解決上述批量化生產(chǎn)蛋白質(zhì)芯片的質(zhì)量控制問題。
[0006]麗春紅(Ponceau S)，是煤焦油提煉出來的原料合成的偶氮染料，作為一種生物染色劑使用，可用于硝酸纖維素膜、PVDF膜和醋酸纖維素膜上蛋白的檢測。麗春紅帶負(fù)電荷，可以與帶正電荷的氨基酸殘基結(jié)合，同時(shí)麗春紅也可以與蛋白質(zhì)的非極性區(qū)域相結(jié)合，從而在膜上形成紅色的斑點(diǎn)或條帶。麗春紅對蛋白質(zhì)的染色是可逆的，染色后可以用PBST，蒸餾水或其它適當(dāng)溶液洗去。

【發(fā)明內(nèi)容】
:
[0007]針對上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺陷，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種含麗春紅的蛋白質(zhì)芯片點(diǎn)樣緩沖液，所述的這種含麗春紅的蛋白質(zhì)芯片點(diǎn)樣緩沖液要解決現(xiàn)有技術(shù)中的點(diǎn)樣緩沖液多為無色的碳酸鹽或磷酸鹽緩沖液，使得芯片在點(diǎn)樣后樣點(diǎn)仍成無色狀態(tài)，導(dǎo)致芯片在使用前無法對其樣點(diǎn)的圓潤及均勻程度進(jìn)行預(yù)判，從而無法對蛋白質(zhì)芯片的批量化生產(chǎn)進(jìn)行質(zhì)量控制的技術(shù)問題。
[0008]本發(fā)明提供了一種用于蛋白質(zhì)芯片的點(diǎn)樣緩沖液，由麗春紅、Na2CO3^ NaHCO3、甘油和去離子水組成，所述的甘油和去離子水的體積比為3:1~1:20，在所述的點(diǎn)樣緩沖液中，所述的Na2CO3的質(zhì)量百分比濃度為0.05%~1%，所述的NaHCO3的質(zhì)量百分比濃度為
0.05 %~2 %，所述的麗春紅的質(zhì)量百分比濃度為0.01 %~50 %。
[0009]進(jìn)一步的，所述的點(diǎn)樣緩沖液的pH為7~11。
[0010]進(jìn)一步的，以IL來計(jì)算，在所述的點(diǎn)樣緩沖液中，Na2CO3S 1.59g，NaHCO3為2.93g，麗春紅為IOg,甘油為IOOmL,余量為去離子水。
[0011]進(jìn)一步的，所述的點(diǎn)樣緩沖液的pH為9.6。
[0012]本發(fā)明和已有技術(shù)相比，其技術(shù)進(jìn)步是顯著的，具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果:
[0013](I)本發(fā)明所提供的含麗春紅的蛋白質(zhì)芯片點(diǎn)樣緩沖液，使得蛋白質(zhì)芯片在完成點(diǎn)樣步驟后，即可呈現(xiàn)肉眼可見的紅色，使得蛋白質(zhì)芯片上的樣點(diǎn)在芯片使用前即可通過圖像軟件或目視觀察分析，對蛋白質(zhì)芯片上樣點(diǎn)的圓潤及均勻程度起到一個(gè)預(yù)判的作用，從而對蛋白質(zhì)芯片的批量化生產(chǎn)進(jìn)行質(zhì)量控制；
[0014](2)本發(fā)明所使用麗春紅為常見的生物染色劑，其帶負(fù)電荷，可以與帶正電荷的氨基酸殘基結(jié)合，同時(shí)麗春紅也可以與蛋白質(zhì)的非極性區(qū)域相結(jié)合，從而在基片上形成紅色的斑點(diǎn)或條帶。麗春紅對蛋白質(zhì)的染色是可逆的，染色后可以用PBST，蒸餾水或其它適當(dāng)溶液洗去，并不會對蛋白質(zhì)芯片的檢測顯色效果產(chǎn)生影響；
[0015](3)本發(fā)明提供的點(diǎn)樣緩沖液中所用的甘油，具有使蛋白質(zhì)芯片中樣點(diǎn)的形態(tài)更為圓潤飽滿以及保持一定的持水性；
[0016](4)本發(fā)明提供的點(diǎn)樣緩沖液中所用的Na2C03、NaHC03，具有使該點(diǎn)樣緩沖液pH值維持在一定的范圍之內(nèi)，使得待點(diǎn)樣物質(zhì)能夠更穩(wěn)定地固定于基片之上。
[0017]本發(fā)明和已有技術(shù)相比，其技術(shù)進(jìn)步是顯著的。本發(fā)明將麗春紅染色劑加入到蛋白質(zhì)芯片的點(diǎn)樣緩沖液中，使得該緩沖液呈現(xiàn)紅色，并用該緩沖液稀釋待點(diǎn)樣物質(zhì)，于基片上點(diǎn)樣，使得蛋白質(zhì)芯片上的樣點(diǎn)在芯片使用前即可通過圖像軟件或目視觀察分析，對蛋白質(zhì)芯片上樣點(diǎn)的圓潤及均勻程度起到一個(gè)預(yù)判的作用，從而對蛋白質(zhì)芯片的批量化生產(chǎn)進(jìn)行質(zhì)量控制。
【專利附圖】

【附圖說明】:
[0018] 圖1蛋白質(zhì)芯片點(diǎn)樣后使用如實(shí)物圖。[0019]圖2蛋白質(zhì)芯片檢測顯色后實(shí)物圖。
【具體實(shí)施方式】:
[0020]本發(fā)明提供了一種含麗春紅的蛋白質(zhì)芯片點(diǎn)樣緩沖液，還包括一個(gè)所述點(diǎn)樣緩沖液的制備方法。就當(dāng)前通用技術(shù)而言，在蛋白質(zhì)芯片的點(diǎn)樣環(huán)節(jié)中，所使用的點(diǎn)樣緩沖液均為無色的碳酸鹽或磷酸鹽緩沖液。本發(fā)明采用添加麗春紅的有色點(diǎn)樣緩沖液，使得蛋白質(zhì)芯片在點(diǎn)樣完成后即可使樣點(diǎn)呈現(xiàn)有色狀態(tài)，并在后續(xù)的封閉或雜交過程中，有色的麗春紅即被洗脫至無色，不會影響后續(xù)檢測的顯色效果。下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明并不限于以下實(shí)施例。
[0021]實(shí)施例1
[0022]一種含麗春紅的蛋白質(zhì)芯片點(diǎn)樣緩沖液，其組分為:麗春紅質(zhì)量百分比濃度為10% ；Na2C03質(zhì)量百分比濃度為0.15% ；NaHCO3質(zhì)量百分比濃度為0.3% ;甘油150mL ;去離子水850mL。
[0023]上述一種含麗春紅的蛋白質(zhì)芯片點(diǎn)樣緩沖液的制備方法，具體步驟為:
[0024](I)依次將麗春紅、Na2CO3^ NaHCO3按比例溶解于去離子水中；
[0025](2)將甘油按比例加入上述配制好的溶液中，攪拌均勻，得含麗春紅的蛋白質(zhì)芯片點(diǎn)樣緩沖液。
[0026]采用上述方法所制得蛋白質(zhì)芯片點(diǎn)樣緩沖液的點(diǎn)樣效果如圖1所示，并用該芯片所得的檢測顯色效果如圖2所示。
[0027]實(shí)施例2
[0028]一種含麗春紅的蛋白質(zhì)芯片點(diǎn)樣緩沖液，其組分為:麗春紅質(zhì)量百分比濃度為
0.01% ;Na2C03質(zhì)量百分比濃度為1% ;NaHC03質(zhì)量百分比濃度為2% ;甘油IOmL ;去離子水990mLo
[0029]上述一種含麗春紅的蛋白質(zhì)芯片點(diǎn)樣緩沖液的制備方法，具體步驟為:
[0030](I)依次將麗春紅、Na2CO3^ NaHCO3按比例溶解于去離子水中；
[0031](2)將甘油按比例加入上述配制好的溶液中，攪拌均勻，得含麗春紅的蛋白質(zhì)芯片點(diǎn)樣緩沖液。
[0032]實(shí)施例3
[0033]一種含麗春紅的蛋白質(zhì)芯片點(diǎn)樣緩沖液，其組分為:麗春紅質(zhì)量百分比濃度為50% ;Na2C03質(zhì)量百分比濃度為0.05% ;NaHC03質(zhì)量百分比濃度為0.05% ;甘油500mL ;去離子水500mL。
[0034]上述一種含麗春紅的蛋白質(zhì)芯片點(diǎn)樣緩沖液的制備方法，具體步驟為:
[0035](I)依次將麗春紅、Na2CO3^ NaHCO3按比例溶解于去離子水中；
[0036](2)將甘油按比例加入上述配制好的溶液中，攪拌均勻，得含麗春紅的蛋白質(zhì)芯片點(diǎn)樣緩沖液。
[0037]上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種用于蛋白質(zhì)芯片的點(diǎn)樣緩沖液，其特征在于:由麗春紅、Na2CO3^ NaHCO3、甘油和去離子水組成，所述的甘油和去離子水的體積比為3:1~1:20，在所述的點(diǎn)樣緩沖液中，所述的Na2CO3的質(zhì)量百分比濃度為0.05%~1%，所述的NaHCO3的質(zhì)量百分比濃度為0.05 %~2 %，所述的麗春紅的質(zhì)量百分比濃度為0.01 %~50 %。
2.如權(quán)利要求1所述的一種用于蛋白質(zhì)芯片的點(diǎn)樣緩沖液，其特征在于:所述的點(diǎn)樣緩沖液的pH為7~11。
3.如權(quán)利要求1 所述的一種用于蛋白質(zhì)芯片的點(diǎn)樣緩沖液，其特征在于:以IL來計(jì)算，在所述的點(diǎn)樣緩沖液中，Na2CO3為1.59g, NaHCO3為2.93g，麗春紅為10g，甘油為IOOmL,余量為去尚子水。
【文檔編號】G01N33/68GK103983793SQ201410234527
【公開日】2014年8月13日 申請日期:2014年5月29日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月29日
【發(fā)明者】邱實(shí), 劉菁 申請人:上海理工大學(xué)