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一種海水中氟甲喹手性對(duì)映體的檢測(cè)方法
【專利摘要】一種海水中氟甲喹手性對(duì)映體的檢測(cè)方法，其特征在于步驟：取養(yǎng)殖海水80?llOmL于燒杯中，加入氟甲喹標(biāo)準(zhǔn)品lmg?2mg，超聲使其完全溶解，取3?5mL過HLB固相萃取小柱，經(jīng)4?6mL去離子水淋洗后用5?10mL甲醇洗脫；洗脫液氮吹至近干，乙醇復(fù)溶，定溶至3mL，過0.22?0.45ym微孔濾膜后得到溶液A;以正己烷與乙醇體積比為10?40:90?60做為流動(dòng)相，并在流動(dòng)相中添加體積含量為0.1%?0.3%的甲酸和乙酸銨水溶液（5mnol/L)對(duì)氟甲喹對(duì)映體進(jìn)行分離；用高效液相色譜儀對(duì)上述溶液A進(jìn)行檢測(cè)，選用CHIRALCEL0D-H手性柱，柱溫為室溫，流速為0.5mL/min?0.7mL/min,波長為254nm0本發(fā)明能成功實(shí)現(xiàn)氟甲喹手性對(duì)映體的拆分，從而檢測(cè)海水中氟甲喹對(duì)映體的殘留量，為海水養(yǎng)殖中氟甲喹的殘留風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估及合理、安全使用提供依據(jù)。
【專利說明】一種海水中氟甲喹手性對(duì)映體的檢測(cè)方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種海水中氟甲喹手性對(duì)映體的檢測(cè)方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 氟甲喹（FLU)為第二代氟喹諾酮類抗菌藥，是動(dòng)物專用抗菌藥物，對(duì)治療革蘭氏 陰性菌感染，特別是對(duì)大腸桿菌、支原體、嗜水氣單胞菌引起的畜、禽及水產(chǎn)動(dòng)物疾病有較 好療效。其作用機(jī)理主要是抑制DNA旋轉(zhuǎn)酶A亞單位，破壞它的活性，結(jié)果使脫氧核糖核酸、 核糖核酸及蛋白質(zhì)的合成受干擾，使細(xì)胞不能再進(jìn)行分裂，從而起到殺菌作用。由于氟甲喹 具有高安全性、耐受性和獨(dú)特的高滲透性，其在水產(chǎn)動(dòng)物的細(xì)菌性疾病的預(yù)防和治療中已 經(jīng)得到廣泛應(yīng)用。氟甲喹在淡水中溶解度不高，但能溶于pH值較高的海水中，因此，氟甲喹 常用于海水魚的魚體浸浴消毒。然而，帶有氟甲喹殘留的廢水往往直接排入河流或海洋中， 這將直接或間接地危害環(huán)境及人類健康。已有研究發(fā)現(xiàn)高劑量氟甲喹可引起大鼠胚胎發(fā)育 畸變，雖然低劑量氟甲喹對(duì)人體的危害尚未見報(bào)道，但長期攝入有氟甲喹殘留的食品，其潛 在風(fēng)險(xiǎn)不容低估。
[0003] 氟甲喹是一種手性藥物，具有一個(gè)手性碳原子，兩個(gè)手性對(duì)映體，其對(duì)映體結(jié)構(gòu)式 如圖1所示。手性藥物的不同對(duì)映體間往往顯示出不同的藥效學(xué)、藥動(dòng)學(xué)和毒理學(xué)特征，因 此，對(duì)手性藥物的不同對(duì)映體進(jìn)行檢測(cè)尤為重要。目前，針對(duì)氟甲喹外消旋體在水產(chǎn)品中的 殘留檢測(cè)研究不少，但是尚沒有針對(duì)氟甲喹對(duì)映體在海水中的殘留檢測(cè)。因此，開展檢測(cè)海 水中氟甲喹對(duì)映體的研究，將為氟甲喹在海水中殘留的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估以及合理、安全使用提供 依據(jù)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種海水中氟甲喹手性對(duì)映體的檢測(cè)方法，采 用高效液相色譜法手性固定相法檢測(cè)海水中氟甲喹對(duì)映體的殘留量，可成功實(shí)現(xiàn)氟甲喹手 性對(duì)映體的拆分。
[0005] 本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為：一種海水中氟甲喹手性對(duì)映體的 檢測(cè)方法，其特征在于包括以下步驟：
[0006] 1)取養(yǎng)殖海水80?110mL于燒杯中，加入氟甲喹標(biāo)準(zhǔn)品1?2mg，超聲使其完全 溶解，取3?5mL過HLB固相萃取小柱，經(jīng)4?6mL去離子水淋洗后用5?10mL甲醇洗脫， 洗脫液收集于容量瓶中；
[0007] 2)將步驟1)的洗脫液氮吹至近干，用乙醇復(fù)溶，定溶至3mL，過0. 22?0. 45 μ m 微孔濾膜后得到溶液A;
[0008] 3)采用高效液相色譜儀對(duì)上述溶液A進(jìn)行檢測(cè)；檢測(cè)時(shí)選用CHIRALCEL 0D-H手 性柱，手性柱的柱溫為室溫，流動(dòng)相為正己烷和乙醇，其體積比為40?10:60?90,流動(dòng)相 中添加甲酸（色譜純，純度3 98wt% )和乙酸銨水溶液，使它們體積含量分別為0. 1%? 0. 3%，乙酸銨水溶液濃度4. 5?5. 5mmol/L，檢測(cè)時(shí)的流速為0. 5mL/min?0. 7mL/min，波 長為254nm。
[0009] 作為改進(jìn)，所述步驟1)的HLB固相萃取小柱是經(jīng)甲醇+水活化。
[0010] 作為優(yōu)選，所述步驟3)的正己烷和乙醇的體積比為20:80。
[0011] 作為改進(jìn)，所述步驟3)的CHIRALCEL 1C手性柱的填料為5 μ m硅膠表面涂布纖維 素-三[3, 5-二氯苯基氨基甲酸酯]。
[0012] 作為優(yōu)選，所述乙酸銨水溶液濃度5mmol/L。
[0013] 作為優(yōu)選，所述步驟3)的檢測(cè)時(shí)的流速為0. 6mL/min。
[0014] 最后，所述步驟3)流動(dòng)相中添加甲酸和乙酸銨水溶液，使它們體積含量分別為 0· 2%。
[0015] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：采用高效液相色譜法手性固定相法檢測(cè)海 水中氟甲喹對(duì)映體的殘留量，成功實(shí)現(xiàn)了氟甲喹手性對(duì)映體的拆分，從而可對(duì)海水中氟甲 喹對(duì)映體的殘留量進(jìn)行檢測(cè)，為海水中氟甲喹的合理、安全使用提供理論依據(jù)。其中，對(duì)映 體在0.04mg/L?10mg/L濃度范圍內(nèi)與其響應(yīng)值呈良好的線性關(guān)系，左氟甲喹和右氟甲喹 的回歸方程及相關(guān)系數(shù)分別為 y = 113. 93χ-7· 2217、R2 = 0· 9994 及 y = 117. 71χ-9· 9342、 R2 = 0. 9998,樣品平均回收率分別為88. 53 %和89. 26%，日間精密度分別為5. 71 %和 4. 25%，定量限均為(λ 04mg/L。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0016] 圖1是本發(fā)明提供的氟甲喹對(duì)映體結(jié)構(gòu)式；
[0017] 圖2是本發(fā)明實(shí)施例中氟甲喹的色譜圖。

【具體實(shí)施方式】
[0018] 以下結(jié)合附圖實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。
[0019] 一種海水中氟甲喹手性對(duì)映體的檢測(cè)方法，包括以下步驟：
[0020] (1)取養(yǎng)殖海水100mL于燒杯中，加入氟甲喹標(biāo)準(zhǔn)品lmg?2mg，超聲使其完全溶 解，取3?5mL過HLB固相萃取小柱（經(jīng)5mL甲醇+5mL水活化），經(jīng)5mL去離子水淋洗后用 5?10mL甲醇洗脫，洗脫液收集于10mL容量瓶中；
[0021] (2)將步驟（1)中的洗脫液甲醇氮吹至近干，殘液乙醇溶解并定溶至3mL，采用 0. 22 μ m微孔濾膜進(jìn)行過濾后得到溶液A ;
[0022] (3)采用高效液相色譜儀對(duì)上述溶液A進(jìn)行檢測(cè)；檢測(cè)時(shí)選用CHIRALCEL 0D-H手 性柱，該手性柱的填料為5 μ m硅膠表面涂布纖維素-三[3, 5-二甲苯基氨基甲酸酯]，柱溫 為室溫；正己烷：乙醇按照40?10:60?90 (v:v)作為流動(dòng)相；甲酸和乙酸銨水溶液的添 加量各為〇. 1 (v) %?0. 3 (v) % ;甲酸為色譜純，純度會(huì)98wt %，乙酸銨水溶液濃度4. 5? 5. 5mmol/L，檢測(cè)時(shí)的流速為 0· 5mL/min ?0· 7mL/min，波長為 254nm。
[0023] 在本實(shí)施例中，步驟（3)中使用正己烷與乙醇體積比分別為40:60、30:70、20:80 和10:90的流動(dòng)相對(duì)氟甲喹進(jìn)行手性拆分，拆分結(jié)果如表1所示，可以看出，隨著流動(dòng)相中 乙醇比例的增大，分離度增加，但柱壓也隨之增高。因此，所使用流動(dòng)相正己烷與乙醇的最 佳體積比為20:80,在該流動(dòng)相配比條件下，對(duì)映體分離效果良好且柱壓較低。
[0024] 表 1
[0025]

【權(quán)利要求】
1. 一種海水中氟甲喹手性對(duì)映體的檢測(cè)方法，其特征在于包括以下步驟： 1) 取養(yǎng)殖海水80?llOmL于燒杯中，加入氟甲喹標(biāo)準(zhǔn)品1?2mg，超聲使其完全溶解， 取3?5mL過HLB固相萃取小柱，經(jīng)4?6mL去離子水淋洗后用5?10mL甲醇洗脫，洗脫 液收集于容量瓶中； 2) 將步驟1)的洗脫液氮吹至近干，用乙醇復(fù)溶，定溶至3mL，過0. 22?0. 45 μ m微孔 濾膜后得到溶液A; 3) 采用高效液相色譜儀對(duì)上述溶液A進(jìn)行檢測(cè)；檢測(cè)時(shí)選用CHIRALCEL 0D-H手性 柱，手性柱的柱溫為室溫，流動(dòng)相為正己烷和乙醇，其體積比為40?10:60?90,流動(dòng)相 中添加甲酸和乙酸銨水溶液，使它們體積含量分別為〇. 1%?〇. 3%，甲酸為色譜純，純度 蘭98wt%，乙酸銨水溶液濃度為4. 5?5. 5mmol/L，檢測(cè)時(shí)的流速為0· 5mL/min?0· 7mL/ min,波長為 254nm。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于：所述步驟1)的HLB固相萃取小柱是 經(jīng)甲醇+水活化。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于：所述步驟3)的正己烷和乙醇的體積 比為20:80。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于：所述步驟3)的CHIRALCEL 1C手性 柱的填料為5 μ m娃膠表面涂布纖維素-三[3, 5-二氯苯基氨基甲酸酯]。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于：所述乙酸銨水溶液濃度5mmol/L。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于：所述步驟3)的檢測(cè)時(shí)的流速為 0. 6mL/min〇
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于：所述步驟3)流動(dòng)相中添加甲酸和乙 酸銨水溶液，使它們體積含量分別為〇. 2%。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK104215710SQ201410459726
【公開日】2014年12月17日 申請(qǐng)日期:2014年9月11日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月11日
【發(fā)明者】高小峰, 聶晶, 歐陽小現(xiàn), 王陽光, 楊立業(yè), 吳偉建, 郁迪, 徐紅萍, 李維, 曾浩, 杜軍, 李玄 申請(qǐng)人:浙江海洋學(xué)院