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一種偶聯(lián)Stat3抗體的瓊脂糖凝膠及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種偶聯(lián)Stat3抗體的瓊脂糖凝膠，所述凝膠是將Stat3抗體偶聯(lián)至瓊脂糖凝膠載體上制成偶聯(lián)Stat3抗體的瓊脂糖凝膠；所述Stat3抗體是由Stat3抗原多肽經(jīng)免疫反應(yīng)后進(jìn)行提取純化而獲得，所述Stat3抗原多肽的氨基酸序列為序列2、序列3、序列5、序列8和序列9之一所示；本發(fā)明所述Stat3抗體靈敏性好，效價(jià)高；本發(fā)明中所得到的偶聯(lián)Stat3抗體的瓊脂糖凝膠可以直接富集細(xì)胞中的Stat3蛋白及其Stat3結(jié)合蛋白，用于Stat3蛋白相關(guān)疾病中的功能研究；序列2：DFDFNYKTLKSQGC；序列3：PEADPGSAAPYLKT；序列5：LYPDIPKEEAFGKY；序列8：ESQEHPEADPGSAAPY；序列9：KVSYKGDPIVQHRP。
【專利說明】一種偶聯(lián)Stat3抗體的瓊脂糖凝膠及其應(yīng)用 (一）

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種 Stat3 抗體（Signal Transducers and Activators of Transcription3)及其抗體填料制備方法與應(yīng)用。具體而言，是基于Stat3氨基酸序列選擇 多個(gè)位點(diǎn)的多肽免疫，篩選高效價(jià)的Stat3抗體，并制備成偶聯(lián)Stat3抗體的瓊脂糖凝膠。 (二）

【背景技術(shù)】
[0002] Stat3 抗體（Signal Transducers and Activators of Transcription3)為信號(hào) 傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子（Signal Transducers and Activators of Transcription，STAT)蛋 白家族的成員，在維持胚胎干細(xì)胞的全能性及調(diào)節(jié)免疫中發(fā)揮重要作用。Stat3基因敲除的 小鼠可引起胚胎致死，其異常表達(dá)與多種疾病密切相關(guān)。
[0003] Stat3執(zhí)行生理功能具有多樣性特點(diǎn)：（1)維持胚胎干細(xì)胞的自我更新；(2)刺激 T細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)Thl7細(xì)胞生成；（3)保持外周神經(jīng)細(xì)胞存活；（4)參與上皮組織中胸腺細(xì) 胞的發(fā)育及乳腺細(xì)胞的退化；（5)介導(dǎo)肝細(xì)胞的急性期損傷修復(fù)等。由于Stat3執(zhí)行功能 的多樣性，在多種腫瘤及免疫性疾病中均發(fā)現(xiàn)Stat3的異常表達(dá)（參見 ：Levy，D.E.，and Lee,C.K. (2002). What does Stat3 do ? The Journal of clinical investigation 109, 1143-1148. Yu, H. , Pardoll, D. , and Jove, R. (2009). STATs in cancer inflammation and immunity:a leading role for STAT3. Nature reviews Cancer 9,798-809·)。
[0004] Stat3在細(xì)胞內(nèi)有兩種異構(gòu)體Stat3a和Stat3 0，Stat3a蛋白全長770個(gè)氨 基酸，由六個(gè)功能區(qū)組成（Becker S, Groner B, Muller CW. Three-dimensional structure of the Stat3beta homodimer bound to DNA. Nature 1998 ；394:145-151.Schaefer TS, Sanders LK, Nathans D. Cooperative transcriptional activity of Jun and Stat3 beta, a short form of Stat3. Proc Natl Acad Sci USA 1995;92:9097-9101.) ：(1)N 端的氨基酸保守序列（1-130);⑵螺旋區(qū)（Coil-coil Domain 130-320, CCD) ; (3)DNA 結(jié) 合域（DNA Binding Domain 320-494, DBD) ; (4)連接區(qū)（Linker Domain 495-583) ; (5) SH2 結(jié)構(gòu)域（SH2 Domain 584-688) ; (6) C 端的轉(zhuǎn)錄激活區(qū)（Transactivation domain689_770， TAD)，見圖I所示。
[0005] 精確的認(rèn)識(shí)Stat3在不同組織、細(xì)胞中的功能有助于我們認(rèn)識(shí)Stat3在疾病發(fā)生 中的作用。針對(duì)Stat3制備的抗體，在多個(gè)商業(yè)化的公司均有多種Stat3抗體在銷售，如 SantaCruz 公司的 Stat3 抗體對(duì)應(yīng)貨號(hào)有 SC-482, SC-8019, SC-7179 等。Cell signaling technology公司的Stat3抗體對(duì)應(yīng)貨號(hào)有9319、4904等。公司關(guān)于使用哪一段多肽免疫產(chǎn) 生的Stat3抗體均屬于商業(yè)機(jī)密，我們根據(jù)Stat3蛋白的氨基酸序列特性，合成了 10段候 選抗原多肽，并篩選到一個(gè)能高效制備Stat3抗體的抗原多肽。
[0006] NHS活化瓊脂糖凝膠偶聯(lián)抗體在檢測細(xì)胞或者組織內(nèi)的低豐度蛋白及篩選目的蛋 白的結(jié)合蛋白中應(yīng)用廣泛。關(guān)于偶聯(lián)抗體的填料產(chǎn)品，目前有偶聯(lián)標(biāo)簽抗體填料的商業(yè)化 產(chǎn)品如 c-Myc Tag IP/Co-IP kit (Thermo Scientific?#23610)，ANTI-FLAG M2Magnetic Beads(Sigma#A2220)，關(guān)于瓊脂糖凝膠偶聯(lián)Stat3抗體的產(chǎn)品未見銷售。根據(jù)文獻(xiàn)檢索 表明目前篩選Stat3結(jié)合蛋白的方法有：將Stat3構(gòu)建到帶標(biāo)簽蛋白的表達(dá)載體中用偶 聯(lián)標(biāo)簽抗體的瓊脂糖凝膠進(jìn)行篩選，這個(gè)方法牽涉到轉(zhuǎn)染和載體構(gòu)建的過程，方法復(fù)雜， 流程時(shí)間長，而且不能排除標(biāo)簽抗體自身拉下的結(jié)合蛋白的干擾?；蛘哂脗鹘y(tǒng)的IP方法 利用Stat3 -抗聯(lián)合ProteinA+G珠分離細(xì)胞內(nèi)的Stat3結(jié)合蛋白，因?yàn)檫^程中要使用 ProteinA+G珠，因此這種方法不可避免會(huì)導(dǎo)致大量IgG及IgA的結(jié)合，極大的干擾了實(shí)驗(yàn)結(jié) 果的準(zhǔn)確性。制備瓊脂糖凝膠偶聯(lián)的Stat3抗體對(duì)于研宄Stat3的功能會(huì)帶來很多便捷， 實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性也能夠得到很好的控制。 (三）
【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明目的是提供一種基于Stat3氨基酸序列合成10段免疫原性強(qiáng)的抗原肽，篩 選出一種新的高效價(jià)的Stat3抗體，并將其制備成偶聯(lián)Stat3抗體的瓊脂糖凝膠；該方法中 制備的抗體效價(jià)高、特異性強(qiáng)。所得到的偶聯(lián)Stat3抗體瓊脂糖凝膠穩(wěn)定性好，特異性和敏 感性強(qiáng)。在研宄Stat3的功能及篩選其結(jié)合蛋白更加便捷、準(zhǔn)確；可以做成商業(yè)化產(chǎn)品，用 于Stat3蛋白相關(guān)的疾病中的功能研宄。
[0008] 本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：
[0009] 本發(fā)明提供一種偶聯(lián)Stat3抗體的瓊脂糖凝膠，所述凝膠是將Stat3抗體偶聯(lián)至 瓊脂糖凝膠載體上制成偶聯(lián)Stat3抗體的瓊脂糖凝膠；所述Stat3抗體是由Stat3抗原多 肽經(jīng)免疫反應(yīng)后進(jìn)行提取純化而獲得，所述Stat3抗原多肽的氨基酸序列為序列2、序列3、 序列5、序列8和序列9之一；
[0010] 序列 2 :DFDFNYKTLKSQGC ;序列 3 :PEADPGSAAPYLKT ;
[0011] 序列 5 :LYPDIPKEEAFGKY ;序列 8 :ESQEHPEADPGSAAPY ;
[0012] 序列 9 :KVSYKGDPIVQHRP。
[0013] 進(jìn)一步，所述制備Stat3抗體的最優(yōu)抗原多肽的氨基酸序列為序列3所示。
[0014] 進(jìn)一步，所述瓊脂糖凝膠為NHS活化的瓊脂糖凝膠FF，更優(yōu)選購自北京韋氏博慧 色譜科技有限公司CS-A30。
[0015] 進(jìn)一步，所述偶聯(lián)方法為：將Stat3抗體用pH8. 0的0. 2M碳酸氫鈉水溶液溶解制 成10mg/ml偶聯(lián)溶液；將瓊脂糖凝膠用ImM鹽酸水溶液抽濾清洗后，獲得載體；將載體加入 偶聯(lián)溶液中，4°C，震蕩反應(yīng)12小時(shí)，抽濾，濾餅用pH8. 0的0. 2M碳酸氫鈉水溶液清洗后浸 入IOmM乙醇胺溶液中，室溫震蕩過夜，抽濾后用pH8. 0,0. 2M碳酸鈉緩沖液清洗，去除洗滌 液即獲得偶聯(lián)Stat3抗體的瓊脂糖凝膠；所述IOmM乙醇胺溶液是由pH8. 0、0. 2M碳酸鈉緩 沖液配制，所述的載體與偶聯(lián)溶液的體積比為I :1. 5?2,所述瓊脂糖凝膠為NHS活化的瓊 脂糖凝膠FF。
[0016] 進(jìn)一步，所述Stat3抗體按如下方法制備：（1)將Stat3抗原多肽與載體偶聯(lián)，制 成Stat3抗原多肽復(fù)合物；所述Stat3抗原多肽的氨基酸序列為序列2、序列3、序列5、序 列8和序列9之一所示；（2)用Stat3抗原多肽復(fù)合物進(jìn)行免疫反應(yīng)，收集含Stat3抗體的 血清，分離提取Stat3抗體，獲得Stat3抗體。
[0017] 進(jìn)一步，優(yōu)選步驟（1)所述載體為鑰孔血藍(lán)蛋白。
[0018] 本發(fā)明所述抗原多肽的合成方法為本領(lǐng)域公知技術(shù)，但是關(guān)于抗原多肽的免疫原 性的情況未知，在本發(fā)明中我們通過后期檢測篩選表明序列2、序列3、序列5、序列7、序列 8、序列9多肽序列制備的抗體通過ELISA檢測和點(diǎn)雜檢測表明結(jié)果陽性。蛋白免疫印跡鑒 定表明序列2、序列3、序列5、序列8、序列9多肽制備的抗體結(jié)果陽性。進(jìn)一步通過檢測細(xì) 胞內(nèi)源性Stat3蛋白表明3號(hào)多肽序列制備的Stat3抗體效價(jià)和敏感性均為最優(yōu)。3號(hào)多 肽為最優(yōu)的制備Stat3抗體的抗原肽。
[0019] 本發(fā)明還涉及一種偶聯(lián)Stat3抗體的瓊脂糖凝膠在富集細(xì)胞中Stat3及其結(jié)合蛋 白中的應(yīng)用。通過實(shí)驗(yàn)我們得到了偶聯(lián)Stat3抗體的瓊脂糖凝膠富集細(xì)胞中Stat3蛋白的 條件：IO 6個(gè)細(xì)胞加入500 μ 1的IP裂解液（P0013碧云天生物技術(shù)有限公司），4°C旋轉(zhuǎn)Ih 使其充分裂解，20, OOOg離心20min，取上清，加入2 μ g偶聯(lián)Stat3抗體的瓊脂糖凝膠，4°C 混合過夜。之后用裂解液洗滌填料一次，再用PBS洗滌填料三次。該偶聯(lián)Stat3抗體的瓊 脂糖凝膠上可以富集細(xì)胞中的Stat3蛋白及其Stat3結(jié)合蛋白。該方法可用于相關(guān)的疾病 中Stat3功能的研宄。
[0020] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明有益效果主要體現(xiàn)在：本發(fā)明所述Stat3抗體靈敏性好， 效價(jià)高；關(guān)于偶聯(lián)Stat3抗體的瓊脂糖凝膠，目前市場上沒有看到銷售，當(dāng)前多通過在細(xì)胞 內(nèi)過表達(dá)帶標(biāo)簽的Stat3蛋白來篩選Stat3的結(jié)合蛋白，方法復(fù)雜流程長，而且沒有直接篩 選內(nèi)源性的Stat3結(jié)合蛋白真實(shí)可信；本發(fā)明中所得到的偶聯(lián)Stat3抗體的瓊脂糖凝膠可 以直接富集細(xì)胞中的Stat3蛋白及其Stat3結(jié)合蛋白，目前在市場上尚未發(fā)現(xiàn)同類產(chǎn)品，可 以做成商業(yè)化產(chǎn)品，用于Stat3蛋白相關(guān)疾病中的功能研宄。 (四）【專利附圖】

【附圖說明】
[0021] 圖1為Stat3蛋白的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0022] 圖2為10條抗原多肽在Stat3蛋白中的位置。
[0023] 圖3為抗原多肽的HPLC鑒定，A為1號(hào)抗原多肽，B為2號(hào)抗原多肽，C3號(hào)抗原多 肽，D為4號(hào)抗原多肽，E為5號(hào)抗原多肽，F(xiàn)為6號(hào)抗原多肽，G為7號(hào)抗原多肽，H為8號(hào) 抗原多肽，I為9號(hào)抗原多肽，J為10號(hào)抗原多肽。
[0024] 圖4為抗原多肽的質(zhì)譜鑒定，A為1號(hào)抗原多肽，B為2號(hào)抗原多肽，C3號(hào)抗原多 肽，D為4號(hào)抗原多肽，E為5號(hào)抗原多肽，F(xiàn)為6號(hào)抗原多肽，G為7號(hào)抗原多肽，H為8號(hào) 抗原多肽，I為9號(hào)抗原多肽，J為10號(hào)抗原多肽的HPLC鑒定。
[0025] 圖5為ELISA鑒定抗血清效價(jià)圖，2、3、4、5、7、8、9分別表示2、3、4、5、7、8、9號(hào)抗原 多肽制備的含Stat3抗體血清的抗體效價(jià)結(jié)果。
[0026] 圖 6 為 Dot-Blot 鑒定 Stat3 抗體，2、3、4、5、7、8、9 分別表示 2、3、4、5、7、8、9 號(hào)抗 原多肽制備的Stat3抗體鑒定結(jié)果。
[0027] 圖7為Stat3抗體檢測過量表達(dá)的Stat3, 2、3、4、5、7、8、9分別表示2、3、4、5、7、8、 9號(hào)抗原多肽制備的Stat3抗體檢測結(jié)果，其中泳道A表示293T細(xì)胞未轉(zhuǎn)染Myc-Stat3表 達(dá)載體蛋白樣本；泳道B表示293T細(xì)胞轉(zhuǎn)染Myc-Stat3表達(dá)載體蛋白樣本，蛋白內(nèi)含有高 豐度的Stat3蛋白；泳道M為Marker，從上之下的前三條帶依次為170kd、130kd、95kd。箭 頭指示位置為Stat3蛋白被抗體識(shí)別到的陽性信號(hào)的位置。
[0028] 圖8為Stat3抗體檢測Pc-9細(xì)胞中內(nèi)源性Stat3,2、3、5、8、9分別為2、3、5、8、 9號(hào)抗原多肽制備的Stat3抗體，對(duì)照為商業(yè)化的Stat3抗體（Santa Cruz公司，貨號(hào)為 sc-482);其中泳道M為Marker，從上之下的前三條帶依次為170kd、130kd、95kd ;泳道S為 人肺癌細(xì)胞PC9總蛋白樣本。
[0029] 圖9為Stat3抗體填料純化過量表達(dá)的Stat3蛋白，A為用細(xì)胞總蛋白進(jìn)行鑒定 的圖：泳道1為293T細(xì)胞總蛋白，泳道2為Myc純化柱純化后的蛋白（箭頭指示位置為 Myc-Stat3蛋白）；B為用細(xì)胞漿蛋白和細(xì)胞核蛋白兩種細(xì)胞組分蛋白鑒定：泳道1為293T 細(xì)胞的細(xì)胞漿總蛋白，泳道2為293T細(xì)胞的細(xì)胞核總蛋白，泳道3為Stat3抗體填料純化 細(xì)胞衆(zhòng)中Myc_Stat3蛋白，泳道4為偶聯(lián)Stat3抗體的瓊脂糖凝膠純化細(xì)胞核中Myc_Stat3 蛋白，泳道M為Marker從上之下的分子量（kd)依次為：170、130、95、70、55、40、35、25。
[0030] 圖10為偶聯(lián)Stat3抗體的瓊脂糖凝膠純化內(nèi)源性的Stat3蛋白電泳圖，泳道1為 人肺癌細(xì)胞PC9總蛋白；泳道2為偶聯(lián)Stat3抗體的瓊脂糖凝膠純化人肺癌細(xì)胞PC9總蛋 白中內(nèi)源性Stat3蛋白，泳道M為Marker從上之下的分子量（kd)依次為：170、130、95、70、 55、40、35、25,箭頭指示位置為Stat3蛋白。
[0031] 圖11為Stat3抗體填料純化內(nèi)源性的Stat3及其結(jié)合蛋白的質(zhì)譜鑒定，A為Stat3 蛋白質(zhì)譜鑒定分析；B為PKC質(zhì)譜鑒定分析。 (五）【具體實(shí)施方式】
[0032] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于 此：
[0033] 如未特別指明之處，可根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟悉的《Making and Using Antibodies: A Practical Handbook》（CRC Press，F(xiàn)lorida，2006)、《抗體制備與使用實(shí)驗(yàn) 指南》（科學(xué)出版社，北京，2010年）等手冊以及本文所引用的參考文獻(xiàn)中所列的方法來實(shí) 施。另外，實(shí)施例中所使用的材料除有特別說明外，均可通過商業(yè)途徑從市場上購買。
[0034] 實(shí)施例1 :基于Stat3蛋白序列的新型抗Stat3抗體及其偶聯(lián)載體的制備
[0035] 1、多肽的合成及偶聯(lián)
[0036] 通過對(duì)Stat3蛋白序列（序列11所示，結(jié)構(gòu)見圖1)進(jìn)行對(duì)比分析，委托杭州聚成 生物技術(shù)有限公司合成10條多肽，10條多肽序列為序列1-10所示，其在Stat3蛋白中的位 置如圖2所示。
[0037] Stat3蛋白序列（序列11):
[0038] MAQWNQLQQLDTRYLEQLHQLYSDSFPMELRQFLAPWIESQDWAYAASKESHATLVFHNLLGEIDQQ YSRFLQESNVLYQHNLRRIKQFLQSRYLEKPMEIARIVARCLWEESRLLQTAATAAQQGGQANHPTAAVVTEKQQ MLEQHLQDVRKRVQDLEQKMKVVENLQDDFDFNYKTLKSQ⑶MQDLNGNNQSVTRQKMQQLEQMLTALDQMRRSI VSELAGLLSAMEYVQKTLTDEELADWKRRQQIACIGGPPNICLDRLENWITSLAESQLQTRQQIKKLEELQQKVS YKGDPIVQHRPMLEERIVELFRNLMKSAFVVERQPCMPMHPDRPLVIKTGVQFTTKVRLLVKFPELNYQLKIKVC IDKDS⑶VAALRGSRKFNILGTNTKVMNMEESNNGSLSAEFKHLTLREQRCGNGGRANCDASLIVTEELHLITFE TEVYHQGLKIDLETHSLPVVVISNICQMPNAWASILWY匪LTNNPKNVNFFTKPPIGTWDQVAEVLSWQFSSTTK RGLSIEQLTTLAEKLLGPGVNYSGCQITffAKFCKENMAGKGFSFffVffLDNIIDLVKKYILALffNEGYIMGFISKE RERAILSTKPPGTFLLRFSESSKEGGVTFTWVEKDISGKTQIQSVEPYTKQQLNNMSFAEIIMGYKIMDATNILV SPLVYLYPDIPKEEAFGKYCRPESQEHPEADPGAAPYLKTKFICVTPTTCSNTIDLPMSPRTLDSLMQFGNNGEG AEPSAGGQFESLTFDMELTSECATSPM
[0039] 1-10號(hào)抗原多肽序列：
[0040] I ：KVSYKGDPIVQHR ；2 ：DFDFNYKTLKSQGC ；
[0041] 3 ：PEADPGSAAPYLKT ；4 ：SKERERAILSTKP ；
[0042] 5 ：LYPDIPKEEAFGKY ；6 ：PESQEHPEADPGS ；
[0043] 7 ：LHQLYSDSFPMELR ；8 ：ESQEHPEADPGSAAPY ；
[0044] 9 ：KVSYKGDPIVQHRP ；10 ：TLKSQGDMQDLNGNN〇
[0045] 將10條抗原多肽序列進(jìn)行HPLC和質(zhì)譜的鑒定，結(jié)果如圖3、4所示。
[0046] 條件為采用反相高效液相色譜測定合成的多肽，色譜柱為Boston Crest ODS, 4. 6*250mm, 5um。流速為 I. Oml/min，檢測波長為 220nm，進(jìn)樣量為 IOul.流動(dòng)相 Solvent A(0. I % Trif luoroacetic in 100% Acetonirile), Solvent B(0. I % Trif luoroacetic in 100% Water)，A和B等體積混合作為流動(dòng)相。
[0047] 表1質(zhì)譜檢測條件

【權(quán)利要求】
1. 一種偶聯(lián)Stat3抗體的瓊脂糖凝膠，其特征在于所述凝膠是將Stat3抗體偶聯(lián)至瓊 脂糖凝膠載體上制成偶聯(lián)Stat3抗體的瓊脂糖凝膠；所述Stat3抗體是由Stat3抗原多肽 經(jīng)免疫反應(yīng)后進(jìn)行提取純化而獲得，所述Stat3抗原多肽的氨基酸序列為序列2、序列3、序 列5、序列8和序列9之一所示； 序列 2 :DFDFNYKTLKSQGC ;序列 3 :PEADPGSAAPYLKT ; 序列 5 :LYPDIPKEEAFGKY ;序列 8 :ESQEHPEADPGSAAPY ; 序列 9 :KVSYKGDPIVQHRP。
2. 如權(quán)利要求1所述偶聯(lián)Stat3抗體的瓊脂糖凝膠，其特征在于所述瓊脂糖凝膠為 NHS活化的瓊脂糖凝膠FF。
3. 如權(quán)利要求1所述偶聯(lián)Stat3抗體的瓊脂糖凝膠，其特征在于所述Stat3抗原的氨 基酸序列為序列3所示。
4. 如權(quán)利要求1所述偶聯(lián)Stat3抗體的瓊脂糖凝膠，其特征在于所述偶聯(lián)方法為：將 Stat3抗體用pH8. 0的0. 2M碳酸氫鈉水溶液溶解制成10mg/ml偶聯(lián)溶液；將瓊脂糖凝膠用 ImM鹽酸水溶液抽濾清洗后，獲得載體；將載體加入偶聯(lián)溶液中，4°C，震蕩反應(yīng)12小時(shí)，抽 濾，濾餅用PH8. 0的0. 2M碳酸氫鈉水溶液清洗后浸入10mM乙醇胺溶液中，室溫震蕩過夜， 抽濾后用PH8. 0,0. 2M碳酸鈉緩沖液清洗，去除洗滌液即獲得偶聯(lián)Stat3抗體的瓊脂糖凝 膠；所述1〇禮乙醇胺溶液是由PH8. 0、0. 2M碳酸鈉緩沖液配制，所述的載體與偶聯(lián)溶液的體 積比為1 :1. 5?2,所述瓊脂糖凝膠為NHS活化的瓊脂糖凝膠FF。
5. 如權(quán)利要求1所述偶聯(lián)Stat3抗體的瓊脂糖凝膠，其特征在于Stat3抗體按如下方 法制備：（1)將Stat3抗原多肽與載體偶聯(lián)，制成Stat3抗原多肽復(fù)合物；（2)用Stat3抗原 多肽復(fù)合物進(jìn)行免疫反應(yīng)，收集含Stat3抗體的血清，分離提取Stat3抗體，獲得Stat3抗 體。
6. 如權(quán)利要求5所述偶聯(lián)Stat3抗體的瓊脂糖凝膠，其特征在于步驟（1)所述載體為 鑰孔血藍(lán)蛋白。
7. -種權(quán)利要求1所述偶聯(lián)Stat3抗體的瓊脂糖凝膠在富集Stat3蛋白及其結(jié)合蛋白 中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】G01N33/68GK104479023SQ201410457680
【公開日】2015年4月1日 申請日期:2014年9月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月10日
【發(fā)明者】徐莉, 秦樾, 季巾君, 程胤凱, 王鑫 申請人:浙江中醫(yī)藥大學(xué)