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一種蛋白質(zhì)芯片的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本實(shí)用新型屬于生物醫(yī)學(xué)檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體為一種蛋白質(zhì)芯片，包括呈方形的固相載體，固相載體的四角處均設(shè)有一陰性質(zhì)控區(qū)和一陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)，所述固相載體的中部設(shè)有至少一種炎癥因子識(shí)別區(qū)。本實(shí)用新型通過(guò)在固相載體的四個(gè)角處均設(shè)陰性質(zhì)控區(qū)和陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)，便于與各炎癥因子識(shí)別位點(diǎn)進(jìn)行比較判斷，提高蛋白芯片檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。每種炎癥因子識(shí)別區(qū)、每個(gè)陰性質(zhì)控區(qū)和每個(gè)陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)均設(shè)五個(gè)點(diǎn)，且呈點(diǎn)陣式排列，不僅可提高反應(yīng)容量，還可提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。由玻片、氨基修飾層、醛基修飾層和瓊脂糖修飾層構(gòu)成的固相載體可使樣品穩(wěn)定固定在其上且保持活性。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種蛋白質(zhì)芯片
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型涉及生物醫(yī)學(xué)檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種蛋白質(zhì)芯片。
【背景技術(shù)】
[0002]蛋白質(zhì)芯片技術(shù)概念起源于20世紀(jì)80年代后期，是生命科學(xué)領(lǐng)域熱門(mén)的新技術(shù)之一。蛋白質(zhì)芯片具有平行性、高通量、靈敏度高、樣品用量少、檢測(cè)速度快等優(yōu)點(diǎn)。然而，由于蛋白質(zhì)的化學(xué)成分和結(jié)構(gòu)復(fù)雜多變，固定在芯片表面的蛋白質(zhì)容易變性失活。因此，尋找合適的載體和表面修飾方法以保證固定足夠量的蛋白質(zhì)并保持其天然活性成為研制蛋白質(zhì)微陣列的關(guān)鍵步驟之一。
[0003]近年來(lái)經(jīng)過(guò)科研人員的嘗試和研發(fā)，逐步形成了以濾膜、塑料、玻片和金屬膜等為主的固相載體。在這幾類(lèi)載體中，玻片具有廉價(jià)、表面光滑、熒光背景低、性能穩(wěn)定、抗體用量低等優(yōu)點(diǎn)。但是，用玻片固定蛋白往往具有樣品易蒸發(fā)、不適合多步反應(yīng)、容量較小和容易發(fā)生交叉污染等缺點(diǎn)。
[0004]通過(guò)改進(jìn)蛋白質(zhì)芯片的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)來(lái)克服反應(yīng)容量小、樣品易蒸發(fā)的問(wèn)題，以及提高檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性是一種可行的方法，從而更充分發(fā)揮蛋白質(zhì)芯片的優(yōu)勢(shì)。
實(shí)用新型內(nèi)容
[0005]本實(shí)用新型解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種反應(yīng)容量大、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性高的蛋白質(zhì)
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[0006]為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本實(shí)用新型采用以下技術(shù)方案:一種蛋白質(zhì)芯片，包括呈方形的固相載體，所述固相載體的四角處均設(shè)有一陰性質(zhì)控區(qū)和一陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)，所述固相載體的中部設(shè)有至少一種炎癥因子識(shí)別區(qū)。
[0007]所述固相載體的中部設(shè)有若干種炎癥因子識(shí)別區(qū)，所述每種炎癥因子識(shí)別區(qū)由5個(gè)同種炎癥因子識(shí)別位點(diǎn)構(gòu)成。
[0008]所述每個(gè)陰性質(zhì)控區(qū)由5個(gè)陰性對(duì)照點(diǎn)組成；所述每個(gè)陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)由5個(gè)陽(yáng)性對(duì)照點(diǎn)組成。
[0009]所述炎癥因子識(shí)別位點(diǎn)、陽(yáng)性對(duì)照點(diǎn)和陰性對(duì)照點(diǎn)在固相載體上呈矩陣式排列。
[0010]所述炎癥因子識(shí)別位點(diǎn)、陽(yáng)性對(duì)照點(diǎn)和陰性對(duì)照點(diǎn)的體積均為1mm3。所述炎癥因子識(shí)別區(qū)中相鄰兩個(gè)炎癥因子識(shí)別位點(diǎn)的距離為1.5mm ;所述陰性質(zhì)控區(qū)中相鄰兩個(gè)陰性對(duì)照點(diǎn)的距離為1.5mm ;所述陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)中相鄰兩個(gè)陽(yáng)性對(duì)照點(diǎn)的距離為1.5mm。
[0011]所述固相載體由玻片，以及玻片上由下至上依次設(shè)置的氨基修飾層、醛基修飾層和瓊脂糖修飾層組成。
[0012]所述陰性對(duì)照點(diǎn)為BSA陰性對(duì)照點(diǎn)，所述陽(yáng)性對(duì)照點(diǎn)為二抗陽(yáng)性對(duì)照點(diǎn)。
[0013]述炎癥因子識(shí)別位點(diǎn)包括CRP識(shí)別位點(diǎn)、Myoglobin識(shí)別位點(diǎn)、cTnT識(shí)別位點(diǎn)、NT-proBNP識(shí)別位點(diǎn)、CK-MB識(shí)別位點(diǎn)、H-FABP識(shí)別位點(diǎn)、GPBB識(shí)別位點(diǎn)和D-Dimer識(shí)別位點(diǎn)。[0014]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本實(shí)用新型的有益效果是:本實(shí)用新型通過(guò)在固相載體的四個(gè)角處均設(shè)陰性質(zhì)控區(qū)和陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)，便于與各識(shí)別位點(diǎn)進(jìn)行比較判斷，提高蛋白芯片檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。每種炎癥因子識(shí)別區(qū)、每個(gè)陰性質(zhì)控區(qū)和每個(gè)陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)均設(shè)五個(gè)點(diǎn)，且呈點(diǎn)陣式排列，不僅可提高反應(yīng)容量，還可提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。由玻片、氨基修飾層、醛基修飾層和瓊脂糖修飾層構(gòu)成的固相載體可使樣品穩(wěn)定固定在其上，且保持活性。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0015]圖1為本實(shí)用新型的蛋白質(zhì)芯片的結(jié)構(gòu)示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0016]為了更充分理解本實(shí)用新型的技術(shù)內(nèi)容，下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型的技術(shù)方案作進(jìn)一步介紹和說(shuō)明。
[0017]實(shí)施例
[0018]本實(shí)施例提供的一種蛋白質(zhì)芯片為用于檢測(cè)心血管疾病的蛋白質(zhì)芯片。心血管疾病的炎癥因子包括CRP (C反應(yīng)蛋白)、Myoglobin (肌紅蛋白)、cTnT (心肌肌鈣蛋白T)、NT-proBNP (N末端B型鈉尿肽)、CK-MB (肌酸激酶同工酶)、H-FABP (心型脂肪酸結(jié)合蛋白)、GPBB (糖原磷酸化酶同工酶BB)和D-Dimer (D 一二聚體)共8項(xiàng)生物標(biāo)志物。
[0019]BSA為牛血清白蛋白。
[0020]參照?qǐng)D1，本實(shí)施例提供的一種蛋白質(zhì)芯片包括呈方形的固相載體1，固相載體I上設(shè)有炎癥因子識(shí)別區(qū)、陰性質(zhì)控區(qū)和陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)。所述固相載體I由玻片，以及玻片上由下至上依次設(shè)置的氨基修飾層、醛基修飾層和瓊脂糖修飾層組成。在固相載體I上的四個(gè)角處分別設(shè)有一個(gè)陰性質(zhì)控區(qū)和一個(gè)陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)。每個(gè)陰性質(zhì)控區(qū)由五個(gè)組成一排的陰性對(duì)照點(diǎn)3構(gòu)成，陰性對(duì)照點(diǎn)3為BSA陰性對(duì)照點(diǎn)。每個(gè)陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)由五個(gè)組成一排的陽(yáng)性對(duì)照點(diǎn)2構(gòu)成，陽(yáng)性對(duì)照點(diǎn)2為二抗陽(yáng)性對(duì)照點(diǎn)。固相載體I的每個(gè)角處的陰性質(zhì)控區(qū)和陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)平行排列。在固相載體I的中部設(shè)置八種炎癥因子識(shí)別區(qū)，每種炎癥因子識(shí)別區(qū)均由五個(gè)組成一排的相應(yīng)的炎癥因子識(shí)別位點(diǎn)4構(gòu)成。固相載體I上設(shè)置的炎癥因子識(shí)別位點(diǎn)4有CRP識(shí)別位點(diǎn)、Myoglobin識(shí)別位點(diǎn)、cTnT識(shí)別位點(diǎn)、NT-proBNP識(shí)別位點(diǎn)、CK-MB識(shí)別位點(diǎn)、H-FABP識(shí)別位點(diǎn)、GPBB識(shí)別位點(diǎn)和D-Dimer識(shí)別位點(diǎn)。每個(gè)炎癥因子識(shí)別位點(diǎn)4及陽(yáng)性對(duì)照點(diǎn)2和陰性對(duì)照點(diǎn)3的體積均為1mm3。陰性質(zhì)控區(qū)中相鄰兩個(gè)陰性對(duì)照點(diǎn)3的距離為1.5mm ;陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)中相鄰兩個(gè)陽(yáng)性對(duì)照點(diǎn)2的距離為1.5mm ;炎癥因子識(shí)別區(qū)中相鄰兩個(gè)炎癥因子識(shí)別位點(diǎn)4的距離為1.5mm,并且炎癥因子識(shí)別位點(diǎn)4呈矩陣式排列。
[0021]蛋白質(zhì)芯片試劑盒的使用:
[0022]將IOOyL血清樣品鋪于蛋白質(zhì)芯片上，并將蛋白質(zhì)芯片放置于搖床上，室溫反應(yīng)lh。反應(yīng)結(jié)束后用PBST清洗蛋白質(zhì)芯片3次，每次5min。然后將500 μ L，0.5mg/mL的檢測(cè)劑鋪于蛋白質(zhì)芯片上進(jìn)行二次免疫反應(yīng)lh。反應(yīng)結(jié)束后用PBST清洗蛋白質(zhì)芯片并吹干，然后將蛋白質(zhì)芯片置于紫外成像儀中進(jìn)行圖像掃描，用圖像分析軟件QuantArraysoftwareversion3000進(jìn)行突光強(qiáng)度分析，并用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算血清樣品中CRP、Myoglobin、cTnT、NT-proBNP、CK-MB, H-FABP, GPBB 和 D-Dimer 的濃度。
[0023]以上所述僅以實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本實(shí)用新型的技術(shù)內(nèi)容，以便于讀者更容易理解，但不代表本實(shí)用新型的實(shí)施方式僅限于此，任何依本實(shí)用新型所做的技術(shù)延伸或再創(chuàng)造，均受本實(shí)用新型的保護(hù)。
【權(quán)利要求】
1.一種蛋白質(zhì)芯片，包括呈方形的固相載體(1)，其特征在于，所述固相載體(I)的四角處均設(shè)有一陰性質(zhì)控區(qū)和一陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)，所述固相載體(I)的中部設(shè)有至少一種炎癥因子識(shí)別區(qū)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種蛋白質(zhì)芯片，其特征在于，所述固相載體(I)的中部設(shè)有若干種炎癥因子識(shí)別區(qū)，所述每種炎癥因子識(shí)別區(qū)由五個(gè)同種炎癥因子識(shí)別位點(diǎn)(4)構(gòu)成。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述一種蛋白質(zhì)芯片，其特征在于，所述每個(gè)陰性質(zhì)控區(qū)由5個(gè)陰性對(duì)照點(diǎn)(3)組成；所述每個(gè)陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)由5個(gè)陽(yáng)性對(duì)照點(diǎn)(2)組成。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述一種蛋白質(zhì)芯片，其特征在于，所述炎癥因子識(shí)別位點(diǎn)(4)、陽(yáng)性對(duì)照點(diǎn)(2)和陰性對(duì)照點(diǎn)(3)在固相載體(I)上呈矩陣式排列。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述一種蛋白質(zhì)芯片，其特征在于，所述炎癥因子識(shí)別位點(diǎn)(4)、陽(yáng)性對(duì)照點(diǎn)(2 )和陰性對(duì)照點(diǎn)(3 )的體積均為Imm3。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述一種蛋白質(zhì)芯片，其特征在于，所述固相載體(I)由玻片，以及玻片上由下至上依次設(shè)置的氨基修飾層、醛基修飾層和瓊脂糖修飾層組成。
7.根據(jù)權(quán)利要求3-6任一項(xiàng)所述一種蛋白質(zhì)芯片，其特征在于，所述陰性對(duì)照點(diǎn)(3)為BSA陰性對(duì)照點(diǎn)，所述陽(yáng)性對(duì)照點(diǎn)(3)為二抗陽(yáng)性對(duì)照點(diǎn)。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述一種蛋白質(zhì)芯片，其特征在于，所述炎癥因子識(shí)別位點(diǎn)(4)包括CRP識(shí)別位點(diǎn)、Myoglobin識(shí)別位點(diǎn)、cTnT識(shí)別位點(diǎn)、NT-proBNP識(shí)別位點(diǎn)、CK-MB識(shí)別位點(diǎn)、H-FABP識(shí)別位點(diǎn)、GPBB識(shí)別位點(diǎn)和D-Dimer識(shí)別位點(diǎn)。
【文檔編號(hào)】G01N33/573GK203519614SQ201320639952
【公開(kāi)日】2014年4月2日 申請(qǐng)日期:2013年10月16日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月16日
【發(fā)明者】張二盈, 章國(guó)建 申請(qǐng)人:深圳市大愛(ài)醫(yī)療科技有限公司