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一種人工模擬的豬胃和小腸消化液及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種人工模擬的豬胃和小腸消化液及其制備方法與應(yīng)用。該制備方法包括如下步驟：將豬配合飼料和人工胃液按1g：3～3.5mL的配比混合，調(diào)pH至1.5～2.0，39±1℃振蕩1～2h，冷卻至4±1℃，8000～9000g 4±1℃離心5～10min，取上清液為人工模擬豬胃消化液；向離心所得沉淀中加入所述沉淀3倍體積的人工小腸液，調(diào)pH為6.8±0.2，39±1℃振蕩1～2h，冷卻至4±1℃，18000～20000g 4℃離心5～10min，取上清液為人工模擬豬小腸消化液。本發(fā)明人工模擬豬胃和小腸消化液，不但pH值、溫度等條件與豬消化道一致，而且通過(guò)對(duì)特定飼料的消化引入了飼料中的可溶性成分，與實(shí)際生產(chǎn)中豬消化液成分比較一致。本發(fā)明可對(duì)霉菌毒素吸附劑應(yīng)用于豬的吸附率進(jìn)行科學(xué)、客觀、準(zhǔn)確的體外評(píng)價(jià)，方法簡(jiǎn)單、快速。
【專利說(shuō)明】一種人工模擬的豬胃和小腸消化液及其制備方法與應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種人工模擬的豬胃和小腸消化液及其制備方法 與應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002]霉菌毒素吸附劑是一類具有吸附霉菌毒素能力的飼料添加劑，能夠在動(dòng)物消化道 內(nèi)與飼料中的霉菌毒素相結(jié)合，從而達(dá)到減少動(dòng)物胃腸道對(duì)霉菌毒素吸收，增加霉菌毒素 通過(guò)糞便排出的目的。其中，對(duì)特定霉菌毒素的吸附率是評(píng)價(jià)霉菌毒素吸附劑質(zhì)量?jī)?yōu)劣的 重要指標(biāo)。
[0003]目前，霉菌毒素吸附劑吸附率的評(píng)價(jià)主要有體外法和體內(nèi)法兩種。體外法一般以 不同pH值的磷酸緩沖液為介質(zhì)，測(cè)定吸附劑對(duì)某種霉菌毒素的吸附能力。這種方法比較簡(jiǎn) 單快速，但是緩沖液體系與動(dòng)物消化道環(huán)境相差甚遠(yuǎn)，沒(méi)有考慮飼料中其他成分影響，導(dǎo)致 評(píng)價(jià)結(jié)果可靠性差，只適用于吸附劑初步評(píng)價(jià)和吸附潛力篩選。體內(nèi)法通常采用動(dòng)物生產(chǎn) 性能或生物標(biāo)記物等間接指標(biāo)來(lái)評(píng)價(jià)吸附劑效果，因?yàn)楹芏嘁蛩睾驮囼?yàn)條件都可影響最終 結(jié)果，導(dǎo)致即使采用相同的評(píng)價(jià)方法，也常常產(chǎn)生不同的結(jié)果。而且，體內(nèi)法評(píng)價(jià)耗時(shí)長(zhǎng)，費(fèi) 用高，一般僅用于實(shí)用效果的驗(yàn)證，不能得出確切的吸附率。此外，直接采用動(dòng)物消化液如 胃液和小腸液進(jìn)行吸附劑評(píng)價(jià)是一個(gè)比較理想的方法。但是，由于動(dòng)物消化液難以獲取，而 且獲得的量非常有限，因此實(shí)際應(yīng)用中的可行性很差。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種人工模擬的豬胃和小腸消化液的制備方法。
[0005]本發(fā)明所提供的制備人工模擬豬胃消化液的方法，具體可包括如下步驟：將 豬配合飼料和人工胃液按照l(shuí)g :3?3· 5mL(如lg :3mL)的配比混合，并調(diào)節(jié)pH值至 1_5?2.0,39±1°C振蕩孵育1?2小時(shí)（如1小時(shí)），冷卻至4±rC，6000?9000g(如 9000g)4土1°C (如4? )離心5?10分鐘（如10分鐘），移取上清液即為人工模擬豬胃消 化液；
[0006]所述人工胃液的溶劑為水，溶質(zhì)及濃度為：NaCl 2g/L ;胃蛋白酶12160U/L ; HC10.084mol/L〇 ，
[0007]在所述方法中，所述調(diào)節(jié)pH值具體可為采用鹽酸進(jìn)行pH調(diào)節(jié)；所述震蕩的速度具 體為220rpra ;在所述冷卻至4±rC前還可包括靜置lmin的步驟。
[0008]在所述方法中，所述豬配合飼料是根據(jù)豬的飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)（營(yíng)養(yǎng)需要），將多種飼料 (包括添加劑）按一定比例和規(guī)定的加工工藝配制成的均勻一致、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值完全的飼料產(chǎn) 品。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述豬配合飼料為生豬育肥豬 （25?6〇kg)階段配合飼 料。具體的，其原料組成為：玉米67_ 6%、豆柏lg· 6%、魚粉1 %、小麥麩4%、棉籽柏4%、 食鹽0_ 4%、磷酸氫鈣L 4%、石粉〇· 75%、賴氨酸〇· 25%、復(fù)合預(yù)混料1% (各百分含量均 為質(zhì)量百分含量）。其中，每千克所述復(fù)合預(yù)混料的組成為：維生素 Α3· 3χ 1〇5ιυ，維生素 D 3_3X104IU,維生素 E 2.4X103IU，維生素 K 3〇75mg，維生素 BJSOmg，維生素 B2525mg，維 生素 Bs225mg，維生素 B123mg，泛酸15〇〇mg，尼克酸2250mg，生物素8mg，葉酸45mg,錳6g，鐵 15g，鋅 15g，Cu 900mg,碘 21mg,硒 45mg。
[0009]本發(fā)明所提供的制備人工模擬豬小腸消化液的方法，具體可包括如下步驟：向權(quán) 利要求1所述方法中離心所得的沉淀中加入所述沉淀3?3. 5倍（如3倍）體積的人工小腸 液，并調(diào)節(jié)pH值為6· 8 ± 0· 2, 39 ± 1 °C振蕩孵育1?2小時(shí)（如1小時(shí)），冷卻至4 ± 1? (如 4°C )，6000?9000g(如9000g)4±lt；(如4Γ )離心5?10分鐘（如10分鐘），移取上 清液即為人工模擬豬小腸消化液；
[0010]所述人工小腸液的溶劑為水，溶質(zhì)及濃度為：磷酸二氫鉀6. 8g/L;胰蛋白酶 6000U/L ;胰淀粉酶70000U/L ;胰脂肪酶40000U/L ;豬膽鹽3g/L ;采用氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液PH 至 6. 8±0. 2。
[0011]所述豬膽鹽含量以膽酸計(jì)彡60%，酸值（mg ΚΟΗ/g)彡145. 0。
[0012]在所述方法中，所述震蕩的速度具體為220rpm ;在所述冷卻至4±1? (如4? ) 前還可包括靜置lmin的步驟；用于調(diào)節(jié)所述人工小腸液ΡΗ的氫氧化鈉具體為〇. m氫氧化 鈉。
[0013]本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種人工模擬豬胃消化液和人工模擬豬小腸消化液。
[0014] 本發(fā)明所提供的人工模擬豬胃消化液具體為采用如上所述方法制備得到的人工 模擬豬胃消化液。
[0015] 本發(fā)明所提供的人工模擬豬小腸消化液具體為采用如上所述方法制備得到的人 工模擬豬小腸消化液。
[0016]本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供所述人工模擬豬胃消化液和/或所述人工模擬豬小 腸消化液的用途。
[0017]本發(fā)明所提供的用途具體為所述人工模擬豬胃消化液和/或所述人工模擬豬小 腸消化液在測(cè)定霉菌毒素吸附劑對(duì)霉菌毒素的吸附率中的應(yīng)用。
[0018] 本發(fā)明的第四個(gè)目的是提供一種測(cè)定霉菌毒素吸附劑對(duì)霉菌毒素的吸附率的方 法。
[0019] 本發(fā)明所提供的測(cè)定霉菌毒素吸附劑對(duì)霉菌毒素的吸附率的方法，具體可包括如 下步驟：
[0020] (1)分別進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn)組和基質(zhì)校正組：
[0021] 實(shí)驗(yàn)組：按照4mg :5mL的比例取待測(cè)霉菌毒素吸附劑和人工模擬豬消化液（所述 人工模擬豬胃消化液或所述人工模擬豬小腸消化液），與霉菌毒素溶液混合，于 39±rc震 蕩孵育1?2小時(shí)（如1小時(shí)），孵育后冷卻至4±l°c (如4°C );
[0022] 基質(zhì)校正組：與所述實(shí)驗(yàn)組相比，缺少所述待測(cè)霉菌毒素吸附劑，其余均與所述實(shí) 驗(yàn)組相同；
[0023] (2)將經(jīng)步驟（1)處理后的所述實(shí)驗(yàn)組和所述基質(zhì)校正組的體系分別進(jìn)行離心、 取上清液檢測(cè)所述霉菌毒素的濃度；
[0024]將所述實(shí)驗(yàn)組的上清液中所述霉菌毒素的濃度記為Ceq ;將所述基質(zhì)校正組的上 清液中所述霉菌毒素的濃度記為C。；
[0025] (3)按照如下公式計(jì)算所述霉菌毒素吸附劑在所述人工模擬豬消化液環(huán)境下對(duì)所 述霉菌毒素的吸附率：
[0026] Y =(卜Ceq/C。）X 100°%，式中Y即為所述霉菌毒素吸附劑在所述人工模擬豬消化 液環(huán)境下對(duì)所述霉菌毒素的吸附率。
[0027]在所述方法的步驟（1)中，所述待測(cè)霉菌毒素吸附劑、所述人工模擬豬消化液和 所述霉菌毒素的配比具體可為4mg :5mL :8〇Ong ;所述震蕩的速度具體為220rpm。
[0028]在所述方法的步驟⑵中，所述離心具體為18000?20000g(如 18928g)4±rC (如 4。(：）離心 5 ?lOmin(如 5min)。
[0029]在所述方法的步驟（2)中，檢測(cè)所述上清液中霉菌毒素的濃度是利用液相色 譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測(cè)的。
[0030]其中，色譜條件為：C18色譜柱；流動(dòng)相由流動(dòng)相A和流動(dòng)相B組成；流動(dòng)相A為 0. 2mM乙酸銨水溶液，流動(dòng)相b為0· 1%甲酸-甲醇（含有〇· 1%體積分?jǐn)?shù)甲酸的甲醇溶 液）。洗脫方式為梯度洗脫；所述梯度洗脫具體為：〇?〇· 5min，90% A ;0. 5?1. 5min，70% Α ;1· 5 ?2. 5min，40% Α ;2· 5 ?3· 5min,30% Α ;3· 5 ?4. 0min，20% Α ;4· 0 ?4· 2min，90% A ;4. 2?5· 0min，90% Α(梯度洗脫中各百分含量均為體積百分含量）。另外，柱溫40°C、進(jìn) 樣量 5 μ L 流速 0. 40mL/min。
[0031]質(zhì)譜條件為：電噴霧離子源（ESI),離子源溫度為15(TC,脫溶劑溫度為45(TC,脫 溶劑氣和錐孔氣均為N2，脫溶劑氣流速為9〇OL/h，錐孔氣流速為20L/h。AFBi和DON采用正 離子監(jiān)測(cè)，ZEA采用負(fù)離子監(jiān)測(cè)方式，毛細(xì)管電壓為〇.75kV。采用MRM多反應(yīng)監(jiān)測(cè)方式檢 測(cè)，定量監(jiān)測(cè)離子317. 22 > 175· 06 (錐孔電壓38V，碰撞能量26eV)，定量監(jiān)測(cè)離子317. 22 > 187· 12 (錐孔電壓38V，碰撞能量22eV)。
[0032] 本發(fā)明的第五個(gè)目的是提供一種用于測(cè)定霉菌毒素吸附劑對(duì)霉菌毒素的吸附率 的廣品。
[0033]本發(fā)明所提供的用于測(cè)定霉菌毒素吸附劑對(duì)霉菌毒素的吸附率的產(chǎn)品，包含所述 人工模擬豬胃消化液和/或所述人工模擬豬小腸消化液。
[0034] 在如上所述的應(yīng)用、方法或產(chǎn)品中，所述霉菌毒素均具體可為玉米赤霉烯酮；所述 霉菌毒素吸附劑均可為蒙脫石類霉菌毒素吸附劑或酵母細(xì)胞壁類霉菌毒素吸附劑。
[0035]本發(fā)明的第六個(gè)目的是提供人工胃液和人工小腸液。
[0036]本發(fā)明所提供的人工胃液，溶劑為水，溶質(zhì)及濃度為：NaCl 2g/L;胃蛋白酶 12160U/L ；HC1 0.084mol/L〇
[0037]本發(fā)明所提供的人工小腸液，溶劑為水，溶質(zhì)及濃度為：磷酸二氫鉀6. 8g/L ;胰蛋 白酶6000U/L ;胰淀粉酶70000U/L ;胰脂肪酶40000U/L ;豬膽鹽3g/L ;采用氫氧化鈉（如 0. 1M氫氧化鈉）調(diào)節(jié)溶液pH至6. 8 ±0. 2。
[0038]所述人工胃液在制備所述人工模擬豬胃消化液中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范 圍。
[0039] 所述人工小腸液在制備所述人工模擬豬小腸消化液中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保 護(hù)范圍。
[0040]實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明所提供的人工模擬豬胃消化液和人工模擬豬小腸消化液用于評(píng) 價(jià)霉菌毒素吸附的吸附率，不但pH值、溫度等條件與豬消化道一致，而且通過(guò)對(duì)特定飼料 的消化引入了飼料中的可溶性成分，與實(shí)際生產(chǎn)中豬消化液成分比較一致，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)磷酸 鹽緩沖體系對(duì)豬消化道的模擬水平。在霉菌毒素吸附劑評(píng)價(jià)時(shí)，只需向人工模擬豬胃消化 液和小腸液中按相應(yīng)比例分別添加霉菌毒素吸附劑和目標(biāo)霉菌毒素，經(jīng)振蕩、孵育、離心 后，測(cè)定上清液中霉菌毒素濃度與初始濃度，g卩可計(jì)算出霉菌毒素吸附劑對(duì)特定霉菌毒素 的吸附率，從而對(duì)霉菌毒素吸附劑的效果做出評(píng)價(jià)。本發(fā)明可以對(duì)霉菌毒素吸附劑應(yīng)用于 豬的吸附率進(jìn)行科學(xué)、客觀、準(zhǔn)確的體外評(píng)價(jià)，方法簡(jiǎn)單、快速。 '、

【具體實(shí)施方式】
[0041] 下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。
[0042] 下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等,如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0043]胃蛋白酶：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品，Cas號(hào)：9001-75-6。其酶活為3800U/ g°
[0044]胰酶：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司公司產(chǎn)品，Cas號(hào)：8049-47-6。其酶活為胰蛋白 酶600U/g ;胰淀粉酶7000U/g ;胰脂肪酶4000U/g。
[0045]豬膽鹽：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司公司產(chǎn)品，Cas號(hào)：8008-63-7。含量彡60.0% (以膽酸計(jì)）；酸值彡145· 0(K0Hmg/g);灼燒殘?jiān)?0. 0%。
[0046]豬配合飼料：根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《仔豬、生長(zhǎng)肥育豬配合詞料》（GB/T 5915-2008)自行 配制，配方為：玉米67. 6%、豆粕19. 6%、魚粉1 %、小麥麩4%、棉籽柏4%、食鹽0· 4%、磷 酸氫鈣1· 4%、石粉0. 75%、賴氨酸0· 25%、復(fù)合預(yù)混料1% (各百分含量均為質(zhì)量百分含 量）。其中，每千克所述復(fù)合預(yù)混料的組成為：維生素 A 3. 3X105IU，維生素 D 3.3X104IU， 維生素 Ε 2·4Χ103?υ，維生素 K 3075mg，維生素 BJSOmg，維生素 B2525mg，維生素 B6225mg， 維生素 B123mg,泛酸1500mg，尼克酸2250mg，生物素8mg，葉酸45mg，錳6g，鐵15g，鋅15g，Cu 900mg，碘 21mg，硒 45mg。
[0047] 實(shí)施例1、人工模擬豬胃消化液和人工模擬豬小腸消化液的制備
[0048] 一、人工胃液和人工小腸液的配制
[0049] 1、人工胃液的配制
[0050] 稱取氯化鈉2§，胃蛋白酶3_28(相當(dāng)于121601])，量取質(zhì)量分?jǐn)?shù)為36.5%濃鹽酸 (摩爾濃度相當(dāng)于12mol/L)7mL，加蒸餾水至lOOOmL,混勻，制得所需溶液，4°C保存。
[0051] 2、人工小腸液的配制
[0052] 稱取磷酸二氫鉀6. 8g，加蒸餾水500mL使溶解，用0· lmol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH 至6. 8,稱取胰酶10g (相當(dāng)于胰蛋白酶6000U/L ;胰淀粉酶70000U/L ;胰脂肪酶40000U/L)， 加蒸餾水使溶解，將兩液混合后，另加3g豬膽鹽，加蒸餾水稀釋至lOOOmL，制得所需溶液， 4°C保存。
[0053] 二、人工模擬豬胃消化液和人工模擬豬小腸消化液的配制
[0054] 1、人工模擬豬胃消化液的配制
[0055] l〇g豬配合飼料中添加30ml步驟一配制的人工胃液，用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1.5? 2. 0,置于39 土 1°C恒溫振蕩器中220rpm孵育lh，靜置lmin并迅速冷卻至4土 1?，轉(zhuǎn)移上清 液并10000rpm(相當(dāng)于9000g)4°C離心lOmin，收集上清液（即為人工模擬豬胃消化液）于 1000mL試劑瓶，4 °C保存待用。
[0056] 2、人工模擬豬小腸消化液的配制
[0057]向以上步驟1制備人工模擬豬胃消化液所得的沉淀中加入3〇ml步驟一配制的人 工小腸液，置于39土 1°C恒溫振蕩器中22〇rpm孵育lh，靜置lmin并迅速冷卻至4±1?，轉(zhuǎn) 移上清液并10000rpm(相當(dāng)于9000g)4t：離心lOmin，收集上清液（即為人工模擬豬小腸消 化液）于lOOOmL試劑瓶，4°C保存待用。
[0058]實(shí)施例2、人工模擬豬胃和小腸消化液評(píng)價(jià)霉菌毒素吸附劑對(duì)霉菌毒素的體外吸 附率
[0059] 供試霉菌毒素：玉米赤霉烯酮，CAS號(hào)：17924-92_4,純度彡99 %，以色列 FERMENTEK 公司。
[0060]供試霉菌毒素吸附劑：市售8種蒙脫石類霉菌毒素吸附劑（表1和表2中的蒙脫 石1#至蒙脫石8#)和5種酵母細(xì)胞壁類霉菌毒素吸附劑（表！和表2中的酵母細(xì)胞壁1# 至酵母細(xì)胞壁5#)，其中8種蒙脫石類霉菌毒素吸附劑購(gòu)自浙江三鼎科技有限公司、攀枝花 興加環(huán)保技術(shù)有限公司、赤峰和正美化工有限公司、赤峰市物華天寶礦物材料有限公司、浙 江豐虹新材料股份有限公司、壽光中聯(lián)精細(xì)蒙脫石有限公司、內(nèi)蒙古天源蒙脫石開發(fā)有限 公司、內(nèi)蒙古潤(rùn)隆化工有限責(zé)任公司； 5種酵母細(xì)胞壁類霉菌毒素吸附劑購(gòu)自廣東江門生 物技術(shù)開發(fā)中心有限公司、北京優(yōu)利保生物科技與技術(shù)有限責(zé)任公司、巴西ICC公司、上海 滬鼎生物科技有限公司、安琪酵母股份有限公司。
[0061] -、人工模擬豬胃消化液評(píng)價(jià)霉菌毒素吸附劑對(duì)玉米赤霉烯酮的體外吸附率
[0062]移取玉米赤霉烯酮的乙腈溶液（2〇yg/mL)40yL于旋蓋塑料離心管中，4(TC 氮?dú)獯蹈?，加?mL實(shí)施例1配制的人工模擬豬胃消化液復(fù)溶，再向其中準(zhǔn)確加入供試 霉菌毒素吸附劑4mg，渦旋混勻lmin，迅速水浴加熱至39±rC，然后置于恒溫振蕩器中 39±l°C，220rpm震蕩孵育lh，立即取出冷卻靜置至4°C。取lmL上清液至1. 5mL離心管中， 13000rpm (相當(dāng)于18928g) 4°C離心5min，取50 μ L上清液與450 μ L進(jìn)樣液（水-乙腈-甲 酸，95:4. 9:0. 1，V/V/V)渦旋混勻，應(yīng)用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定平衡后體系中游離玉米 赤霉烯酮的濃度。
[^63]其中，應(yīng)用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定平衡后體系中游離玉米赤霉烯酮的濃度時(shí) 采用的是外標(biāo)法。具體的色譜和質(zhì)譜條件如下：色譜條件為Acquity UPLC BEH C18色譜 柱（2. lmmX 100mm，1. 7 μ m，美國(guó) Waters 公司）；柱溫 40°C，流速 0. 40mL/min，進(jìn)樣量 5 μ L。 流動(dòng)相Α為0· 2mM乙酸銨水溶液，流動(dòng)相Β為〇. 1 %甲酸-甲醇（即甲酸和甲醇的體積比 為 0· 1:99. 9)。梯度洗脫：〇 ?〇. 5min，90% A ;0. 5 ?1. 5min，70% Α ;1· 5 ?2. 5min，40% Α ;2· 5 ?3. 5min，30% A ;3. 5 ?4. Omin，20% A ;4. 0 ?4. 2min,90% Α ;4· 2 ?5. Omin,90% A(梯度洗脫中各百分含量均為體積百分含量）。質(zhì)譜條件為：電噴霧離子源（ESI)，離子源 溫度為150°C，脫溶劑溫度為45(TC，脫溶劑氣和錐孔氣均為N 2，脫溶劑氣流速為900L/h，錐 孔氣流速$ 20L/h。AFBi和DON采用正離子監(jiān)測(cè)，ZEA采用負(fù)離子監(jiān)測(cè)方式，毛細(xì)管電壓為 0· 75kV。采用MRM多反應(yīng)監(jiān)測(cè)方式檢測(cè)，定量監(jiān)測(cè)離子317. 22 > 175. 06 (錐孔電壓38V，碰 撞能量26eV)，定量監(jiān)測(cè)離子317. 22 > 187. 12(錐孔電壓38V，碰撞能量22eV)。
[0064] 每種吸附劑5個(gè)平行，并設(shè)不添加霉菌毒素吸附劑的基質(zhì)校正組（其余操作參見(jiàn) 上文）。
[0065] 吸附率（％ )的計(jì)算公式為：
[0066] Y = α-Ceq/C。）X 100%，式中Y為吸附率，c。為毒素初始（即基質(zhì)校正組）濃度， Ceq為平衡后體系中游離毒素的濃度。
[0067]實(shí)驗(yàn)同時(shí)設(shè)置以等量取自飼喂所述豬配合飼料的真正的豬胃消化液替代上述方 法中實(shí)施例1配制的人工模擬豬胃消化液的對(duì)照試驗(yàn)，以便本發(fā)明所提供的人工模擬豬胃 消化液進(jìn)行驗(yàn)證。
[0068] 結(jié)果顯示：應(yīng)用實(shí)施例1配制的人工模擬豬胃消化液對(duì)市售8種蒙脫石類吸附劑 和5種酵母細(xì)胞壁類霉菌毒素吸附劑進(jìn)行評(píng)價(jià)，2類產(chǎn)品在人工模擬豬胃消化液中的玉米 赤霉烯酮吸附率分別為13. 67%?29· 97%和18· 56%?38. 96% (表1)。該評(píng)價(jià)結(jié)果與采 用豬實(shí)際豬胃消化液測(cè)得的吸附率基本一致，沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的顯著差異，表明實(shí)施例i 配制的人工模擬豬胃消化液適于霉菌毒素吸附劑吸附率的評(píng)價(jià)。
[0069] 表1霉菌毒素吸附劑在人工模擬和實(shí)際豬胃液中對(duì)玉米赤霉烯酮的吸附率（n二 5)
[0070]

【權(quán)利要求】
1. 一種制備人工模擬豬胃消化液的方法，包括如下步驟：將豬配合飼料和人工胃液按 照l(shuí)g :3?3. 5mL的配比混合，并調(diào)節(jié)pH值至1. 5?2. 0,39±1°C振蕩孵育1?2小時(shí)，冷 卻至4± 1 °C，8000-9000g 4± 1 °C離心5?10分鐘，移取上清液即為人工模擬豬胃消化液； 所述人工胃液的溶劑為水，溶質(zhì)及濃度為：NaCl 2g/L ;胃蛋白酶12160U/L ; HC10. 084mol/L。
2. -種制備人工模擬豬小腸消化液的方法，包括如下步驟：向權(quán)利要求1所述方法中 離心所得的沉淀中加入所述沉淀3?3. 5倍體積的人工小腸液，并調(diào)節(jié)pH值為6. 8±0. 2， 39 ± 1 °C振蕩孵育1?2小時(shí)，冷卻至4± 1 °C，8000-9000g 4± 1 °C離心5?10分鐘，移取上 清液即為人工模擬豬小腸消化液； 所述人工小腸液的溶劑為水，溶質(zhì)及濃度為：磷酸二氫鉀6. 8g/L ;胰蛋白酶6000U/ L ;胰淀粉酶70000U/L ;胰脂肪酶40000U/L ;豬膽鹽3g/L ;采用氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH至 6. 8±0. 2。
3. 利用權(quán)利要求1所述方法制備得到的人工模擬豬胃消化液。
4. 利用權(quán)利要求2所述方法制備得到的人工模擬豬小腸消化液。
5. 權(quán)利要求3所述的人工模擬豬胃消化液和/或權(quán)利要求4所述的人工模擬豬小腸消 化液在測(cè)定霉菌毒素吸附劑對(duì)霉菌毒素的吸附率中的應(yīng)用。
6. -種測(cè)定霉菌毒素吸附劑對(duì)霉菌毒素的吸附率的方法，包括如下步驟： (1) 分別進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn)組和基質(zhì)校正組： 實(shí)驗(yàn)組：按照4mg :5mL的比例取待測(cè)霉菌毒素吸附劑和人工模擬豬消化液，與霉菌毒 素溶液混合，于39±1°C震蕩孵育1?2小時(shí)，孵育后冷卻至4±1°C ; 基質(zhì)校正組：與所述實(shí)驗(yàn)組相比，缺少所述待測(cè)霉菌毒素吸附劑，其余均與所述實(shí)驗(yàn)組 相同； 所述人工模擬豬消化液為權(quán)利要求3所述的人工模擬豬胃消化液或權(quán)利要求4所述的 人工模擬豬小腸消化液； (2) 將經(jīng)步驟（1)處理后的所述實(shí)驗(yàn)組和所述基質(zhì)校正組的體系分別進(jìn)行離心、取上 清液檢測(cè)所述霉菌毒素的濃度； 將所述實(shí)驗(yàn)組的上清液中所述霉菌毒素的濃度記為Ceq ;將所述基質(zhì)校正組的上清液 中所述霉菌毒素的濃度記為Q; (3) 按照如下公式計(jì)算所述霉菌毒素吸附劑對(duì)所述霉菌毒素的吸附率： Y = (l-Ceq/Q) X100%，式中Y即為所述霉菌毒素吸附劑對(duì)所述霉菌毒素的吸附。
7. -種用于測(cè)定霉菌毒素吸附劑對(duì)霉菌毒素的吸附率的產(chǎn)品，包含權(quán)利要求3所述的 人工模擬豬胃消化液和/或權(quán)利要求4所述的人工模擬豬小腸消化液。
8. 根據(jù)權(quán)利要求5-7中任一所述的應(yīng)用、方法或產(chǎn)品，其特征在于：所述霉菌毒素為玉 米赤霉烯酮。
9. 人工胃液，其特征在于：所述人工胃液的溶劑為水，溶質(zhì)及濃度為：NaCl 2g/L;胃蛋 白酶 12160U/L;HC1 0.084mol/L;或 人工小腸液，其特征在于：所述人工小腸液的溶劑為水，溶質(zhì)及濃度為：磷酸二氫鉀 6. 8g/L ;胰蛋白酶6000U/L ;胰淀粉酶70000U/L ;胰脂肪酶40000U/L ;豬膽鹽3g/L ;采用氫 氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH至6. 8 ±0. 2。
10.權(quán)利要求9所述的人工胃液在制備權(quán)利要求3所述的人工模擬豬胃消化液中的應(yīng) 用；或 權(quán)利要求10所述的人工小腸液在制備權(quán)利要求4所述的人工模擬豬小腸消化液中的 應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK104297372SQ201410524274
【公開日】2015年1月21日 申請(qǐng)日期:2014年10月8日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月8日
【發(fā)明者】王瑞國(guó), 蘇曉鷗, 樊霞, 王培龍, 張維, 高忠武, 張瑜 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所