一種gc-ms靶向性煙草樣品甾醇提取方法
【專(zhuān)利摘要】一種GC-MS靶向性煙草樣品甾醇提取方法，包括以下工藝步驟：1）煙草樣品冷凍凍干，粉碎機(jī)打碎；2）粉碎好樣品50mg加入正己烷1.5ml，超聲提?。?）提取完樣品室溫高速離心，上清轉(zhuǎn)移到色譜瓶，氮?dú)獯蹈桑瑸橐唬?）沉淀加80%甲醇、20%KOH溶液1.2ml；5）高速離心，取上清轉(zhuǎn)移至色譜瓶，加正己烷1.0ml，震蕩、靜置；6）取上清，加飽和NaCl1.0ml，取上清為溶液二，一二合并，氮?dú)獯蹈桑勇确?.5ml溶解后，即為專(zhuān)一適于GC-MS測(cè)定的煙草樣品甾醇上樣分析溶液。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：提供了一種最適合煙草葉片甾醇的提取方法；樣品用量少，僅為50mg；有機(jī)試劑使用種類(lèi)少，使用量少，相對(duì)便宜，毒性較小；提取時(shí)間更短，樣品重現(xiàn)性較好。
【專(zhuān)利說(shuō)明】—種GC-MS靶向性煙草樣品留醇提取方法
[0001]
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本發(fā)明涉及煙草代謝組學(xué)新鮮煙葉樣品留醇提取方法，具體是一種GC-MS靶向性煙草樣品留醇提取方法，本發(fā)明以GC-MS為分析平臺(tái)，采用了 SIM離子模式，分析出適合煙草葉片留醇的最佳提取方法。
【背景技術(shù)】
[0003]植物留醇是一類(lèi)廣泛存在于自然界中的留體化合物，屬于飽和或不飽和的仲醇，以往人們針對(duì)動(dòng)物留醇類(lèi)物質(zhì)的研究較多，而對(duì)植物留醇有所忽視。煙草中含有多種甾醇類(lèi)化合物，主要為膽留醇、豆留醇、菜油留醇和β -谷留醇等，是構(gòu)成煙葉油分的主要成分之一。但當(dāng)煙葉在燃吸時(shí)，留醇的母體多環(huán)結(jié)構(gòu)也可形成稠環(huán)芳烴，如豆留醇在750°C下熱解生成苯并[α ]]^(Stedman R L, 1968),因此分析煙草中的植物留醇對(duì)卷煙減害降焦研究十分必要。盡可能多的一次檢測(cè)到鮮煙葉樣品中的留醇化合物，并準(zhǔn)確定性定量，為煙草代謝組學(xué)研究提供技術(shù)支撐。煙草中常見(jiàn)留醇的分析方法有衍生化氣相色譜法、高效液相色譜法、毛細(xì)管電泳法、超臨界流體色譜法和氣質(zhì)聯(lián)用法等。
[0004]代謝組學(xué)研究中最容易引入系統(tǒng)誤差的是樣品制備過(guò)程，其它植物留醇通常用有機(jī)溶劑(如甲醇和氯仿等)提取。目前還沒(méi)有新鮮煙葉留醇通用的抽提方法，只能根據(jù)其它植物及烤后煙葉的提取方法，結(jié)合使用的檢測(cè)方法(GC-MS)，建立新鮮煙葉留醇通用提取方法。
[0005]因此建立一種簡(jiǎn)單、重現(xiàn)性好的新鮮煙葉留醇提取方法很有必要，可為后期甾醇的定性定量提供保障，也為煙草代謝組學(xué)研究提供技術(shù)支持。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0006]本發(fā)明的目的正是基于上述現(xiàn)有技術(shù)狀況而專(zhuān)門(mén)提供的一種GC-MS靶向性煙草樣品甾醇提取方法，利用該方法可實(shí)現(xiàn)鮮煙葉樣品甾醇的快速、有效提取，且具有提取簡(jiǎn)單、重現(xiàn)性好的特點(diǎn)。
[0007]本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的: 一種GC-MS靶向性煙草樣品留醇提取方法，包括以下工藝步驟:
1)煙草樣品冷凍凍干(凍干機(jī)凍干溫度為_(kāi)40°C)，粉碎機(jī)打碎；
2)粉碎好樣品50mg加入正己烷1.5ml，25°C下超聲提取20 min ；
3)提取完樣品室溫(20°C)高速離心，上清轉(zhuǎn)移到色譜瓶，氮?dú)獯蹈桑瑸橐唬?br>
4)沉淀加80% 甲醇、20%K0H 溶液 1.2ml, 700C 30min ；
5)高速離心，取上清轉(zhuǎn)移至色譜瓶，加正己烷1.0ml，震蕩、靜置；
6)取上清，加飽和NaCl1.0ml，取上清為溶液二，一二合并，氮?dú)獯蹈桑勇确?.5 ml溶解后，即為專(zhuān)一適于GC-MS測(cè)定的煙草樣品留醇上樣分析溶液。
[0008]在本發(fā)明中我，所述煙草樣品為新鮮煙草葉片。[0009]步驟3)、5)中的高速離心時(shí)離心速率為12000rpm，時(shí)間lOmin，所用的色譜瓶為尖
底色譜瓶(以便于溶液混合和氮?dú)獯蹈?。
[0010]本發(fā)明提取時(shí)所用抽提溶液為正己烷，相對(duì)其他溶劑(氯仿等)，因正己烷密度小(0.6594g/ml)、揮發(fā)性小、毒性小，便于煙葉樣品沉淀離心，也利于提高樣品檢測(cè)重復(fù)性，減少對(duì)操作人員的毒害。
[0011]本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn):
1.提供了一種最適合煙草葉片留醇的提取方法。
[0012]2.樣品用量少，僅為50mg。
[0013]3.有機(jī)試劑使用種類(lèi)少，使用量少，相對(duì)便宜，毒性較小。
[0014]4.提取時(shí)間短，樣品重現(xiàn)性好。
【專(zhuān)利附圖】
【附圖說(shuō)明】
[0015]圖1為本發(fā)明工藝流程圖。
[0016]圖2為本提取方法的實(shí)驗(yàn)樣本植物甾醇的色譜峰圖。
[0017]圖3為采用本發(fā)明方法對(duì)中煙100成熟期新鮮煙葉進(jìn)行6次重復(fù)的植物留醇色譜峰圖。
【具體實(shí)施方式】
[0018]本發(fā)明以下結(jié)合實(shí)施例作進(jìn)一步描述 實(shí)施案例
I)本提取方法的實(shí)驗(yàn)樣本留醇的色譜峰圖
采用該方法對(duì)2012年河南中煙100新鮮煙葉樣品進(jìn)行提取，通過(guò)GC-MS (SIM)法分析，色譜峰如圖2所示，可明確定性7種留醇(依據(jù)已有標(biāo)樣，1、2為內(nèi)標(biāo))，已經(jīng)為所見(jiàn)文獻(xiàn)中最多。本發(fā)明所確立的提取方法:以正己烷作為提取溶劑(便于煙葉樣品沉淀離心，利于提高樣品檢測(cè)重復(fù)性，減少對(duì)操作人員的毒害)，超聲提取20min，80%甲醇、20%K0H溶液作為皂化劑，飽和氯化鈉溶液洗滌。
[0019]2)方法重復(fù)性考查
采用該方法對(duì)中煙100成熟期新鮮煙葉進(jìn)行了 6次重復(fù)的進(jìn)樣分析，分析結(jié)果見(jiàn)圖3，隨機(jī)序列分析中，單獨(dú)提取的6次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，重現(xiàn)性好。
【權(quán)利要求】
1.一種GC-MS靶向性煙草樣品留醇提取方法，其特征在于:包括以下工藝步驟:1)煙草樣品冷凍凍干，粉碎機(jī)打碎； 2)粉碎好樣品50mg加入正己烷1.5ml，25°C下超聲提取20 min ； 3)提取完樣品室溫(20°C)高速離心，上清轉(zhuǎn)移到色譜瓶，氮?dú)獯蹈?，為一? 4)沉淀加80% 甲醇、20%K0H 溶液 1.2ml, 700C 30min ； 5)高速離心，取上清轉(zhuǎn)移至色譜瓶，加正己烷1.0ml，震蕩、靜置； 6)取上清，加飽和NaCl1.0ml，取上清為溶液二，一二合并，氮?dú)獯蹈?，加氯?.5 ml溶解后，即為專(zhuān)一適于GC-MS測(cè)定的煙草樣品留醇上樣分析溶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的GC-MS靶向性煙草樣品留醇提取方法，其特征在于:所述煙草樣品為新鮮煙草葉片。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的GC-MS靶向性煙草樣品留醇提取方法，其特征在于:步驟3)、5)中的高速離心時(shí)離心速率為12000rpm,時(shí)間lOmin。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的GC-MS靶向性煙草樣品留醇提取方法，其特征在于:步驟3)、5)中所用的色譜瓶為尖底色譜瓶(以便于溶液混合和氮?dú)獯蹈?。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的GC-MS靶向性煙草樣品留醇提取方法，其特征在于:冷凍凍干時(shí)的凍干機(jī)凍干溫度為_(kāi)40°`C。
【文檔編號(hào)】G01N30/06GK103713072SQ201410004090
【公開(kāi)日】2014年4月9日 申請(qǐng)日期:2014年1月6日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月6日
【發(fā)明者】翟妞, 陳千思, 劉萍萍, 金立鋒, 周會(huì)娜, 陳霞, 趙閣, 張麗, 王曉瑜, 孫世豪 申請(qǐng)人:中國(guó)煙草總公司鄭州煙草研究院
山東科威數(shù)控機(jī)床有限公司銑床官方網(wǎng)站今天是：2024-10-23切換城市[全國(guó)]-網(wǎng)站地圖
專(zhuān)業(yè)數(shù)控銑床產(chǎn)品供應(yīng)商
20年生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)，實(shí)力工廠，精工品質(zhì)，質(zhì)量有保障
