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一種腸炎寧制劑的檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種腸炎寧制劑的檢測(cè)方法，該方法包括采用高效液相色譜法測(cè)定煙花苷含量的方法。
【專利說明】一種腸炎寧制劑的檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，特別涉及一種腸炎寧制劑的檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]收載于2010年版《中華人民共和國藥典》的腸炎寧糖漿和腸炎寧片具有清熱利濕、行氣的功效，用于急、慢性胃腸炎，腹灣，細(xì)菌性痢疾，小兒消化不良等，臨床應(yīng)用廣泛、療效確切。近幾年，國家食品藥品監(jiān)督管理局又新批準(zhǔn)了腸炎寧丸、腸炎寧顆粒、腸炎寧膠囊、腸炎寧咀嚼片等劑型。目前已有報(bào)道中，腸炎寧制劑質(zhì)量檢測(cè)指標(biāo)成分為東莨菪內(nèi)酯、沒食子酸和雞屎藤苷甲酯，而腸炎寧制劑中含量較高的黃酮類成分沒有明確的檢測(cè)指標(biāo)成分。現(xiàn)代藥理研究表明黃酮類成分具有很強(qiáng)的包括抗炎等生理活性，對(duì)腸炎寧制劑中的黃酮類成分進(jìn)行檢測(cè)，有助于進(jìn)一步提高腸炎寧制劑的質(zhì)量和療效。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于提供一種腸炎寧制劑的檢測(cè)方法，本發(fā)明提供的檢測(cè)方法有助于進(jìn)一步提聞腸炎寧制劑的質(zhì)量和療效。
[0004]本發(fā)明提供的檢測(cè)方法包括采用高效液相色譜法測(cè)定煙花苷含量的方法。
[0005]本發(fā)明采用高效液相色譜法測(cè)定腸炎寧制劑中煙花苷含量所選用的色譜條件為:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈一用酸調(diào)PH值至2-4的水溶液或甲醇一用酸調(diào)PH值至2-4的水溶液為流動(dòng)相；柱溫為20?40°C ;檢測(cè)波長為260?275nm或330?360nmo
[0006]本發(fā)明采用高效液相色譜法測(cè)定腸炎寧制劑中煙花苷含量優(yōu)選的色譜條件為:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比例為81:19?79:21的乙腈一0.3%冰醋酸水溶液為流動(dòng)相；柱溫為20?40°C ;檢測(cè)波長為260?275nm或330?360nm。
[0007]本發(fā)明所述的腸炎寧制劑為腸炎寧口服液、腸炎寧糖漿、腸炎寧膠囊、腸炎寧顆粒、腸炎寧片、腸炎寧咀嚼片或腸炎寧丸中的任意一種。
[0008]本發(fā)明創(chuàng)新之處在于:通過對(duì)腸炎寧制劑黃酮類成分的研究，從中分離得到并鑒定其中I個(gè)黃酮類化合物為煙花苷；在此基礎(chǔ)上，建立了專屬性強(qiáng)的采用高效液相色譜法測(cè)定腸炎寧制劑中煙花苷含量的方法，能夠更好的控制制劑的質(zhì)量，有助于提高其臨床療效。
[0009]下面將通過一些實(shí)驗(yàn)例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
[0010]實(shí)驗(yàn)例I腸炎寧制劑黃酮類成分的研究
[0011] 申請(qǐng)人:前期采用HPLC法，以槲皮素、山奈酚和蘆丁等3種常見的黃酮類成分作為對(duì)照品，對(duì)腸炎寧制劑進(jìn)行了色譜分析，發(fā)現(xiàn)由于藥材是采用水提，所以腸炎寧制劑中槲皮素和山奈酚的含量較低；腸炎寧制劑色譜圖中與蘆丁對(duì)照品色譜峰保留時(shí)間相同的地方有色譜峰，但分離度較差，而且峰純度檢測(cè)顯示該色譜峰中包含了其它成分。因此，槲皮素、山奈酚和蘆丁都不適宜作為腸炎寧制劑的檢測(cè)指標(biāo)成分，需要尋找其它的黃酮類成分作為檢測(cè)成分。
[0012]1、腸炎寧制劑中黃酮類檢測(cè)成分的篩選
[0013](I)色譜條件:DikmaC18色譜柱(250mmX4.6mm, 5 μ m);流動(dòng)相:0.3%冰醋酸水溶液一乙腈(梯度洗脫，Omin比例為85:15,60min比例為65:35);檢測(cè)波長為350nm。
[0014](2)供試品溶液的制備:取腸炎寧顆粒粉末約4.0g，加入60%甲醇100ml，超聲(功率250W，頻率33KHz)處理30分鐘，放冷，過濾，濾液濃縮至約30ml，過濾，經(jīng)聚酰胺柱吸附，依次用水和60%乙醇洗脫，收集60%乙醇洗脫液，濃縮至適量，濾過，取續(xù)濾液，即得。
[0015](3)檢測(cè)及結(jié)果:取供試品溶液20μ 1，按⑴項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，經(jīng)過對(duì)峰高較高且分離度較好的色譜峰進(jìn)行光譜分析和峰純度檢測(cè)，初步確定出峰時(shí)間為18分鐘左右的黃酮類成分為檢測(cè)成分。
[0016]2、提取分離
[0017]取生產(chǎn)上用于生產(chǎn)腸炎寧顆粒的稠膏1kg，加30%乙醇10L，超聲，靜置，過濾，濾液濃縮至5L，過濾，經(jīng)聚酰胺柱吸附，依次用水、30%乙醇和60%乙醇洗脫，經(jīng)HPLC分析，待分離成分主要存在于30%乙醇洗脫部分，30%乙醇洗脫部分回收乙醇并減壓濃縮至1L，依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取，經(jīng)HPLC分析，待分離成分主要存在于正丁醇萃取液中，正丁醇萃取液濃縮至500ml，用5 %碳酸鈉溶液萃取，經(jīng)HPLC分析，待分離成分主要存在于水層部分，水層部分用酸調(diào)PH值至4?5，適當(dāng)濃縮，經(jīng)聚酰胺柱吸附，依次用水和30%乙醇洗脫，收集30%乙醇洗脫部分，濃縮至乙醇含量少于10%，經(jīng)自制YMGC18H3柱吸附，依次用10%甲醇、30%甲醇和50%甲醇洗脫，經(jīng)HPLC分析，待分離成分主要存在于30%甲醇洗脫部分，30%甲醇洗脫部分減壓濃縮后，用少量35%甲醇溶解，再經(jīng)制備HPLC，甲醇-水(35:65)洗脫，得目標(biāo)成分。
[0018]3、結(jié)構(gòu)鑒定
[0019]目標(biāo)成分:黃色針狀結(jié)晶，鹽酸鎂粉反應(yīng)及Molish反應(yīng)均呈陽性。UV(MeOH)nm:329，268。1H-Mffi(DMSO-Cl6JOOMHz)S:7.97 (2H, d, J = 8.7Hz，H_2 '，6 ')，
6.87(2H, d, J = 8.7Hz，H-3 ' ,5' ),6.40(1H, brs, H_8)，6.19(1H, brs, H_6)，5.30(1H,d，J = 7.4Hz，H — I ' ' ),5.24(1H, brs, H-1 ; ' ' )。13C-NMR(100MHzDMS0_d6) δ:177.9 (C-4)，164.2 (C_7) , 161.3 (C_5)，159.9 (C_4 ' )，156.9 (C-2,9)，133.3 (C_3)，131.0(02'，6' )，120.9(C-r ),115.2(03' ,5' ), 104.0(C-1O), 101.4(C-1;')，100.8 (C-1 ' ' ' ) ,98.8(C-6) ,93.8(C-8) ,76.4(C-5 ' ' ), 75.8 (C_3 ''),74.2(C-2' ' ) ,71.4(C-4; ' ' ),70.6(03' ' ' ),70.4(02' ' ' ),70.0(04'')，68.3(C-5' ' ' )，66.9(C-6' ' )，17.8(C_6''')。根據(jù)以上數(shù)據(jù)確定目標(biāo)成分為煙花苷。
[0020]實(shí)驗(yàn)例2腸炎寧顆粒中煙花苷含量測(cè)定研究
[0021]1、儀器與試藥
[0022]安捷倫1200液相色譜儀(美國安捷倫公司)。煙花苷對(duì)照品(自制，純度大于98% );腸炎寧顆粒(江西天施康中藥股份有限公司，批號(hào):20140301、20140302、20140303);乙腈為色譜純；水為超純水，其它試劑均為分析純。
[0023]2、色譜條件
[0024]DikmaC18色譜柱(250_X 4.6mm, 5 μ m);流動(dòng)相:0.3 %冰醋酸水溶液一乙腈(80:20);流速:1.0ml/min ;檢測(cè)波長:350nm;柱溫:25°C ;理論板數(shù)按煙花苷計(jì)不低于3000。
[0025]3、對(duì)照品溶液的制備取煙花苷對(duì)照品適量，精密稱定，加60%甲醇制成每1ml含
0.01mg的溶液，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
[0026]4、供試品溶液的制備取腸炎寧顆粒，研細(xì)，取約4.0g，精密稱定，加入60%甲醇100ml，超聲(功率250W，頻率33KHz)處理30分鐘，放冷，過濾，濾液濃縮至適量，放冷，轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中，加60%甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
[0027]5、系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)
[0028]煙花苷在波長260nm和350nm附近均有較強(qiáng)的紫外吸收，本方法選擇350nm作為檢測(cè)波長。按2項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，比較煙花苷對(duì)照品溶液、供試品溶液的色譜圖，結(jié)果煙花苷色譜峰無拖尾，分離度良好。
[0029]6、線性關(guān)系考察
[0030]精密稱取煙花苷對(duì)照品10.23mg,置50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，取上述母液5ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液，按2項(xiàng)下色譜條件，分別注入高效液相色譜儀I μ 1，3 μ 1，5 μ 1，10 μ 1，20 μ 1，測(cè)定峰面積。以進(jìn)樣量(Ug)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行回歸分析，結(jié)果見表1。
[0031 ] 表1煙花苷線性關(guān)系考察結(jié)果
[0032]
【權(quán)利要求】
1.一種腸炎寧制劑的檢測(cè)方法，所述腸炎寧制劑是由下列重量份的原料制成的:地錦草660份、黃毛耳草900份、樟樹根660份、香薷330份、楓樹葉330份，其特征在于該方法包括采用高效液相色譜法測(cè)定煙花苷含量的方法。
2.如權(quán)利要求1所述的一種腸炎寧制劑的檢測(cè)方法，其特征在于采用高效液相色譜法測(cè)定煙花苷含量的色譜條件為:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈一用酸調(diào)PH值至2-4的水溶液或甲醇一用酸調(diào)PH值至2-4的水溶液為流動(dòng)相；柱溫為2(T40°C ;檢測(cè)波長為 260?275nm 或 330?360nm。
3.如權(quán)利要求1所述的一種腸炎寧制劑的檢測(cè)方法，其特征在于采用高效液相色譜法測(cè)定煙花苷含量的色譜條件為:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比例為81:19?79:21的乙腈一 0.3%冰醋酸水溶液為流動(dòng)相；柱溫為2(T40°C ;檢測(cè)波長為260?275nm 或 330?360nm。
4.如權(quán)利要求1-3任一所述的一種腸炎寧制劑的檢測(cè)方法，其特征在于所述的腸炎寧制劑為腸炎寧口服液、腸炎寧糖漿、腸炎寧膠囊、腸炎寧顆粒、腸炎寧片、腸炎寧咀嚼片或腸炎寧丸中的一種。
【文檔編號(hào)】G01N30/88GK103940942SQ201410191776
【公開日】2014年7月23日 申請(qǐng)日期:2014年5月8日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月8日
【發(fā)明者】吳孔松, 吳朝陽, 吳安明, 支永英 申請(qǐng)人:江西天施康中藥股份有限公司