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專利名稱：一種甲醛固定液固定組織塊的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)組織病理學(xué)技術(shù)專業(yè)領(lǐng)域，尤其是一種甲醛固定液固 定組織塊的方法。
背景技術(shù)：
傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)組織病理學(xué)技術(shù)中，4%甲醛固定液固定病理標(biāo)本取材組織 塊， 一般是用重量體積比為1:10 20 (g/ml)的甲醛固定液多次浸泡處 理組織塊，總用時(shí)長(zhǎng)不少于4h，使組織塊固定硬化，屬傳統(tǒng)沿襲的人為 經(jīng)驗(yàn)性設(shè)定作用過(guò)程的常規(guī)分步處理方法，組織塊固定過(guò)程尚無(wú)具有溯源 依據(jù)的監(jiān)測(cè)方法；此外，由于各醫(yī)療單位病理科技術(shù)室設(shè)施條件、人員專 業(yè)技術(shù)能力的差異和人為工作習(xí)慣的不同，組織塊固定處理工藝不甚一 致，往往造成組織固定不良、效果不一，使切片組織細(xì)胞鏡下形態(tài)結(jié)構(gòu)存 在差異，是影響組織病理學(xué)觀察診斷的主要技術(shù)因素，易導(dǎo)致組織病理學(xué) 觀察診斷出現(xiàn)偏差。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種甲醛固定液固定組 織塊的方法，使組織塊的固定過(guò)程符合科學(xué)技術(shù)原理、具有溯源依據(jù)，組 織細(xì)胞結(jié)構(gòu)固定良好穩(wěn)定，能夠輔助提高組織病理學(xué)觀察診斷的準(zhǔn)確性。 本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的 一種甲醛固定液固定組織塊的方法，其特征在于其方法包括以下步
驟
(1) 、將組織塊浸泡于反應(yīng)容器內(nèi)的中性或微堿性甲醛固定液中并攪
拌；
(2) 、使用在線pH檢測(cè)計(jì)連續(xù)檢測(cè)上述固定液的pH值，當(dāng)固定液的 pH值達(dá)到微酸性的報(bào)警pH值時(shí)，記錄該次處理所用時(shí)長(zhǎng)，然后更換固定 液；
(3) 、重復(fù)步驟(2)，直至固定液的pH值在等同于上一次處理所用時(shí)長(zhǎng) 時(shí)仍為》7.0，即達(dá)到組織塊處理的反應(yīng)終點(diǎn)。
而且，所述的組織塊與中性或微堿性甲醛固定液的重量體積比為 1:10 20， g/ml。
而且，所述步驟(2)中每次所更換固定液的體積以第一次所用固定液的體積為基準(zhǔn)逐次遞減20%。
而且，所述微堿性的pH值為7. 2 7. 6，所述微酸性的報(bào)警pH值為 6. 9 6. 5。
而且，步驟③中所述的pH值為7.0 7.6。 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和有益效果為
1. 本發(fā)明在多次遞減固定液劑量的分步處理過(guò)程中，當(dāng)某一次固定液 的PH值在等同于上一次處理所用時(shí)長(zhǎng)時(shí)仍為^7. 0，即提示確定組織蛋白 質(zhì)固定的反應(yīng)終點(diǎn)，使組織塊固定過(guò)程具有溯源依據(jù)。
2. 本發(fā)明在組織塊固定過(guò)程中，采用在線pH檢測(cè)計(jì)連續(xù)檢測(cè)固定液 的pH值，當(dāng)固定液的pH值由^7.0轉(zhuǎn)變?yōu)樵O(shè)定的微酸性pH值時(shí)，提示 更換固定液。因此本發(fā)明能使組織蛋白質(zhì)氨基酸的甲醛反應(yīng)始終處于中性 條件，保證了反應(yīng)生成物的化學(xué)性質(zhì)，使固定后的組織蛋白質(zhì)性質(zhì)穩(wěn)定。
3. 使用本發(fā)明方法處理組織塊可以提高組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)的固定效果，切 片組織細(xì)胞鏡下形態(tài)結(jié)構(gòu)良好穩(wěn)定。避免了由于實(shí)驗(yàn)室設(shè)施條件、人員專 業(yè)技術(shù)能力等因素造成的組織塊固定效果差、切片組織細(xì)胞鏡下形態(tài)結(jié)構(gòu) 存在差異的現(xiàn)象，有效地輔助提高了組織病理學(xué)觀察診斷的準(zhǔn)確性，為臨 床醫(yī)生做出正確的疾病診斷及制定治療方案提供了極大的幫助。
4. 本發(fā)明是一種符合科學(xué)技術(shù)原理、具有溯源依據(jù)的甲醛固定液固定 組織塊的方法，本發(fā)明用于商品型自動(dòng)病理組織處理設(shè)備，可實(shí)現(xiàn)中性(或 微堿性)甲醛固定液固定組織塊過(guò)程的智能化全自動(dòng)工作模式。
具體實(shí)施例方式
下面通過(guò)具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳述，以下實(shí)施例只是描述性 的，不是限定性的，不能以此限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。
一種甲醛固定液固定組織塊的方法，其步驟包括
(1) .將組織塊浸泡于反應(yīng)容器內(nèi)的中性(或微堿性pH值=7. 2 7. 6) 甲醛固定液中并攪拌。組織塊與中性(或微堿性)甲醛固定液的重量體積 比為1:10 20 ， g/ml。本發(fā)明中所涉及的甲醛固定液是由商品甲醛試劑 或多聚甲醛與中性(或微堿性)混合磷酸鹽混配的4%甲醛含量的溶液， 下同。
(2) .使用在線pH檢測(cè)計(jì)連續(xù)檢測(cè)上述固定液的pH值，當(dāng)固定液的pH 值達(dá)到微酸性的報(bào)警pH值(pH值=6. 9 6. 5)時(shí)，記錄該次處理所用時(shí) 長(zhǎng)，然后更換固定液。
(3) .重復(fù)步驟(2),直至固定液的pH值在等同于上一次處理所用時(shí)長(zhǎng)時(shí) 仍為>7.0，即提示達(dá)到組織塊處理的反應(yīng)終點(diǎn)，組織塊固定結(jié)束。本發(fā)明中，步驟(2)中每次所更換固定液的體積以第一次所用固定液的 體積為基準(zhǔn)逐次遞減20%。
實(shí)施例1
(1) .將總質(zhì)量為30g的若干塊15 X 15 X 3mm大小的組織塊浸泡于反應(yīng)容 器內(nèi)的300ml微堿性甲醛固定液中并攪拌。
(2) .使用在線pH檢測(cè)計(jì)連續(xù)檢測(cè)固定液的pH值，反應(yīng)一段時(shí)間后，當(dāng) 固定液的pH值達(dá)到微酸性的報(bào)警pH值時(shí)，記錄該次處理所用時(shí)長(zhǎng)，然后 將固定液傾倒出來(lái)。本實(shí)施例中的微酸性報(bào)警pH值為6. 8。
(3) .更換固定液，將240ml的微堿性甲醛固定液置于反應(yīng)容器中與組織 塊繼續(xù)進(jìn)行反應(yīng)并計(jì)時(shí)，在不大于第一次處理所用時(shí)長(zhǎng)內(nèi)，若固定液的 pH值達(dá)到6. 8時(shí)，更換固定液并記錄第二次處理所用時(shí)長(zhǎng)。
(4) .第三次用180ml的微堿性甲醛固定液處理并計(jì)時(shí)，在不大于第二 次處理所用時(shí)長(zhǎng)內(nèi)，若固定液的pH值檢測(cè)達(dá)到6.8時(shí)，更換固定液并記 錄第三次處理所用時(shí)長(zhǎng)。
(5) .第四次用120ml的微堿性甲醛固定液處理并計(jì)時(shí)，若在等同于第 三次處理所用時(shí)長(zhǎng)時(shí)，固定液的pH值檢測(cè)為7.6，即提示達(dá)到組織塊處 理的反應(yīng)終點(diǎn)，組織塊固定結(jié)束。
實(shí)施例2
(l).將總質(zhì)量為25g的若干塊15X15X3mm大小的組織塊浸泡于反應(yīng) 容器內(nèi)的300ml微堿性甲醛固定液中并攪拌。
(2) .使用在線pH檢測(cè)計(jì)連續(xù)檢測(cè)固定液的pH值，反應(yīng)一段時(shí)間后，當(dāng) 固定液的pH值達(dá)到微酸性的報(bào)警pH值時(shí)，記錄該次處理所用時(shí)長(zhǎng)，然后 將固定液傾倒出來(lái)。本實(shí)施例中的微酸性報(bào)警pH值為6. 5。
(3) .更換固定液，將240ml的微堿性甲醛固定液置于反應(yīng)容器中與組織 塊繼續(xù)進(jìn)行反應(yīng)并計(jì)時(shí)，在不大于第一次處理所用時(shí)長(zhǎng)內(nèi)，若固定液的 pH值達(dá)到6. 5時(shí)，更換固定液并記錄第二次處理所用時(shí)長(zhǎng)。
(4) .第三次用180ml的微堿性甲醛固定液處理并計(jì)時(shí)，在不大于第二 次處理所用時(shí)長(zhǎng)內(nèi)，若固定液的pH值檢測(cè)達(dá)到6.5時(shí)，更換固定液并記 錄第三次處理所用時(shí)長(zhǎng)。
(5) .第四次用120ml的微堿性甲醛固定液處理并計(jì)時(shí)，若在等同于第 三次處理所用時(shí)長(zhǎng)時(shí)，固定液的pH值檢測(cè)為7.0，即提示達(dá)到組織塊處 理的反應(yīng)終點(diǎn)，組織塊固定結(jié)束。(1) .將總質(zhì)量為30g的若干塊15X15X3咖大小的組織塊浸泡于反應(yīng) 容器內(nèi)的450ml中性甲醛固定液中并攪拌。
(2) .使用在線pH檢測(cè)計(jì)連續(xù)檢測(cè)固定液的pH值，反應(yīng)一段時(shí)間后， 當(dāng)固定液的pH值達(dá)到微酸性的報(bào)警pH值時(shí)，記錄該次處理所用時(shí)長(zhǎng)，然 后將固定液傾倒出來(lái)。本實(shí)施例中的微酸性報(bào)警pH值為6. 9。
(3) .更換固定液，將360ml的中性甲醛固定液置于反應(yīng)容器中與組織 塊繼續(xù)進(jìn)行反應(yīng)并計(jì)時(shí)，在不大于第一次處理所用時(shí)長(zhǎng)內(nèi)，若固定液的 pH值達(dá)到6. 9時(shí)，更換固定液并記錄第二次處理所用時(shí)長(zhǎng)。
(4) .第三次用270ml的中性甲醛固定液處理并計(jì)時(shí)，在不大于第二次 處理所用時(shí)長(zhǎng)內(nèi)，若固定液的pH值檢測(cè)達(dá)到6.9時(shí)，更換固定液并記錄 第三次處理所用時(shí)長(zhǎng)。
(5) .第四次用180ml的中性甲醛固定液處理并計(jì)時(shí)，若在等同于第三 次處理所用時(shí)長(zhǎng)時(shí)，固定液的pH值檢測(cè)仍為7.0，即提示達(dá)到組織塊處 理的反應(yīng)終點(diǎn)，組織塊固定結(jié)束。
實(shí)施例4
(1) .將總質(zhì)量為30g的若干塊15X 15X3mm大小的組織塊浸泡于反應(yīng) 容器內(nèi)的600ml中性甲醛固定液中并攪拌。
(2) .使用在線pH檢測(cè)計(jì)連續(xù)檢測(cè)固定液的pH值，反應(yīng)一段時(shí)間后， 當(dāng)固定液的pH值達(dá)到微酸性的報(bào)警pH值時(shí)，記錄該次處理所用時(shí)長(zhǎng)，然 后將固定液傾倒出來(lái)。本實(shí)施例中的微酸性報(bào)警pH值為6.9。
(3) .更換固定液，將480ml的中性甲醛固定液置于反應(yīng)容器中與組織 塊繼續(xù)進(jìn)行反應(yīng)并計(jì)時(shí)，在不大于第一次處理所用時(shí)長(zhǎng)內(nèi)，若固定液的 pH值達(dá)到6. 9時(shí)，更換固定液并記錄第二次處理所用時(shí)長(zhǎng)。
(4) .第三次用360ml的中性甲醛固定液處理并計(jì)時(shí)，在不大于第二次 處理所用時(shí)長(zhǎng)內(nèi)，若固定液的pH值檢測(cè)達(dá)到6.9時(shí)，更換固定液并記錄 第三次處理所用時(shí)長(zhǎng)。
(5) .第四次用240ml的中性甲醛固定液處理并計(jì)時(shí)，若在等同于第三 次處理所用時(shí)長(zhǎng)時(shí)，固定液的pH值檢測(cè)仍為7. 0，即提示達(dá)到組織塊處 理的反應(yīng)終點(diǎn)，組織塊固定結(jié)束。
本發(fā)明的原理為
基于生物化學(xué)和有機(jī)化學(xué)相關(guān)理論的研究認(rèn)為，甲醛固定液對(duì)組織塊
6的固定作用機(jī)理是甲醛能與組織蛋白質(zhì)上幾乎所有的結(jié)構(gòu)基團(tuán)發(fā)生加成 反應(yīng)，尤其氨基酸中的ci-氨基在常溫和中性(或弱堿性)條件下就容易 與甲醛反應(yīng)生成一種相對(duì)穩(wěn)定的二羥甲基化合物——N， N-二羥甲基氨基 酸，該反應(yīng)也稱氨基酸的甲醛反應(yīng)，是具有代表性的、主要的甲醛固定組 織蛋白質(zhì)的化學(xué)反應(yīng)。甲醛作為一種蛋白質(zhì)交聯(lián)劑，其分子間的交聯(lián)作用 導(dǎo)致蛋白質(zhì)本身結(jié)構(gòu)改變，使組織變硬且失去彈性，從而抑制了一切細(xì)胞 機(jī)能，達(dá)到組織固定、組織硬化的目的。
R- CH( NH3+ )- C00一 + 2HCH0 — R- CH{ N(CH20H)2 }- ■ + H+
隨著蛋白質(zhì)固定的化學(xué)反應(yīng)進(jìn)行，每2個(gè)甲醛分子結(jié)合掉1個(gè)-NH" 就會(huì)有l(wèi)個(gè)H+釋放到固定液中，導(dǎo)致固定液中H+濃度逐漸增高，專業(yè)理論 中使用中性甲醛固定液的目的就在于保持固定液的PH值穩(wěn)定。但是混合 磷酸鹽的緩沖能力是有一定限度的，反應(yīng)生成的H+濃度超出其緩沖能力 后，固定液的pH值就趨向酸性變化，酸性溶媒條件不能反應(yīng)生成性質(zhì)相 對(duì)穩(wěn)定的二羥甲基化合物，因此在蛋白質(zhì)氨基酸的甲醛反應(yīng)過(guò)程中，監(jiān)測(cè) 固定液的pH值保持中性條件，既能保證生成產(chǎn)物的化學(xué)性質(zhì)，又能作為
更換固定液的良好指標(biāo)，還能提示確定組織蛋白質(zhì)固定的反應(yīng)終點(diǎn)，使組 織塊固定過(guò)程具有溯源依據(jù)。
權(quán)利要求
1、一種甲醛固定液固定組織塊的方法，其特征在于其方法包括以下步驟(1)、將組織塊浸泡于反應(yīng)容器內(nèi)的中性或微堿性甲醛固定液中并攪拌；(2)、使用在線pH檢測(cè)計(jì)連續(xù)檢測(cè)上述固定液的pH值，當(dāng)固定液的pH值達(dá)到微酸性的報(bào)警pH值時(shí)，記錄該次處理所用時(shí)長(zhǎng)，然后更換固定液；(3)、重復(fù)步驟(2)，直至固定液的pH值在等同于上一次處理所用時(shí)長(zhǎng)時(shí)仍為≥7.0，即達(dá)到組織塊處理的反應(yīng)終點(diǎn)。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種甲醛固定液固定組織塊的方法， 其特征在于所述的組織塊與中性或微堿性甲醛固定液的重量體積比 為1:10 20， g/ml。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種甲醛固定液固定組織塊的方法， 其特征在于所述步驟(2)中每次所更換固定液的體積以第一次所用固 定液的體積為基準(zhǔn)逐次遞減20%。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種甲醛固定液固定組織塊的方法， 其特征在于所述微堿性的pH值為7. 2 7. 6，所述微酸性的報(bào)警pH 值為6. 9 6. 5。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種甲醛固定液固定組織塊的方法， 其特征在于步驟(3)中所述的pH值為7.0 7.6。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種甲醛固定液固定組織塊的方法，其方法包括以下步驟(1)將組織塊浸泡于反應(yīng)容器內(nèi)的中性或微堿性甲醛固定液中并攪拌；(2)使用在線pH檢測(cè)計(jì)連續(xù)檢測(cè)上述固定液的pH值，當(dāng)固定液的pH值達(dá)到微酸性的報(bào)警pH值時(shí)，記錄該次處理所用時(shí)長(zhǎng)，然后更換固定液；(3)重復(fù)步驟(2)，直至固定液的pH值在等同于上一次處理所用時(shí)長(zhǎng)時(shí)仍為≥7.0，即達(dá)到組織塊處理的反應(yīng)終點(diǎn)。本發(fā)明是一種符合科學(xué)技術(shù)原理、具有溯源依據(jù)的甲醛固定液固定組織塊的方法，本發(fā)明用于商品型自動(dòng)病理組織處理設(shè)備，可實(shí)現(xiàn)中性(或微堿性)甲醛固定液固定組織塊過(guò)程的智能化全自動(dòng)工作模式。
文檔編號(hào)G01N1/28GK101476999SQ200910067780
公開(kāi)日2009年7月8日 申請(qǐng)日期2009年1月23日 優(yōu)先權(quán)日2009年1月23日
發(fā)明者劉志蘭, 望 張, 張健飛, 梅興明, 趙寶忠 申請(qǐng)人:趙寶忠