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超高效液相色譜法檢測(cè)血清中9種脂溶性維生素的分析試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種超高效液相色譜法檢測(cè)血清中9種脂溶性維生素的分析試劑盒，所述的9種脂溶性維生素分別為：維生素A、α-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚、α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素、輔酶Q10、番茄紅素和葉黃素；所述試劑盒包括如下試劑：洗脫液A、洗脫液B、洗脫液C、標(biāo)準(zhǔn)品母液、稀釋液1、稀釋液2、萃取液、質(zhì)控品QC(L)、QC(M)、QC(H)。本發(fā)明試劑盒與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)勢(shì)：本發(fā)明試劑盒適用于超高效液相色譜法檢測(cè)血清中9種脂溶性維生素的分析方法；該方法可以節(jié)省樣品、節(jié)約時(shí)間、節(jié)約成本。
【專利說明】超高效液相色譜法檢測(cè)血清中9種脂溶性維生素的分析試 劑盒

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種超高效液相色譜技術(shù)測(cè)定血清中9種脂溶性維生素的方法，屬于 分析檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 脂溶性維生素泛指可溶于脂肪及脂溶劑的一類維生素。本發(fā)明主要針對(duì)其中對(duì)人 體正常生長(zhǎng)代謝及機(jī)能調(diào)節(jié)至關(guān)重要的9種維生素進(jìn)行分析，包括維生素 A、α -生育酚、 生育酚、生育酚、α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素、輔酶Q10、番茄紅素和葉黃素。
[0003] 其中，維生素 Α對(duì)于良好的視力、胚胎和嬰兒的正常發(fā)育、免疫系統(tǒng)的功能、生長(zhǎng)、 骨骼的形成、繁殖及傷口的愈合都是必不可少的；α-生育酚、 Y-生育酚、δ-生育酚是維 生素 Ε的三種常見形式，它們是高度活躍的自由基清除劑，保護(hù)脂質(zhì)膜不被氧化，α -生育 酚阻抑了蛋白酶C的活性，Υ -生育酚作為活性氮氧化物，是一種對(duì)抗在體內(nèi)引發(fā)疾病的 化合物的強(qiáng)大后衛(wèi)；胡蘿卜素中比較重要的β_胡蘿卜素可以轉(zhuǎn)換成維生素 Α，胡蘿卜的攝 入有助于消除動(dòng)脈硬化、癌癥、眼疾等疾病的發(fā)生；蕃茄紅素是目前被發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)抗氧化劑 之一，它可以有效防治因衰老、免疫力下降引起的各種疾??；輔酶Q10是一種強(qiáng)還原劑，能 防止脂質(zhì)過氧化；葉黃素是一種性能優(yōu)異的抗氧化劑，可抵御氧自由基在人體內(nèi)造成細(xì)胞 與器官損傷，另外對(duì)于保護(hù)視力、降低白內(nèi)障的發(fā)生率、延緩動(dòng)脈硬化、抗癌等都有非常重 要的意義。
[0004] 上述這些脂溶性維生素與人體正常生長(zhǎng)發(fā)育，代謝功能都息息相關(guān)，其在血清中 含量的檢測(cè)對(duì)考察這些物質(zhì)在體內(nèi)的代謝途徑、探查疾病機(jī)理以及考察某些藥物的作用效 果等等都有著指導(dǎo)意義。目前尚未見同時(shí)檢測(cè)這9種物質(zhì)的方法及試劑盒的相關(guān)報(bào)道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種能夠利用超高效液相色譜技術(shù)同時(shí)測(cè)定 血清中9種脂溶性維生素的試劑盒。
[0006] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：
[0007] -種超高效液相色譜法檢測(cè)血清中9種脂溶性維生素的分析試劑盒，所述的9種 脂溶性維生素分別為：維生素 A、α -生育酚、Υ -生育酚、δ -生育酚、α -胡蘿卜素 、β -胡 蘿卜素、輔酶Q10、番茄紅素和葉黃素；
[0008] 所述試劑盒包括如下試劑：
[0009] (1)洗脫液：
[0010] 洗脫液A :0· 1% ν/ν三氟乙酸水溶液；
[0011] 洗脫液Β:乙醇；
[0012] 洗脫液C :0· 1% ν/ν三氟乙酸甲醇溶液；
[0013] (2)標(biāo)準(zhǔn)品母液：含有維生素 A、α-生育酚、生育酚、δ-生育酚、α-胡蘿卜 素、β-胡蘿卜素、輔酶Q10、番茄紅素和葉黃素標(biāo)準(zhǔn)品的乙醇溶液；
[0014] (3)稀釋液：
[0015] 稀釋液1 :空白血清基質(zhì)溶液；
[0016] 稀釋液2:乙醇；
[0017] ⑷萃取液：正己烷；
[0018] (5)質(zhì)控品：含有維生素 A、α-生育酚、生育酚、δ-生育酚、α-胡蘿卜素、 β-胡蘿卜素、輔酶Q10、番茄紅素和葉黃素標(biāo)準(zhǔn)品的空白血清基質(zhì)溶液，分高中低三個(gè)濃 度分別為 QC (L)、QC (Μ)、QC (Η)。
[0019] 其中，標(biāo)準(zhǔn)品母液為含有7. 04μ g/mL維生素 Α、14. 58μ g/mLa -生育酚、8μ g/ mLY-生育酚、4yg/mLS-生育酚、4yg/mLa-胡蘿卜素、6.85yg/mLP-胡蘿卜素、 9. 8 μ g/mL輔酶Q10、3. 6 μ g/mL番爺紅素和1. 96 μ g/mL葉黃素標(biāo)準(zhǔn)品的乙醇溶液。
[0020] 表1 9種脂溶性維生素質(zhì)控品對(duì)應(yīng)濃度（單位μ g/mL)
[0021]

【權(quán)利要求】
1. 超高效液相色譜法檢測(cè)血清中9種脂溶性維生素的分析試劑盒，其特征在于， 所述的9種脂溶性維生素分別為：維生素 A、α -生育酚、Y -生育酚、δ -生育酚、α -胡 蘿卜素、β-胡蘿卜素、輔酶Q10、番茄紅素和葉黃素； 所述試劑盒包括如下試劑： ⑴洗脫液： 洗脫液A :0. 1 % ν/ν三氟乙酸水溶液； 洗脫液Β:乙醇； 洗脫液C :0. 1% ν/ν三氟乙酸甲醇溶液； (2) 標(biāo)準(zhǔn)品母液：含有維生素 A、α-生育酚、生育酚、δ-生育酚、α-胡蘿卜素、 胡蘿卜素、輔酶Q10、番茄紅素和葉黃素標(biāo)準(zhǔn)品的乙醇溶液； (3) 稀釋液： 稀釋液1 :空白血清基質(zhì)溶液； 稀釋液2 :乙醇； ⑷萃取液：正己烷； (5)質(zhì)控品：含有維生素 A、α-生育酚、Υ-生育酚、δ-生育酚、α-胡蘿卜素、β-胡 蘿卜素、輔酶Q10、番茄紅素和葉黃素標(biāo)準(zhǔn)品的空白血清基質(zhì)溶液，分高中低三個(gè)濃度分別 為 QC (L)、QC (Μ)、QC (Η)。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的超高效液相色譜法檢測(cè)血清中9種脂溶性維生素的分析 試劑盒，其特征在于，標(biāo)準(zhǔn)品母液為含有7. 04 μ g/mL維生素 Α、14. 58 μ g/mL α -生育酚、 8 μ g/mL γ -生育酚、4 μ g/mL δ -生育酚、4 μ g/mL α -胡蘿卜素、6· 85 μ g/mL β -胡蘿卜素、 9. 8 μ g/mL輔酶Q10、3. 6 μ g/mL番爺紅素和1. 96 μ g/mL葉黃素標(biāo)準(zhǔn)品的乙醇溶液。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的超高效液相色譜法檢測(cè)血清中9種脂溶性維生素的分析試劑 盒，其特征在于，所述的空白血清基質(zhì)溶液為40mg/mL牛血清蛋白的水溶液。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的超高效液相色譜法檢測(cè)血清中9種脂溶性維生素的分析試劑 盒，其特征在于，QC(L)，QC(M)，QC(H)中9種脂溶性維生素的濃度見表1 ; 表1 9種脂溶性維生素質(zhì)控品對(duì)應(yīng)濃度（單位μ g/mL)
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的超高效液相色譜法檢測(cè)血清中9種脂溶性維生素的分析試劑 盒，其特征在于，所述的血清為人或動(dòng)物的血清。
6. 權(quán)利要求1?5中任意一項(xiàng)所述的試劑盒的制備方法，其特征在于： (1) 洗脫液： 洗脫液A :配制0. 1% v/v三氟乙酸水溶液； 洗脫液B:乙醇； 洗脫液C :配制0. 1% v/v三氟乙酸甲醇溶液； (2) 標(biāo)準(zhǔn)品母液： 分別稱取維生素 A 8. 8mg、δ -生育酚l〇mg、γ -生育酚10mg、α -生育酚9. llmg，分別 加入lmL含有0. 4g/L 2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚的乙醇溶液，另稱取α -胡蘿卜素 l〇mg、 β-胡蘿卜素17. 12mg、蕃茄紅素10mg、輔酶Q105mg、葉黃素20mg分別定容于2mL、10mL、 lmL、lmL、10mL正己烷中，分別得到各自標(biāo)準(zhǔn)品母液；分別從維生素 A、α -生育酚、γ -生育 酚、S -生育酚母液中移取40 μ L、80 μ L、40 μ L、20 μ L標(biāo)準(zhǔn)品母液用乙醇定容至1000 μ L 得到校正液Α，分別從α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素、蕃茄紅素、輔酶Q10、葉黃素母液中移取 40 μ L、200 μ L、20 μ L、100 μ L、50 μ L標(biāo)準(zhǔn)品母液用正己烷定容至1000 μ L得到校正液Β，分 別取A、Β各20 μ L用乙醇定容至1000 μ L，得到9種維生素標(biāo)準(zhǔn)品混合母液C，即得； (3) 稀釋液： 稀釋液1 :將4g牛血清蛋白用水定容至100mL制得； 稀釋液2:乙醇； ⑷萃取液：正己烷； (5)質(zhì)控品：取標(biāo)準(zhǔn)品母液40 μ L、100 μ L、400 μ L分別用空白血清基質(zhì)溶液定容至 1000 μ L 得到。
7. 權(quán)利要求1?5中任意一項(xiàng)所述的試劑盒在利用超高效液相色譜技術(shù)測(cè)定血清中9 種脂溶性維生素中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK104155385SQ201410440135
【公開日】2014年11月19日 申請(qǐng)日期:2014年9月1日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月1日
【發(fā)明者】徐鳳仙, 于嘉屏 申請(qǐng)人:上海迪安醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司