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豬沙門氏菌耐熱毒素快速檢測試紙條的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種豬沙門氏菌耐熱毒素檢測試劑顯示的器具，特別是涉及一種豬沙門氏菌耐熱毒素快速檢測試紙條，試紙條含有支撐層、反應(yīng)試劑載體吸附層，支撐層為不吸水薄片條，反應(yīng)試劑載體吸附層粘貼于支撐層上，從樣品測試端依次為纖維層，豬沙門氏菌耐熱毒素金標(biāo)單抗或多抗纖維層，纖維素膜層，手柄端為吸水材料層；分別用豬沙門氏菌耐熱毒素配對單抗或多抗或單抗溶液在纖維層上印制檢測印跡“｜”、“/”或“＼”，分別用羊（兔）抗小鼠或豬IgG的多抗或用SPA溶液在纖維素膜層上印制對照印跡“｜”、“/”或“＼”。該檢測試紙條，特異性強，敏感性高，檢測結(jié)果顯示形象、直觀、準(zhǔn)確，無需儀器設(shè)備，無需專業(yè)檢測人員，費用低，操作簡便、快速，可大大降低勞動強度，縮短檢測時間，能在飼養(yǎng)場，肉類加工廠，出入境檢驗檢疫局等場所進行現(xiàn)場檢測，易于推廣應(yīng)用。
【專利說明】豬沙門氏菌耐熱毒素快速檢測試紙條
[0001]一、【技術(shù)領(lǐng)域】
本發(fā)明是一種涉及豬沙門氏菌耐熱毒素的檢測試劑顯示器具，特別是涉及一種可檢測豬沙門氏菌耐熱毒素的檢測試紙條。
[0002]二、技術(shù)背景
沙門氏菌是重要的人畜共患病的病原體，在當(dāng)今世界由其引起的食物中毒病例約占食物中毒病例的4o%，常有人類因沙門氏菌食物中毒而死亡的病例報道，引起人類的疾病主要有傷寒、副傷寒、胃腸炎和敗血癥。近幾年來，該病發(fā)生頻率仍呈上升趨勢，由于人類食物中毒主要來源于畜禽及其制品。因此快速準(zhǔn)確檢測畜禽之中沙門氏菌陽性感染者已成為當(dāng)務(wù)之急。
[0003]豬沙門氏菌病主要發(fā)生于4個月齡以內(nèi)的斷乳仔豬。成年豬和哺乳豬很少發(fā)病。細(xì)菌可通過病豬或帶菌豬的糞便、污染的水源和飼料等經(jīng)消化道感染健康豬。鼠類也可傳播本病。沙門氏菌分布廣，能從各種途徑傳入豬群。許多豬可借本身的抵抗力將其消滅或免疫，有些則成為帶菌豬。但如飼養(yǎng)管理不當(dāng)、氣候突變或長途運輸?shù)?，豬的抵抗力普遍下降時，或病菌幾經(jīng)通過豬體，毒力增高也可造成本病的暴發(fā)。I?4月齡仔豬易感性較高。半歲以上豬的免疫系統(tǒng)已逐步完善，感染后很少發(fā)病，但在相當(dāng)一段時間內(nèi)帶有本菌。在應(yīng)激因素作用下，尤其是在發(fā)生豬瘟?xí)r，往往發(fā)生本病的并發(fā)和繼發(fā)感染。本病一年四季均可發(fā)生，多雨潮濕季節(jié)更易發(fā)，在豬群中一般散發(fā)或呈地方流行。環(huán)境污穢、潮濕、棚舍擁擠、糞便堆積、飼料和飲水供應(yīng)不及時等應(yīng)激因素易促進本病的發(fā)生。
[0004]臨床上分急性(敗血)型和慢性(壞死性腸炎)型。前者多見于斷乳前后的仔豬。表現(xiàn)體溫升高至41?42°C，精神不振，食欲廢絕，不愿行動，呼吸困難，腹瀉、嘔吐，耳根、胸前和腹下、下肢呈現(xiàn)紫斑或暗紅。多以死亡告終。后者，通常以下痢為主要癥狀，糞便呈粥狀，排出灰白色或黃綠色惡臭水樣糞，有時混血液和壞死組織碎片。食欲降低，渴欲增加。由于持續(xù)下痢，日漸消瘦、衰弱，最后衰竭而死。在發(fā)生豬瘟?xí)r，往往并發(fā)或繼發(fā)該病。
[0005]剖檢:急性敗血型，在耳、腹、四肢內(nèi)側(cè)皮膚有出血斑點，各臟器漿膜、喉頭、膀胱粘膜和腎臟均有出血點，脾臟腫大，邊緣鈍，呈特征性的藍(lán)色。淋巴結(jié)腫脹出血，胃腸粘膜呈卡他性炎癥。慢性型病死豬尸體消瘦，盲腸、結(jié)腸粘膜呈局灶性或彌漫性增厚，被覆有灰黃色干酪樣偽膜，除去偽膜形成潰瘍，潰瘍邊緣多無堤狀隆起。脾稍腫大，肝有時可見黃灰色壞死小點，肺有慢性卡他性炎癥，含有黃色干酪樣結(jié)節(jié)。
[0006]近幾年來，該病的發(fā)生頻率呈上升趨勢，給養(yǎng)豬業(yè)帶來了嚴(yán)重危害。因此，尋找到一種操作簡便而又快速和特異的檢測方法，無疑在豬沙門氏菌感染診斷和流行病學(xué)檢測等方面有著重要意義。目前沙門氏菌及耐熱毒常用的檢測方法有以下幾種:
(O細(xì)菌分離培養(yǎng):將病料或增菌培養(yǎng)液直接劃線接種在選擇培養(yǎng)基(S.S和亞硫酸鉍瓊脂)上，經(jīng)37°c 18?24小時培養(yǎng)后，如形成無色較小、邊緣整齊半透明，有的因產(chǎn)生硫化氫(H2S)形成中心帶黑色菌落時，將此可疑菌落接種于三糖鐵培養(yǎng)基斜面，置37°C培養(yǎng)18?24小時。觀察底層葡萄糖產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣，產(chǎn)生硫化氫變棕黑色，上層斜面乳糖不分解、不變色，則可初步判定為沙門氏菌。[0007](2)顯微鏡檢查:取被檢材料(肝、脾、腎、腸系膜淋巴結(jié))制成涂片，自然干燥，用革蘭氏染色法染色鏡檢，如看到兩端鈍圓或卵圓形，不運動，不形成芽胞和莢膜的革蘭氏陰性小桿菌，則初步認(rèn)為是沙門氏菌。
[0008](3)免疫熒光抗體試驗:取經(jīng)增菌培養(yǎng)的被檢樣品一鉬耳，制成薄的涂片，晾干后，用固定液(乙醇60毫升，三氯甲烷30毫升，甲醛10毫升混合)固定5?10分，再用95%乙醇浸洗后晾干。再將沙門氏菌熒光抗體滴加標(biāo)本涂片上，放濕盒內(nèi)，在37°C經(jīng)30分后取出，用0.0lM PH9.0磷酸鹽緩沖液沖去多余的熒光抗體；再用相同的磷酸鹽緩沖液浸洗10分，然后用蒸餾水沖洗、晾干，再滴加PH9.0碳酸鹽緩沖甘油后，加蓋玻片封片、鏡檢。
[0009](4)酶聯(lián)免疫吸附試驗:酶聯(lián)免疫吸附試驗是將菌體抗原或耐熱毒素抗體吸附于固相載體，在載體上進行免疫酶染色，底物顯色后，用肉眼或分光光度計判定結(jié)果。沙門氏菌表面的脂多糖分子上的抗原、鞭毛抗原和外膜蛋白抗原等在沙門氏菌感染診斷中發(fā)揮了重要作用。利用這些菌體蛋白或耐熱毒素的單克隆抗體建立的直接ELISA、夾心ELISA方法都能有效地檢測沙門氏菌及耐熱毒。
[0010](5)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù):PCR技術(shù)具有高靈敏度、高特異性等優(yōu)點，多重PCR方法已被廣泛運用于沙門氏菌耐熱毒素及病原菌的鑒定和流行病學(xué)調(diào)查。
[0011]上述檢測方法需要專業(yè)人員在實驗室操作，操作繁瑣，檢測費時費力；而且需要昂貴的儀器設(shè)備，如PCR儀、酶標(biāo)儀等，對非專業(yè)人員而言，上述檢測方法很難完成。雖然上述方法特異敏感，但無法實現(xiàn)現(xiàn)場快速檢測或診斷。本發(fā)明，研究一種簡便快速、實時在線檢測試紙，對控制食物中毒和消滅此疾病意義重大。
[0012]三、
【發(fā)明內(nèi)容】

本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)中檢測豬沙門氏菌耐熱毒素存在的缺點，提供一種特異、敏感、簡便快速檢測豬沙門氏菌耐熱毒素的方法，研制出檢測豬沙門氏菌耐熱毒素的檢測試紙條。
[0013]本發(fā)明的技術(shù)方案是:提供一種豬沙門氏菌耐熱毒素的檢測試紙條，該試紙條含有支撐層和吸附層，支撐層為不吸水的薄片層，吸附層附著在支撐層上，吸附層從測試端依次為樣品吸附纖維層、金標(biāo)抗體纖維層、纖維素膜層和手柄端的吸水材料層，在纖維素膜層上設(shè)有檢測印跡和對照印跡；金標(biāo)抗體纖維層吸附有納米級金顆粒標(biāo)記的抗沙門氏菌耐熱毒素的單克隆抗體，檢測印跡用抗沙門氏菌耐熱毒素的配對單抗印制，對照印跡用羊或兔抗小鼠IgG的多克隆抗體；或金標(biāo)抗體纖維層吸附有納米級金顆粒標(biāo)記的抗沙門氏菌耐熱毒素的多克隆抗體，檢測印跡用抗沙門氏菌耐熱毒素的單抗制備，對照印跡用金黃色葡萄球菌A蛋白(SPA)或抗豬IgG多抗制備。
[0014]檢測印跡用抗沙門氏菌耐熱毒素的配對單抗制備即用沙門氏菌耐熱毒素的配對單抗溶液制備；檢測印跡用抗沙門氏菌耐熱毒素的多克隆抗體制備即為用沙門氏菌耐熱毒素的多克隆抗體制備。
[0015]支撐層用不吸水的硬質(zhì)塑膠片條或硬紙條制成；測試端樣品吸附纖維層用玻璃棉制成；金標(biāo)抗體纖維層用玻璃棉和金標(biāo)抗體制成，金標(biāo)抗體可以是單抗或多克隆抗體。
[0016]纖維素膜層用硝酸纖維素膜、或純纖維素膜、或羧化纖維素膜、或聚偏二氟乙烯PVDF纖維素膜制成。
[0017]吸水材料層用吸水紙制成。[0018]檢測印跡和對照印跡為直線式、或斜線式，纖維素膜層上含有一條檢測印跡和一條對照印跡，檢測印跡和對照印跡的排列形式為“ I I ”、“/ /”、“\ \”中的任一種。
[0019]試紙條吸附層上面含有一層保護層，保護層附著在吸附層上，在測試端樣品吸附纖維層、金標(biāo)抗體纖維層及吸水材料層上覆蓋有保護膜，在測試端樣品吸附纖維層與金標(biāo)抗體纖維層交界處對應(yīng)的保護膜上印制有樣品標(biāo)記線，該標(biāo)記線偏向測試端樣品吸附纖維層一側(cè)處約0.5cm處。
[0020]根據(jù)需要，選擇上述金標(biāo)抗體纖維層、檢測印跡和對照印跡排列形式中一種形式。[0021 ] 本發(fā)明的積極有益效果:
1.檢測特異性強、敏感性高:本發(fā)明檢測試紙條以納米級金顆粒標(biāo)記高親和力特異性單克隆抗體或特異性多克隆抗體為基礎(chǔ)而制成，金標(biāo)抗體中金顆粒與抗體分子之間無共價鍵形成，二者通過異性電荷間的范德華力相結(jié)合，金顆粒不影響單克隆抗體或多克隆抗體的特異性和結(jié)合力，并且具有較高的標(biāo)記率。本發(fā)明檢測試紙條具有較高的特異性和敏感性，可檢測到納克級沙門氏菌耐熱毒素。
[0022]2.操作簡便、快速:使用本發(fā)明試紙條檢測時無需附加任何其它儀器和試劑，只需將其測試端插入待檢的樣品液中30秒左右，然后在1-5分鐘內(nèi)即可判定檢測結(jié)果。
[0023]3.檢測結(jié)果直觀、準(zhǔn)確:本發(fā)明試紙條以是否顯示棕紅色的檢測線和對照線作為判定陽性和陰性結(jié)果的依據(jù)，即只在纖維素膜的對照線印記處顯示一條棕紅色對照線C，而在檢測線印記處無棕紅色條帶顯示，表示被檢測的沙門氏菌耐熱毒素為陰性結(jié)果；在纖維素膜的對照線印記處顯示一條棕紅色對照線C，在檢測印跡處顯示一條棕紅色條帶T，則表示被檢測的沙門氏菌耐熱毒素為陽性結(jié)果。無論陽性結(jié)果或陰性結(jié)果對照線C均應(yīng)顯示，當(dāng)對照線C不顯示時，說明試紙條失效。
[0024]4檢測費用降低:使用本發(fā)明檢測試紙條，不需其它儀器及試劑，節(jié)省了儀器、設(shè)備和附加試劑費用；非專業(yè)人員也可隨時實時在線檢測，無需支付專家診斷檢查費及其相關(guān)費用，可極大的降低檢測成本的投入，降低檢測費用。
[0025]5.使用范圍廣:本發(fā)明檢測試紙條操作簡單，即“傻瓜式”操作，而且攜帶方便、易保存，可滿足不同單位和不同層次人員的需要，包括專業(yè)化驗、海關(guān)檢疫、衛(wèi)生防疫、質(zhì)量監(jiān)測、畜產(chǎn)品加工、集約化養(yǎng)殖到個體養(yǎng)殖等，具有廣闊的市場前景和社會效益。
[0026]四、【專利附圖】

【附圖說明】:
圖1一種豬沙門氏菌耐熱毒素的檢測試紙條的側(cè)視結(jié)構(gòu)示意圖 圖2 —種豬沙門氏菌耐熱毒素的檢測試紙條的俯視結(jié)構(gòu)示意圖 五、【具體實施方式】:
以下實施例僅為了進一步說明本發(fā)明，并不限制本發(fā)明的內(nèi)容。豬沙門氏菌耐熱毒素的檢測試紙條的制備，需要制備抗沙門氏菌耐熱毒素的單克隆抗體和多克隆抗體，用于制備檢測印跡和金標(biāo)抗體纖維層；同時需要制備羊或兔抗鼠IgG抗體，羊或兔抗豬IgG抗體，用于制備對照印跡。
[0027]1.羊(兔)抗鼠或抗豬IgG抗體的制備:
以飽和硫酸銨法提取小鼠或豬血清中的IgG，取I份血清加2份PBS液(pH 7.2)混勻，加等體積飽和硫酸銨液混勻，置4°C冰箱內(nèi)2h，在4°C、10000r/min離心15min，棄上清液；以適量PBS液(pH7.2)溶解沉淀，加飽和硫酸銨液至其最終濃度為33%，置4°C冰箱內(nèi)2h，在4°C、10000r/min條件下離心15min，棄上清液，以少量PBS液(pH7.2)溶解沉淀，置4°C冰箱內(nèi)用PBS液(pH7.2)過夜透析，換液2~3次，在4°C、10000r/min條件下離心15min，收集上清液，以紫外分光光度計測定其蛋白濃度。以50 μ g~100 μ g (IgG) /kg體重經(jīng)皮下或肌肉注射抗體陰性健康羊或家兔3~4次，末次免疫20天后，靜脈采血，以ELISA測定其血清抗體效價在1:2000以上，心臟采血或頸動脈放血，收集其高免血清，以飽和硫酸銨法提取羊(兔)抗小鼠或豬的IgG (其提取方法與上述提取小鼠血清IgG相同，不再重述)，用于制備本發(fā)明試紙條的對照印跡。
[0028]2.沙門氏菌耐熱毒素單克隆抗體(Mi)的制備:
每只用50yg~IOOyg沙門氏菌耐熱毒素抗原免疫Balb/c系小鼠三次,每次間隔15~30d ;第三次加強免疫后3~4d，將免疫小鼠眼球放血，拉頸致死，用75%酒精浸泡5~lOmin，無菌取其脾臟，剪碎并經(jīng)100目尼龍網(wǎng)過濾，1000r/min離心10min，收集脾細(xì)胞；將I X IO8個脾細(xì)胞與2~5X107個NSO骨髓瘤細(xì)胞混合，1000r/min離心10min棄上清，將含有沉淀細(xì)胞的離心管置于37°C的水中，并緩緩加入0.7~Iml 40%~50% PEG4000 (pH
8.5~9.0)作用lmin，然后緩慢加入無血清1640培養(yǎng)基15ml，以終止PEG的作用，37°C水浴5~lOmin, 1000r/min離心10min棄上清,將細(xì)胞沉淀重懸于HAT選擇培養(yǎng)基中，并加入96孔培養(yǎng)板(100μl~200μ1/孔)，置于37°C 5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)7~IOd后，以548~1(^ g/ml的純化的病原體特異抗原包被96孔酶標(biāo)板，以酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測雜交瘤的培養(yǎng)上清，挑取強陽性細(xì)胞克隆(OD45tl ^ 0.5)，進行連續(xù)三次的有限稀釋法克隆化，獲得陽性雜交瘤細(xì)胞株，其染色體數(shù)為92~98，其分泌的單克隆抗體，能夠特異識別沙門氏菌耐熱毒素，而不與其它毒素發(fā)生交叉反應(yīng)，親和力常數(shù)達(dá)109~1(1，輕鏈亞型為K或λ，重鏈 亞型為IgG1UgG2aUgG2bUgG3 ;獲得的配對單克隆抗體，用于制金標(biāo)單抗體玻璃棉或檢測印跡。
[0029]3.金標(biāo)單抗玻璃棉的制備:
利用檸檬酸鈉還原法制備納米級金顆粒:即在50~100mL沸騰的0.01~0.05%氯金酸水溶液中加入2~4ml的0.5~2%檸檬酸三鈉溶液，獲得直徑15nm左右的納米級金顆粒。以0.lmol/L的K2CO3調(diào)金顆粒溶液的pH至8.5~9.5，以1:1000~1300的標(biāo)記比將待標(biāo)記的單克隆抗體加入PH8.5~9.5的金溶膠中，標(biāo)記IOmin后，加20% PEG10000至最終濃度為0.05%, 4°C、1500~3000r/min離心20min,除去未結(jié)合的金顆粒顆粒，4°C、15000r/min離心lh，棄上清，獲金標(biāo)抗體混合物后,用丙烯葡聚糖S-400柱層析，分離純化金標(biāo)抗體,獲得的金標(biāo)抗體。將1:100~500稀釋的金標(biāo)抗體，吸附于精制玻璃棉中，4°C低溫真空干燥，制備金標(biāo)單克隆抗體玻璃棉。
[0030]4.沙門氏菌耐熱毒素多克隆抗體(Ci)的制備:
沙門氏菌耐熱毒素多克隆抗體(Ci)的制備。采用沙門氏菌耐熱毒素抗原多次免疫接種抗體陰性健康豬。末次免疫20天后靜脈采血，以ELISA測定其血清抗體效價在1:2000以上，心臟采血或頸動脈放血，收集其高免血清，以飽和硫酸銨法提取血清中IgG抗體(方法與小鼠血清IgG的提取相同，不再重述)。
[0031]金標(biāo)多抗和金標(biāo)多抗玻璃棉的制備，與金標(biāo)單抗玻璃棉的制備方法相同，不再重述。詳見【具體實施方式】中的內(nèi)容3。
[0032]5.本發(fā)明檢測試紙條檢測原理 當(dāng)本發(fā)明檢測試紙條測試端插入待檢樣品溶液后，待檢溶液通過虹吸帶動待檢沙門氏菌耐熱毒素進入金標(biāo)抗體纖維層，并與其中的金標(biāo)抗體(Mi或Ci) 一起沿硝酸纖維素膜向手柄端擴散，最終滲入手柄端吸水材料層，擴散過程中金標(biāo)抗體能夠與相應(yīng)的待檢沙門氏菌耐熱毒素結(jié)合，結(jié)合金標(biāo)抗體的沙門氏菌耐熱毒素能夠被纖維素膜上檢測印跡的配對單抗或多抗攔截，當(dāng)樣品液中含有被檢沙門氏菌耐熱毒素時，則出現(xiàn)一條棕紅色的檢測線；羊或兔抗鼠或抗豬IgG則可與相應(yīng)的金標(biāo)單抗或多抗結(jié)合，出現(xiàn)I條棕紅色對照線。當(dāng)待檢樣品液中不含沙門氏菌耐熱毒素時，試紙條只顯示出一條棕紅色對照線；當(dāng)纖維素膜上沒有對照線顯示時，則表明試紙條已失效。
[0033]6.本發(fā)明檢測試紙條的檢測操作方法
(I)檢測樣品的處理:取病豬病變組織或市售鮮肉，1:1?5加入生理鹽水并用剪刀剪碎，浸出液為待檢樣品，病豬全血或血清加入生理鹽水1:1?5稀釋后為待檢樣品。
[0034](2)檢測操作:將本發(fā)明檢測試紙條樣品端插入待檢樣品液中，插入深度不超過標(biāo)記線9，約30秒后取出試紙條，水平放置約I?5分鐘，同時觀察結(jié)果。
[0035](3)結(jié)果判定:如果在檢測試紙條纖維素膜上只顯示出一條棕紅色對照線C，表示檢測結(jié)果為陰性，說明在被檢樣品中不含沙門氏菌耐熱毒素；如果檢測試紙條上的纖維素膜出現(xiàn)對照線C，檢測印跡處出現(xiàn)一條檢測線，表示檢測結(jié)果為陽性，即在待檢樣品中含有沙門氏菌耐熱毒素；如果纖維素膜上沒有對照線C顯示，則表明試紙條已失效。
[0036]實施例一:豬沙門氏菌耐熱毒素的檢測試紙條
參見圖1和圖2，圖中I為支撐層，用硬質(zhì)塑膠薄片條制成，2為測試端的樣品吸附纖維層，用玻璃棉制成，3為金標(biāo)抗體纖維層，吸附有納米級金顆粒標(biāo)記的抗沙門氏菌耐熱毒素的單克隆抗體的玻璃棉，根據(jù)上述【具體實施方式】3中所述的制備方法制備其金標(biāo)單抗玻璃棉，4為纖維素膜層，采用硝酸纖維素膜制成，5為吸水材料層，用吸水紙制成，將編號2、3、
4、5各層從左端測試端至右粘貼在硬質(zhì)塑膠薄片條I上，彼此之間交界處互相交叉重疊。在硝酸纖維素膜層4上，6為用抗沙門氏菌耐熱毒素的配對單抗溶液印制的檢測印跡T，7為用羊或兔抗鼠IgG溶液印制的對照印跡C，檢測印跡和對照印跡為直線式、或斜線式，兩種印跡帶排列形成的組合形式為“ I I ”、“/ /”、“\ \”中的任一種。8 — I為覆蓋在測試端樣品吸附纖維層2和金標(biāo)抗體纖維層3上面的白色保護膜，在2和3交界處對應(yīng)保護膜8-1位置上偏向于樣品吸附纖維層2 —側(cè)0.5cm處印有標(biāo)記線9，9的右端印有箭頭及max字樣，吸水材料層5 (手柄端)上覆蓋有其它顏色(如黃色)保護膜8-2。
[0037]待測樣品溶液的制備及檢測操作步驟，與【具體實施方式】6中的檢測操作方法相同，不再重述。
[0038]實施例二:豬沙門氏菌耐熱毒素的檢測試紙條，與實施例一基本相同，不同之處在于:
金標(biāo)抗體纖維層3用吸附有金顆粒標(biāo)記的抗沙門氏菌耐熱毒素的多克隆抗體的玻璃棉制成，根據(jù)上述【具體實施方式】3中所述的制備方法制備其金標(biāo)多克隆抗體玻璃棉；在硝酸纖維素膜層4上，6為用抗沙門氏菌耐熱毒素的單抗溶液印制的檢測印跡T，7為用羊或兔抗豬的IgG溶液印制對照印跡C，兩種印跡帶排列形成的組合形式為“ I I ”、“/ /”、“\\”中的任一種。其它包括檢測樣品制備、操作方法和結(jié)果判定等均與【具體實施方式】6中的操作方法相同，不再重述。
【權(quán)利要求】
1.一種檢測豬沙門氏菌耐熱毒素的檢測試紙條，該試紙條含有支撐層和吸附層，支撐層為不吸水的薄片層，吸附層附著在支撐層上，吸附層從測試端依次為樣品纖維層、金標(biāo)抗體纖維層、纖維素膜層和手柄端的吸水材料層，在纖維素膜層上制備有檢測印跡和對照印跡，其特征是金標(biāo)抗體纖維層吸附有納米級金顆粒標(biāo)記的抗豬沙門氏菌耐熱毒素的單克隆抗體，檢測印跡用抗豬沙門氏菌耐熱毒素的配對單抗或多克隆抗體印制，對照印跡用羊或兔抗小鼠IgG的多克隆抗體或金黃色葡萄球菌A蛋白(SPA)印制。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征是金標(biāo)抗體纖維層吸附有納米級金顆粒標(biāo)記的抗豬沙門氏菌耐熱毒素單克隆抗體，檢測印跡用抗豬沙門氏菌耐熱毒素的配對單抗或多克隆抗體印制，對照印跡用羊或兔抗小鼠IgG的多克隆抗體或金黃色葡萄球菌A蛋白(SPA)印制，或金標(biāo)抗體纖維層吸附有納米級金顆粒標(biāo)記的抗豬沙門氏菌耐熱毒素的多克隆抗體，檢測印跡用抗豬沙門氏菌耐熱毒素的單抗制備，對照印跡用金黃色葡萄球菌A蛋白(SPA)或抗豬IgG多抗制備。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的試紙條，其特征是檢測印跡用抗豬沙門氏菌耐熱毒素的配對單抗制備即用抗豬沙門氏菌耐熱毒素的配對單抗溶液制備；檢測印跡用抗豬沙門氏菌耐熱毒素的多克隆抗體制備即為用抗豬沙門氏菌耐熱毒素的多克隆抗體制備。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征是支撐層用不吸水的硬質(zhì)塑膠片條或硬紙條制成；測試端樣品吸附纖維層用玻璃棉制成；金標(biāo)抗體纖維層用玻璃棉和金標(biāo)抗體制成，金標(biāo)抗體可以是單抗或多克隆抗體。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征是纖維素膜層用硝酸纖維素膜、或純纖維素膜、或羧化纖維素膜、或聚偏二氟乙烯PVDF纖維素膜制成。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征是吸水材料層用吸水紙制成。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征是檢測印跡和對照印跡為直線式、或斜線式，纖維素膜層上含有三條檢測印跡和一條對照印跡，檢測印跡和對照印跡的排列形式為“I I中的任一種。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征是試紙條吸附層上面含有一層保護層，保護層附著在吸附層上，在測試端樣品吸附纖維層、金標(biāo)抗體纖維層及吸水材料層上覆蓋有保護膜，在測試端樣品吸附纖維層與金標(biāo)抗體纖維層交界處對應(yīng)的保護膜上印制有樣品標(biāo)記線，該標(biāo)記線偏向測試端樣品吸附纖維層一側(cè)約0.5cm處。
【文檔編號】G01N33/577GK103940991SQ201310083892
【公開日】2014年7月23日 申請日期:2013年3月15日 優(yōu)先權(quán)日:2013年3月15日
【發(fā)明者】李學(xué)伍, 趙東, 鄧瑞廣, 楊繼飛, 王方雨, 柴書軍, 王麗, 張改平 申請人:河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院