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一種尿酸的檢測方法及檢測試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種尿酸的檢測方法，采用酶學(xué)速率測定法，根據(jù)在波長546nm處，反應(yīng)體系吸光度的升高速率與樣本中尿酸的濃度成正比，延遲30～60秒后，測定30～180秒內(nèi)的吸光度升高速率，得到尿酸的含量,測定的是反應(yīng)的速率，在反應(yīng)過程中的線性期進(jìn)行讀數(shù)，可以完全排除血清樣品本底的干擾，提高了結(jié)果的準(zhǔn)確度；延遲時(shí)間短，讀數(shù)時(shí)間也很短，這樣就使整個(gè)反應(yīng)時(shí)間大大縮短，由原來的5～10分鐘縮短為3分鐘以內(nèi)，提高了效率。
【專利說明】一種尿酸的檢測方法及檢測試劑盒
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種尿酸的檢測方法，具體地說，涉及一種酶學(xué)速率法測定人血清尿酸的檢測方法及檢測試劑盒，適用于體外定量測定人血清、血漿中的尿酸的濃度，屬于醫(yī)用診斷制劑【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]尿酸是嘌呤、核酸和核蛋白的代謝產(chǎn)物。生物細(xì)胞中的0嫩(脫氧核糖核酸)和觀八(核糖核酸)由核苷酸組成。核酸氧化分解后的產(chǎn)物之一就是嘌呤，所以說嘌呤是細(xì)胞的組成成分。體內(nèi)的老舊細(xì)胞，富含嘌呤的食物在體內(nèi)新陳代謝過程中，其核酸氧化分解產(chǎn)物就有嘌呤。嘌呤會(huì)在肝臟中再次氧化為2，6，8—三氧嘌呤又稱為尿酸。因此，體內(nèi)尿酸濃度的異?？芍甘具@些物質(zhì)代謝的障礙。
[0003]體液中尿酸含量變化，可以充分反映出人體內(nèi)代謝、免疫等機(jī)能的狀況。正常情況下，體內(nèi)的尿酸大約有1200毫克，每天新生成約600毫克，同時(shí)排泄掉600毫克，處于平衡的狀態(tài)。血中尿酸全部從腎小球?yàn)V過，正常人體內(nèi)尿酸的生成與排泄速度較恒定。如果體內(nèi)產(chǎn)生過多來不及排泄或者尿酸排泄機(jī)制退化，則體內(nèi)尿酸滯留過多，當(dāng)血液尿酸濃度大于7毫克/升，導(dǎo)致人體體液變酸，影響人體細(xì)胞的正常功能，長期將會(huì)引發(fā)痛風(fēng)。
[0004]尿酸增高見于痛風(fēng)、急性或慢性腎小球腎炎、腎結(jié)核、腎盂積水、子癇、慢性白血病、紅細(xì)胞增多癥、攝入過多含核蛋白食物、尿毒癥腎炎、肝臟疾患、氯仿和鉛中毒、甲狀腺功能減低、多發(fā)性骨髓瘤、白血病、妊娠反應(yīng)紅細(xì)胞增多癥。尿酸減低:見于惡性貧血、？81100111綜合征、使用阿司匹林、先天性黃嘌吟氧化酶和嘌吟核苷磷酸化酶缺乏等。
[0005]尿酸的測定可作為腎功能、痛風(fēng)疾病的指標(biāo)，它在痛風(fēng)的診斷和腎功能方面有著重要的意義。
[0006]測定尿酸主要有磷鎢酸法、尿酸酶法(紫外分光法，氧電極法，偶聯(lián)過氧化物酶比色法，固相酶法?、色譜分析法(高效液相色譜一電化學(xué)檢測法，反相高效液相色譜法，氣相色譜一質(zhì)譜分析法)等。磷鎢酸法特異性、靈敏度較低，目前基本不用。色譜分析法操作繁瑣，價(jià)格高，對臨床的意義不大。尿酸酶法中的紫外分光法特異性強(qiáng)，操作簡便，但不易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化分析；氧電極法需要專用的分析設(shè)備；固相酶法的酶不穩(wěn)定，活力不易保存；偶聯(lián)過氧化物酶比色法靈敏度高、快速、安全、易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，適應(yīng)臨床的需要，目前國內(nèi)使用的基本全部為此方法，但此方法為終點(diǎn)法測定，有一個(gè)缺點(diǎn)就是易受血清本底干擾，而且反應(yīng)時(shí)間長，大大影響了結(jié)果的準(zhǔn)確性和測定效率。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是針對以上不足，提供一種尿酸的檢測方法，用于體外定量測定人血清、血漿中的尿酸的濃度，克服了現(xiàn)有檢測方法易受血清本底干擾、反應(yīng)時(shí)間長的缺陷，本發(fā)明檢測方法以酶催化法，使用酶學(xué)速率測定法，完全排除了血清本底的干擾，大大縮短了反應(yīng)時(shí)間，操作簡便，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，適用于各種生化分析儀器。[0008]本發(fā)明的另一目的是提供一種實(shí)施該檢測方法的檢測試劑盒。
[0009]為解決以上問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:一種尿酸的檢測方法，其特征在于:所述檢測方法為采用酶學(xué)速率測定法，根據(jù)在波長546nm處，反應(yīng)體系吸光度的升高速率與樣本中尿酸的濃度成正比，延遲30~60秒后，測定30~180秒內(nèi)的吸光度升高速率，得到尿酸的含量。
[0010]一種優(yōu)化方案，所述吸光度上升速率測定步驟:
a、制備反應(yīng)液
取空白管、標(biāo)準(zhǔn)管及樣本管，分別加入緩沖液；在樣本管、空白管及標(biāo)準(zhǔn)管內(nèi)對應(yīng)加入待測樣本、蒸餾水及標(biāo)準(zhǔn)液，混勻，37°C條件下保溫3~5分鐘，再加入酶試劑，混勻，得到反應(yīng)液；或
將緩沖液和酶試劑按比例混合配制成試劑工作液，穩(wěn)定3~5分鐘；然后取空白管、標(biāo)準(zhǔn)管及樣本管，分別加入試劑工作液；再分別在樣本管、空白管及標(biāo)準(zhǔn)管內(nèi)對應(yīng)加入待測樣本、蒸懼水及標(biāo)準(zhǔn)液，得到反應(yīng)液；
b、反應(yīng)液在37°C條件下反應(yīng)，延遲30~60秒后，在波長546nm處讀取反應(yīng)液的吸光度變化，讀數(shù)間隔時(shí)間為30~180秒，計(jì)算平均每分鐘吸光度變化率，得到空白管、標(biāo)準(zhǔn)管及樣本管內(nèi)反應(yīng)液的每分鐘吸光度變化率。
[0011]進(jìn)一步地，所述緩沖液與酶試劑的體積比為5:1~1:1 ;緩沖液、酶試劑之和與待測樣本的體積比為100:1~20:1。 進(jìn)一步地，所述緩沖液為含有3.5~8mmol/L N-乙基-N- (2-羥基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺鈉鹽(TOOS)的0.4mol/L的磷酸鹽緩沖液。
[0012]進(jìn)一步地，所述酶試劑為尿酸酶和過氧化酶溶液，尿酸酶濃度為0.2U/ml~5U/ml ;過氧化酶濃度為I~10U/ml。
[0013]進(jìn)一步地,所述標(biāo)準(zhǔn)液為尿酸溶液,濃度為100~400 μ mol/L。
[0014]基于所述檢測方法的檢測試劑盒，所述檢測試劑盒包括包裝盒、緩沖液、酶試劑、標(biāo)準(zhǔn)液；
所述緩沖液為含有3.5~8mmol/L N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)_3_甲基苯胺鈉鹽(TOOS)的0.4mol/L的磷酸鹽緩沖液。
[0015]進(jìn)一步地，所述酶試劑為尿酸酶和過氧化酶溶液，尿酸酶濃度為0.2U/ml~5U/ml ;過氧化酶濃度為I~10U/ml。
[0016]進(jìn)一步地,所述標(biāo)準(zhǔn)液為尿酸溶液,濃度為100~400 μ mol/L。
[0017]另一種優(yōu)化方案，根據(jù)下列公式計(jì)算尿酸的含量:
尿酸含量(μ mol/L) = _______ X標(biāo)準(zhǔn)濃度

Mmlf-Miiit 標(biāo)準(zhǔn)濃度為標(biāo)準(zhǔn)液的濃度值。
[0018]使用方法:根據(jù)儀器要求，在半自動(dòng)生化分析儀上使用單試劑模式，也可以使用單試劑模式；在分光光度計(jì)上使用單試劑模式；在全自動(dòng)生化分析儀上可以使用雙試劑模式，也可以使用單試劑模式。
[0019]儲(chǔ)存條件及有效期為:原裝試劑2~8°C保存，有效期12個(gè)月；緩沖液、酶試劑配成試劑工作液后，室溫可以穩(wěn)定72小時(shí)，在2~81冷藏可穩(wěn)定90天。
[0020]適用儀器為適用于各種半自動(dòng)和全自動(dòng)生化分析儀及分光光度計(jì)。
[0021]樣本要求為:樣本可以是新鮮不溶血血清或肝素抗凝血漿、尿液。血樣中尿酸在2~8可穩(wěn)定3天。
[0022]本發(fā)明采用以上技術(shù)方案，與現(xiàn)有技術(shù)方案相比，具有以下優(yōu)點(diǎn):
本發(fā)明使用酶學(xué)速率測定法，測定的是反應(yīng)的速率，在反應(yīng)過程中的線性期進(jìn)行讀數(shù)，完全不同于其他方法的終點(diǎn)測定法，可以完全排除血清樣品本底的干擾，提高了結(jié)果的準(zhǔn)確度；
本發(fā)明采用速率法后，延遲時(shí)間短，讀數(shù)時(shí)間也很短，這樣就使整個(gè)反應(yīng)時(shí)間大大縮短，由原來的5~10分鐘縮短為3分鐘以內(nèi)，提高了效率；
本發(fā)明因?yàn)闊o需考慮血清樣品本底的去除，所以操作簡便，儀器參數(shù)設(shè)置也很簡單，無需復(fù)雜的計(jì)算公式；
本發(fā)明可以使用雙試劑模式進(jìn)行測定，也可以使用單試劑模式進(jìn)行測定，因此可以適用于各種自動(dòng)、半自動(dòng)生化分析儀器 ，適用范圍廣。
[0023]下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0024]附圖1為本發(fā)明實(shí)施例中尿酸酶濃度一定、尿酸濃度不同時(shí)的反應(yīng)吸光度曲線； 附圖2為本發(fā)明實(shí)施例中尿酸濃度一定、尿酸酶濃度不同時(shí)的反應(yīng)吸光度曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0025]以下對本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行說明，應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的優(yōu)選實(shí)施例僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0026]實(shí)施例1，一種檢測試劑盒，包括包裝盒、緩沖液、酶試劑、標(biāo)準(zhǔn)液；包裝盒為試劑盒外包裝；以下稱緩沖液為試劑1，稱酶試劑為試劑2。
[0027]緩沖液為含有3.5~811111101/1 乙基-^-(2-羥基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺鈉鹽(1003)的0.4001/1的磷酸鹽緩沖液。
[0028]酶試劑為尿酸酶和過氧化酶溶液，尿酸酶濃度為0.2^/1111~5^/1111 ；過氧化酶濃度為 1 ~101/1111。
[0029]試劑1與試劑2的體積比為5:1~1:1。
[0030]標(biāo)準(zhǔn)液為尿酸溶液，濃度為100~400 9 001/1,以國家標(biāo)準(zhǔn)品賦值校準(zhǔn)。
[0031]儲(chǔ)存條件及有效期為:原裝試劑2~81保存，有效期12個(gè)月；緩沖液、酶試劑配成試劑工作液后，室溫可以穩(wěn)定72小時(shí)，在2~81冷藏可穩(wěn)定90天。
[0032]適用儀器為適用于各種半自動(dòng)和全自動(dòng)生化分析儀。
[0033]基于以上檢測試劑盒，尿酸的檢測方法按照以下步驟進(jìn)行，檢測方法的原理為酶學(xué)速率法，根據(jù)在波長54611111處，吸光度的上升速率與樣本中尿酸的濃度成正比，延遲30~60秒后，測定30~180秒時(shí)間段內(nèi)的吸光度上升速率，根據(jù)公式計(jì)算尿酸的含量。
[0034]測定原理依據(jù)如下:巨；低于0.05口加1則反應(yīng)吸光度變化很小，?111/1111。
I樣本管，分別加入緩沖液；然后在樣本管、標(biāo)準(zhǔn)液，混勻，混勻，37 00條件下保溫3?5延遲30?60秒后，得到反應(yīng)液，反應(yīng)液中:應(yīng)液的吸光度變化，讀數(shù)間隔時(shí)間為30?1，得到空白管、標(biāo)準(zhǔn)管及樣本管內(nèi)反應(yīng)液的
0配成試劑工作液，穩(wěn)定10分鐘；然后根據(jù)如入試劑工作液；再分別在樣本管、空白管I，得到反應(yīng)液，反應(yīng)液中酶濃度為0.05?311111處讀取反應(yīng)液的吸光度變化，讀數(shù)間隔[0039]樣本要求為:樣本可以是新鮮不溶血血清或肝素抗凝血漿、尿液。血樣中尿酸在2~8可穩(wěn)定3天。
[0040]實(shí)施例2，一種檢測試劑盒，除以下與實(shí)施例1不同外，其余與實(shí)施例1中檢測試劑盒相同；緩沖液為0.411101/1的磷酸鹽緩沖液，含有511111101/1.乙基-^-(2-羥基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺鈉鹽(1003),邱值為7.5 ；酶試劑為尿酸酶溶液，濃度為0.5口加1，含有仙加1過氧化酶和311111101/1的4-氨基安替比林；試劑1與試劑2的體積比為4:1 ；標(biāo)準(zhǔn)液為尿酸溶液，濃度為297 9 001/1,以國家標(biāo)準(zhǔn)品賦值校準(zhǔn)。
[0041]采用以上檢測試劑盒對尿酸進(jìn)行檢測，檢測方法按照以下步驟進(jìn)行:吸光度上升速率測定步驟按照雙試劑模式操作進(jìn)行，首先根據(jù)測定取所需要的空白管、標(biāo)準(zhǔn)管及樣本管，分別加入緩沖液；然后在樣本管、空白管及標(biāo)準(zhǔn)管內(nèi)對應(yīng)加入待測樣本、蒸餾水及標(biāo)準(zhǔn)液，混勻，371條件下保溫5分鐘，然后再加入酶試劑，混勻，得到反應(yīng)液，反應(yīng)液中酶濃度為0.1^1 ；371反應(yīng)，延遲30秒后，在波長5461^處讀取反應(yīng)液的吸光度變化，讀數(shù)時(shí)間為60秒，計(jì)算平均每分鐘吸光度變化率^八/分鐘，得到空白管、標(biāo)準(zhǔn)管及樣本管內(nèi)反應(yīng)液的每分鐘吸光度變化率^八/分鐘；各成分的具體量見下表，其余步驟與實(shí)施例1的檢測方法相同。
[0042]分析方法:速率法；反應(yīng)方向:正反應(yīng)。
【權(quán)利要求】
1.一種尿酸的檢測方法，其特征在于：所述檢測方法為采用酶學(xué)速率測定法，根據(jù)在波長546nm處，反應(yīng)體系吸光度的升高速率與樣本中尿酸的濃度成正比，延遲30~60秒后，測定30~180秒內(nèi)的吸光度升高速率，得到尿酸的含量。
2.如權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于：所述吸光度上升速率測定步驟： a、制備反應(yīng)液 取空白管、標(biāo)準(zhǔn)管及樣本管，分別加入緩沖液；在樣本管、空白管及標(biāo)準(zhǔn)管內(nèi)對應(yīng)加入待測樣本、蒸餾水及標(biāo)準(zhǔn)液，混勻，37°C條件下保溫3~5分鐘，再加入酶試劑，混勻，得到反應(yīng)液；或 將緩沖液和酶試劑按比例混合配成試劑工作液，穩(wěn)定3~5分鐘；然后取空白管、標(biāo)準(zhǔn)管及樣本管，分別加入試劑工作液；再分別在樣本管、空白管及標(biāo)準(zhǔn)管內(nèi)對應(yīng)加入待測樣本、蒸懼水及標(biāo)準(zhǔn)液，得到反應(yīng)液； b、反應(yīng)液在37°C條件下反應(yīng)，延遲30~60秒后，在波長546nm處讀取反應(yīng)液的吸光度變化，讀數(shù)間隔時(shí)間為30~180秒，計(jì)算平均每分鐘吸光度變化率，得到空白管、標(biāo)準(zhǔn)管及樣本管內(nèi)反應(yīng)液的每分鐘吸光度變化率。
3.如權(quán)利要求2所述的檢測方法，其特征在于：所述緩沖液與酶試劑的體積比為5:1~1:1 ;緩沖液、酶試劑之和與待測樣本的體積比為100:1~20:1。
4.如權(quán)利要求2所述的檢測方法，其特征在于：所述緩沖液為含有3.5~8mmol/LN-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基）-3-甲基苯胺鈉鹽（TOOS)的O. 4mol/L的磷酸鹽緩沖液。
5.如權(quán)利要求2所述的檢測方法，其特征在于：所述酶試劑為尿酸酶和過氧化酶溶液，尿酸酶濃度為O. 2U/ml~5U/ml ;過氧化酶濃度為I~10U/ml。
6.如權(quán)利要求2所述的檢測方法，其特征在于：所述標(biāo)準(zhǔn)液為尿酸溶液，濃度為100~400 μ mol/Lo
7.實(shí)現(xiàn)如權(quán)利要求1-6其中之一所述檢測方法的檢測試劑盒，其特征在于：所述檢測試劑盒包括包裝盒、緩沖液、酶試劑、標(biāo)準(zhǔn)液； 所述緩沖液為含有3. 5~8mmol/L N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基）_3_甲基苯胺鈉鹽（TOOS)的O. 4mol/L的磷酸鹽緩沖液。
8.如權(quán)利要求7所述的檢測試劑盒，其特征在于：所述酶試劑為尿酸酶和過氧化酶溶液，尿酸酶濃度為O. 2U/ml~5U/ml ;過氧化酶濃度為I~10U/ml。
9.如權(quán)利要求8所述的檢測試劑盒，其特征在于：所述標(biāo)準(zhǔn)液為尿酸溶液，濃度為100 ~400 μ mol/Lo
【文檔編號】G01N33/53GK103837487SQ201410101067
【公開日】2014年6月4日 申請日期:2014年3月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月19日
【發(fā)明者】孫希武, 郝樹彬, 趙元明, 李玉耀, 王永慶 申請人:濰坊鑫澤生物科技有限公司