一種細(xì)胞內(nèi)等離子手性納米聚集體的組裝方法
【專利摘要】一種細(xì)胞內(nèi)等離子手性納米聚集體的組裝方法，屬于材料化學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】。本發(fā)明通過納米金的表面修飾、納米金轉(zhuǎn)染細(xì)胞、細(xì)胞內(nèi)納米金的手性表征等步驟組裝等離子手性納米聚集體。本發(fā)明利用金納米粒子獨(dú)特的物理化學(xué)性質(zhì)，當(dāng)其轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，能夠在特定的時(shí)間段內(nèi)使其在細(xì)胞內(nèi)部發(fā)生聚集，從而產(chǎn)生強(qiáng)烈的圓二色信號(hào)。本發(fā)明提供了納米金表面修飾的具體方法，得到了性質(zhì)穩(wěn)定，手性信號(hào)強(qiáng)烈的納米金聚集組裝體。
【專利說明】一種細(xì)胞內(nèi)等離子手性納米聚集體的組裝方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種細(xì)胞內(nèi)等離子手性納米聚集體的組裝方法，屬于材料化學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]細(xì)胞作為生命活動(dòng)的基本單元，其中伴隨著許多生化反應(yīng)的發(fā)生，采用有效的手段對(duì)這些生理過程的監(jiān)測(cè)，對(duì)探究生物體基本活動(dòng)以及疾病預(yù)防方面具有積極意義。利用等離子納米材料在細(xì)胞內(nèi)部的結(jié)構(gòu)變化及其與手性配體偶極之間強(qiáng)烈的耦合，能夠使得納米材料在細(xì)胞內(nèi)部表現(xiàn)出強(qiáng)烈的圓二色性。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0003]本發(fā)明的目的是提供了一種細(xì)胞內(nèi)等離子手性納米聚集體的組裝方法，得到了性質(zhì)穩(wěn)定，手性信號(hào)強(qiáng)烈的納米金聚集組裝體。
[0004]本發(fā)明的技術(shù)方案，一種細(xì)胞內(nèi)等離子手性納米聚集體的組裝方法，步驟為:
(1)納米金的表面修飾:利用檸檬酸還原法得到的金納米粒子，將其與巰基修飾的聚乙二醇PEG 5000、聚乙二醇PEG 1000和穿膜肽TAT按一定比例混勻后，室溫震蕩24h，獲得表面修飾的金納米粒子；
(2)納米金轉(zhuǎn)染細(xì)胞:將步驟(I)獲得的表面修飾的金納米粒子離心重懸于細(xì)胞培養(yǎng)液中，并與一定數(shù)量的細(xì)胞共同培養(yǎng)一段時(shí)間后，用胰蛋白酶消化細(xì)胞，得到細(xì)胞內(nèi)含有金納米粒子的細(xì)胞懸液；
(3)細(xì)胞內(nèi)納米金的手性表征:對(duì)步驟(3)中得到的細(xì)胞懸液進(jìn)行生物電鏡表征和圓二色性表征。
[0005]所述細(xì)胞內(nèi)等離子手性納米聚集體的組裝方法，具體步驟如下:
(1)納米金表面的修飾:取100mL、2nM、20nm的金納米粒子以8000rpm離心IOmin,并重懸在IOmL 0.0lM pH7.4的磷酸鹽緩沖液PBS中；按金納米粒子:PEG5000: PEG1000: TAT為1: 1000: 100: 100的摩爾比同時(shí)加入金納米粒子溶膠中；室溫震蕩24h后，8000rpm離心IOmin,沉淀重懸于超純水中,得到表面修飾的納米金溶膠；
(2)納米金轉(zhuǎn)染細(xì)胞:將步驟(I)制備的表面修飾的納米金溶膠重懸于細(xì)胞培養(yǎng)液中，使金納米粒子的終濃度為5nM ;將細(xì)胞接種于6孔板中，取其中I個(gè)孔使其中的細(xì)胞數(shù)量達(dá)到IO4個(gè)，培養(yǎng)24h后去掉培養(yǎng)液，再向每孔加入上述含有納米金溶膠的細(xì)胞培養(yǎng)液lmL，37°C孵育36h后，清除培養(yǎng)液，用PBS反復(fù)洗滌，將洗滌后的細(xì)胞用0.25%胰蛋白酶消化5min, IOOOrpm離心lOmin，沉淀重懸于IOOyL PBS中，得到細(xì)胞內(nèi)含有金納米粒子的細(xì)胞懸液；
(3)細(xì)胞內(nèi)納米金的手性表征:采用生物透射電鏡和圓二色譜法對(duì)步驟(2)中得到的細(xì)胞懸液進(jìn)行表征。
[0006]所述穿膜肽TAT的多肽序列為YGRKKRRQRR RC。[0007]表1多肽的編號(hào)、序列及長度
【權(quán)利要求】
1.一種細(xì)胞內(nèi)等離子手性納米聚集體的組裝方法，其特征在于步驟為: (1)納米金的表面修飾:利用檸檬酸還原法得到的金納米粒子，將其與巰基修飾的聚乙二醇PEG 5000、聚乙二醇PEG 1000和穿膜肽TAT按一定比例混勻后，室溫震蕩24h，獲得表面修飾的金納米粒子； (2)納米金轉(zhuǎn)染細(xì)胞:將步驟(I)獲得的表面修飾的金納米粒子離心重懸于細(xì)胞培養(yǎng)液中，并與一定數(shù)量的細(xì)胞共同培養(yǎng)一段時(shí)間后，用胰蛋白酶消化細(xì)胞，得到細(xì)胞內(nèi)含有金納米粒子的細(xì)胞懸液； (3)細(xì)胞內(nèi)納米金的手性表征:對(duì)步驟(3)中得到的細(xì)胞懸液進(jìn)行生物電鏡表征和圓二色性表征。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述細(xì)胞內(nèi)等離子手性納米聚集體的組裝方法，其特征在于具體步驟如下: (1)納米金的表面修飾:取100mL、2nM、20nm的金納米粒子以8000rpm離心IOmin,并重懸在IOmL 0.0lM pH7.4的磷酸鹽緩沖液PBS中；按金納米粒子:PEG5000: PEG1000: TAT為1: 1000: 100: 100的摩爾比同時(shí)加入金納米粒子溶膠中；室溫震蕩24h后，8000rpm離心IOmin,沉淀重懸于超純水中,得到表面修飾的納米金溶膠； (2)納米金轉(zhuǎn)染細(xì)胞:將步驟(I)制備的表面修飾的納米金溶膠重懸于細(xì)胞培養(yǎng)液中，使金納米粒子的終濃度為5nM ;將細(xì)胞接種于6孔板中，取其中I個(gè)孔使其中的細(xì)胞數(shù)量達(dá)到IO4個(gè)，培養(yǎng)24h后去掉培養(yǎng)液，再向每孔加入上述含有納米金溶膠的細(xì)胞培養(yǎng)液lmL，37°C孵育36h后，清除培養(yǎng)液，用PBS反復(fù)洗滌，將洗滌后的細(xì)胞用0.25%胰蛋白酶消化5min, IOOOrpm離心lOmin，沉淀重懸于IOOyL PBS中，得到細(xì)胞內(nèi)含有金納米粒子的細(xì)胞懸液； (3)細(xì)胞內(nèi)納米金的手性表征:采用生物透射電鏡和圓二色譜法對(duì)步驟(2)中得到的細(xì)胞懸液進(jìn)行表征。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述細(xì)胞內(nèi)等離子手性納米聚集體的組裝方法，其特征在于:所述穿膜肽TAT的多肽序列為YGRKKRRQRR RC。
【文檔編號(hào)】G01N33/483GK103983488SQ201410202382
【公開日】2014年8月13日 申請(qǐng)日期:2014年5月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月14日
【發(fā)明者】徐麗廣, 胥傳來, 孫茂忠, 匡華, 馬偉, 劉麗強(qiáng), 宋珊珊, 吳曉玲 申請(qǐng)人:江南大學(xué)
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