牛奶中氟喹諾酮類藥物的maldi-tof-ms檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種牛奶中氟喹諾酮類藥物的MALDI-TOF-MS檢測(cè)方法，包括8-羥基喹啉功能化介孔分子篩，得到SBA-15-8羥基喹啉；將牛奶用三氟乙酸稀釋，得到樣品目標(biāo)物；將SBA-15-8羥基喹啉分散在乙醇溶液中并進(jìn)行超聲處理，得懸浮液；取懸浮液加入樣品目標(biāo)物，室溫下自然干燥后得到MALDI基質(zhì)薄層；取待測(cè)牛奶并置于MALDI基質(zhì)薄層上，溶劑自然蒸發(fā)后進(jìn)行MALDI-TOF-MS分析，將樣品和基質(zhì)混合點(diǎn)于靶板之上，直接進(jìn)入基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜進(jìn)行測(cè)定，省去了繁瑣的前處理過(guò)程，當(dāng)牛奶中氟喹諾酮類藥物殘留量超過(guò)0.05mg/kg時(shí)，可以有效地檢測(cè)到25種氟喹諾酮類藥物殘留中的18種，可大大提高檢測(cè)效率，以適應(yīng)進(jìn)出口產(chǎn)品的快驗(yàn)快放要求。
【專利說(shuō)明】牛奶中氟喹諾酮類藥物的MALD1-TOF-MS檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種牛奶中氟喹諾酮類藥物的檢測(cè)方法，具體地說(shuō)，涉及一種牛奶中氟喹諾酮類藥物的MALD1-TOF-MS檢測(cè)方法，屬于食品安全檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]近年來(lái)，基質(zhì)輔助激光吸附電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALD1-TOF-MS)技術(shù)廣泛應(yīng)用于多肽和蛋白質(zhì)分子量的測(cè)定及純度評(píng)價(jià)，如牛碳酸酐酶、蜂毒素、牛胰島素、牛胰島素B鏈、短桿菌肽S、肌紅蛋白、細(xì)胞色素C、胰蛋白酶原等，測(cè)定過(guò)程十分簡(jiǎn)便，在國(guó)內(nèi)外的一些實(shí)驗(yàn)室MALD1-TOF-MS已成為蛋白質(zhì)分子量測(cè)定的常規(guī)方法。在多肽、氨基酸質(zhì)譜分析方面，大多采用DHB、CHCA作為MALDI基質(zhì)。
[0003]目前，MALD1-TOF-MS多用于大分子物質(zhì)的分析，但是實(shí)際待測(cè)物的組成中經(jīng)常也包含有小分子物質(zhì)，基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALD1-TOF-MS)在分子量小于400u區(qū)域內(nèi)，由于基質(zhì)本身的電離，使小分子化合物質(zhì)譜圖中存在大量難以解釋的雜峰。大量雜峰的存在產(chǎn)生了很強(qiáng)的質(zhì)量歧視效應(yīng)，使那些不易電離的小分子化合物很難解吸電離出分子離子。
[0004]氟喹諾酮類藥物殘留通常采用酶聯(lián)免疫吸附法或液質(zhì)聯(lián)用法檢測(cè)，以上檢測(cè)方法的前處理過(guò)程是整個(gè)氟喹諾酮類藥物殘留檢測(cè)過(guò)程中最耗時(shí)耗力、最繁瑣的一個(gè)環(huán)節(jié)，同時(shí)又是對(duì)檢測(cè)結(jié)果影響最大的環(huán)節(jié)。目前，還沒(méi)有見(jiàn)到采用MALD1-TOF-MS來(lái)檢測(cè)氟喹諾酮類藥物殘留的研究報(bào)道。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0005]本發(fā)明要解決的問(wèn)題是針對(duì)以上不足，提供一種牛奶中氟喹諾酮類藥物的MALD1-TOF-MS檢測(cè)方法，可以快速篩選牛奶中殘留的氟喹諾酮類藥物，采用本發(fā)明所述的檢測(cè)方法，前處理過(guò)程簡(jiǎn)單，檢測(cè)效率高。
[0006]為解決以上問(wèn)題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為:牛奶中氟喹諾酮類藥物的MALD1-TOF-MS檢測(cè)方法，其特征在于:所述檢測(cè)方法包括以下步驟:
8-羥基喹啉功能化介孔分子篩，得到SBA-15-8羥基喹啉；
制備 MALD1-TOF-MS 樣品:
將牛奶用三氟乙酸稀釋，得到樣品目標(biāo)物；
將SBA-15-8羥基喹啉分散在乙醇溶液中并進(jìn)行超聲處理，得懸浮液；
取懸浮液加入樣品目標(biāo)物，室溫下自然干燥后得到MALDI基質(zhì)薄層；
取待測(cè)牛奶并置于MALDI基質(zhì)薄層上，溶劑自然蒸發(fā)后進(jìn)行MALD1-TOF-MS分析。
[0007]一種優(yōu)化方案，所述制備MALD1-TOF-MS樣品步驟包括:
取IOyL牛奶以體積比1:100用0.1%的三氟乙酸稀釋，得到樣品目標(biāo)物；取Img的SBA-15-8羥基喹啉分散在ImL乙醇溶液中并進(jìn)行超聲處理，時(shí)間為3min，得懸浮液；
取I μ L懸浮液加入樣品目標(biāo)物，即用三氟乙酸稀釋后的牛奶上，室溫放置5-10min，自然干燥后得到MALDI基質(zhì)薄層；
量取0.5 μ L待測(cè)牛奶并置于MALDI基質(zhì)薄層上，放置5_10min，溶劑自然蒸發(fā)后，將基質(zhì)薄層通過(guò)MALD1-TOF-MS進(jìn)行分析。
[0008]另一種優(yōu)化方案，所述8-羥基喹啉功能化介孔分子篩步驟包括:
將介孔分子篩SBA-15置于馬弗爐中烘烤干燥；
取干燥后的介孔分子篩SBA-15置于混有8羥基喹啉的甲苯溶液中，攪拌，然后將溫度在10分鐘內(nèi)升至120°C并保持，再進(jìn)行過(guò)濾，清洗過(guò)濾后得到的固體，在真空下干燥，得到SBA-15-8羥基喹啉。
[0009]再一種優(yōu)化方案，MALD1-TOF-MS分析后得待測(cè)牛奶的質(zhì)譜圖，與純牛奶的質(zhì)譜圖進(jìn)行對(duì)比，判斷待測(cè)牛奶中是否含有氟奎諾酮藥物。
[0010]本發(fā)明采用以上技術(shù)方案，與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點(diǎn):將樣品和基質(zhì)混合點(diǎn)于靶板之上，直接進(jìn)入基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜進(jìn)行測(cè)定，省去了繁瑣的前處理過(guò)程。當(dāng)牛奶中氟喹諾酮類藥物殘留量超過(guò)0.05mg/kg時(shí)，可以有效地檢測(cè)到25種氟喹諾酮類藥物殘留中的18種。利用8-羥基喹啉功能化的介孔分子篩材料SBA-15為基質(zhì)，建立用MALD1-TOF-MS對(duì)牛奶中的25種氟喹諾酮類藥物進(jìn)行快速篩選的方法，可大大提高檢測(cè)效率，以適應(yīng)進(jìn)出口產(chǎn)品的快驗(yàn)快放要求。
[0011]下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。
【專利附圖】
【附圖說(shuō)明】
[0012]附圖1為本發(fā)明實(shí)施例中以CHCA為基質(zhì)添加濃度為200mg/kg的麻保沙星的MALDI質(zhì)譜圖；
附圖2為本發(fā)明實(shí)施例中以DHB為基質(zhì)添加濃度為200mg/kg的麻保沙星的MALDI質(zhì)譜圖；
附圖3為本發(fā)明實(shí)施例中以CHCA為基質(zhì)添加喹諾酮類藥物后的MALD1-TOF-MS質(zhì)譜
圖；
附圖4為本發(fā)明實(shí)施例中以SBA-15為基質(zhì)添加喹諾酮類藥物后的MALD1-TOF-MS質(zhì)譜
圖；
附圖5為本發(fā)明實(shí)施例中以SBA-15-8QSi為基質(zhì)添加喹諾酮類藥物后的MALD1-TOF-MS質(zhì)譜圖；
附圖6為本發(fā)明實(shí)施例中添加濃度為0.5mg/kg麻保沙星的牛奶樣品的MALD1-TOF-MS質(zhì)譜圖；
附圖7為本發(fā)明實(shí)施例中添加濃度為0.05mg/kg麻保沙星的牛奶樣品的MALD1-TOF-MS質(zhì)譜圖；
附圖8為附圖7的局部放大圖；
附圖9為本發(fā)明實(shí)施例中添加濃度為0.01mg/kg麻保沙星的牛奶樣品的MALD1-TOF-MS質(zhì)譜圖；
附圖10為本發(fā)明實(shí)施例中以SBA-15-8QSi為基質(zhì)牛奶中25種氟喹諾酮類獸藥殘留的MALDI質(zhì)譜圖。【具體實(shí)施方式】
[0013]以下對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行說(shuō)明，應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的優(yōu)選實(shí)施例僅用于說(shuō)明和解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0014]實(shí)施例，牛奶中氟喹諾酮類藥物的MALD1-TOF-MS檢測(cè)方法，包括以下步驟:
制備8-羥基喹啉功能化介孔分子篩步驟:
將介孔分子篩SBA-15置于550°C的馬弗爐中烘烤2小時(shí)，加熱的目的是為了脫除模板
劑；
稱取1.0g介孔分子篩SBA-15，置于混有8羥基喹啉的IOmL甲苯溶液中，8QSi的含量為0.32g，在80°C下攪拌24h，然后將溫度在10分鐘內(nèi)升至120°C并保持24h，再進(jìn)行過(guò)濾，將過(guò)濾后得到的固體依次用甲苯、丙酮、甲醇以及二氯甲烷清洗，在真空下干燥，得到SBA-15-8QSi,即 SBA-15-8 羥基喹啉。
[0015]制備MALD1-TOF-MS 樣品步驟:
取IOyL牛奶以體積比1:100用0.1%的三氟乙酸稀釋，得到樣品目標(biāo)物；取Img的SBA-15-8羥基喹啉分散在ImL乙醇溶液中并進(jìn)行超聲處理，時(shí)間為3min，得懸浮液；
取I μ L懸浮液加入樣品目標(biāo)物，即用三氟乙酸稀釋后的牛奶上，室溫放置5-10min，自然干燥后得到MALDI基質(zhì)薄層；
量取0.5 μ L待測(cè)牛奶并置于MALDI基質(zhì)薄層上，放置5_10min，溶劑自然蒸發(fā)后，將含待測(cè)牛奶樣品的基質(zhì)薄層通過(guò)MALD1-TOF-MS進(jìn)行分析；
按照MALD1-TOF-MS的操作規(guī)程進(jìn)行，得待測(cè)牛奶的質(zhì)譜圖，與純牛奶的質(zhì)譜圖進(jìn)行對(duì)t匕，判斷待測(cè)牛奶中是否含有氟奎諾酮藥物。
[0016]試驗(yàn)
1、純牛奶樣品的MALD1-TOF-MS質(zhì)譜牛奶樣品的MALDI質(zhì)譜圖比對(duì)蛋白質(zhì)譜圖數(shù)據(jù)庫(kù)可知,300-600分子量區(qū)間的主要物質(zhì)是一些多肽分子的碎片，而分子量為m/z8002.9的物質(zhì)可能為蛋白胨P.P.81,而分子離子峰在m/zll553.8和11813.8的物質(zhì)可能分別為Y 3和Y 2酪蛋白。在乳清蛋白的分子離子峰區(qū)域，一般是m/zl4000到m/zl9000之間,有一個(gè)明顯的特征峰，m/zl4154.1,它代表了乳白蛋白。從牛奶樣品的全譜圖(m/z300_30000)來(lái)看，未發(fā)現(xiàn)與本研究中25種氟喹諾酮類藥物有相吻合的分子離子峰出現(xiàn)，而在m/z5000-30000的區(qū)間可以觀測(cè)到牛奶中蛋白胨、酪蛋白、乳清蛋白以及酪蛋白的特征分子離子峰，純牛奶樣品對(duì)試驗(yàn)樣品沒(méi)有影響。
[0017]2、DHB和CHCA作為基質(zhì)添加喹諾酮類藥物后的MALD1-TOF-MS質(zhì)譜分析試驗(yàn):本試驗(yàn)對(duì)比DHB和CHCA對(duì)于牛奶中喹諾酮類藥物分析的影響。
[0018]分別以DHB和CHCA為基質(zhì)，向牛奶樣品中添加濃度為200mg/kg的麻保沙星(m/z362.35)，得到MALDI質(zhì)譜圖，其中圖1所示以CHCA為基質(zhì)，圖2所示以DHB為基質(zhì)。
[0019]CHCA基質(zhì)下出峰情況與DHB基質(zhì)下相差不大，但是CHCA基質(zhì)下背景干擾卻小了很多。對(duì)比未添加麻保沙星的牛奶的MALDI圖譜可知，在m/z300-600的區(qū)間內(nèi)，出現(xiàn)了m/z361.9的分子離子峰，與麻保沙星m/z362.35的分子量相吻合。試驗(yàn)結(jié)果表明濃度為200mg/kg的麻保沙星牛奶溶液可以使用MALD1-TOF-MS簡(jiǎn)單快捷的檢測(cè)出來(lái)，同時(shí)，麻保沙星并未與牛奶中的蛋白或氨基酸產(chǎn)生特異性相互作用。
[0020]3、以SBA-15、SBA-15-8QSi以及CHCA為基質(zhì)添加喹諾酮類藥物后的MALD1-TOF-MS質(zhì)譜分析以SBA-15，SBA-15-8QSi以及CHCA為基質(zhì)，將基質(zhì)點(diǎn)在靶板上，自然干燥后上機(jī)檢測(cè)，得到在MALD1-TOF-MS下的質(zhì)譜圖，得到不同基質(zhì)下的MALDI質(zhì)譜圖，圖3所示以CHCA為基質(zhì)，圖4所示以SBA-15為基質(zhì)，圖5所示以SBA-15-8QSi為基質(zhì)，雖然以CHCA為基質(zhì)時(shí)存在較多的離子峰，例如m/zl89和172，這些可能是出自于CHCA本身。
[0021]與CHCA相比，SBA-15, SBA_15_8QSi基本上很少有背景峰出現(xiàn)。這就說(shuō)明采用介孔分子篩材料作為基質(zhì)可以很大程度的削弱背景干擾，有利于提高檢測(cè)靈敏度。
[0022]與SBA-15相比，SBA_15_8QSi介孔分子篩材料具有更強(qiáng)的解吸/離子化強(qiáng)度，如圖4、圖5所示。圖5與圖4相比，分子離子峰具有更高的信號(hào)強(qiáng)度。這可能是因?yàn)樵诮榭妆砻嫖?QSi基團(tuán)之后更容易吸收能量。
[0023]4、以SBA-15_8QSi為基質(zhì)研究牛奶中氟喹諾酮的MALDI質(zhì)譜分析
4.1靈敏度測(cè)試
為了驗(yàn)證以SBA-15-8QSi為基質(zhì)的牛奶中氟喹諾酮的MALDI質(zhì)譜檢測(cè)的靈敏度，試驗(yàn)設(shè)計(jì)了一個(gè)濃度梯度，分別按照添加量為100mg/kg、50mg/kg、10mg/kg、5mg/kg、0.5mg/kg、
0.05mg/kg及0.01mg/kg的麻保沙星加入牛奶，并以SBA_15_8QSi為基質(zhì)，使用337_nm氮激光器轟擊，用MALD1-TOF-MS檢測(cè)其檢測(cè)限。添加量大于0.5mg/kg產(chǎn)生的MALD1-TOF-MS質(zhì)譜圖類似，不再——明示，0.5mg/kg以下濃度的MALD1-TOF-MS質(zhì)譜圖如圖6_8所示。
[0024]圖6為添加濃度為0.5mg/kg麻保沙星的牛奶樣品的MALD1-TOF-MS質(zhì)譜圖，可以清晰的看到m/z 362.17的特征分子離子峰。
[0025]圖7添加濃度為0.05mg/kg麻保沙星的牛奶樣品的MALD1-TOF-MS質(zhì)譜圖，m/z362.2的特征分子離子峰出現(xiàn)明顯的降低，需放大判定，附圖8是m/z363-372部分的放大。
[0026]圖9添加濃度為0.01mg/kg麻保沙星的牛奶樣品的MALD1-TOF-MS質(zhì)譜圖(m/Z353-373)已無(wú)法檢測(cè)到m/z362.2的特征分子離子峰。也就是說(shuō)用MALD1-TOF-MS可以檢測(cè)到牛奶中0.05mg/kg的麻保沙星。
[0027]4.2特異性測(cè)試
由圖7可看出，m/z 362.4069，與麻保沙星m/z 362.35最接近，但在其附近出現(xiàn)兩個(gè)峰，m/z 362.2363和m/z 362.6433，說(shuō)明在麻保沙星添加濃度為0.05mg/kg時(shí)，存在干擾，會(huì)出現(xiàn)一定的假陽(yáng)性。
[0028]4.3以SBA-15-8QSi為基質(zhì)研究牛奶中25種氟喹諾酮類獸藥殘留的MALDI質(zhì)譜同時(shí)添加濃度為0.05mg/kg的25種氟奎諾酮藥物，并以SBA-15-8QSi為基質(zhì)，使用337nm氮激光器轟擊，用MALD1-TOF-MS檢測(cè)的譜圖見(jiàn)圖10。
[0029]各化合物的分子離子峰如下:環(huán)丙沙星m/z 331.35、丹諾沙星m/z 453.5、恩諾沙星m/z 359.40、沙拉沙星m/z 385.36、諾氟沙星m/z 409.41、二氟沙星m/z 435.86、麻保沙星m/z 362.35、惡喹酸m/z 261.23、萘啶酸m/z 232.24、培氟沙星m/z 429.47、司帕沙星m/z 392.41、奧比沙星m/z 395.38、氟羅沙星m/z 369.34、洛美沙星m/z 387.81、氟甲喹m/z 261.25、依諾沙星m/z 320.32、加替沙星m/z 375.40、帕珠沙星m/z 318.29、莫西沙星m/z 401.43、那氟沙星m/z 360.38、達(dá)氟沙星m/z 357.38、左氧氟沙星m/z 370.38、吡哌酸m/z 303.33、妥舒沙星m/z 576.54、巴洛沙星m/z 389.42。其中可以對(duì)應(yīng)找到有萘啶酸m/z 232.24、吡哌酸m/z 303.33、依諾沙星m/z 320.32、環(huán)丙沙星m/z 331.35、達(dá)氟沙星m/z357.38、恩諾沙星m/z 359.40、麻保沙星m/z 362.35、左氧氟沙星m/z 370.38、加替沙星m/Z 375.40、沙拉沙星m/z 385.36、洛美沙星m/z 387.81、司帕沙星m/z 392.41、莫西沙星m/z 401.43、諾氟沙星m/z 409.41、培氟沙星m/z 429.47、二氟沙星m/z 435.86、丹諾沙星m/z 453.5、妥舒沙星 m/z 576.54 共 18 種。
[0030]4.4重復(fù)性測(cè)定
本試驗(yàn)進(jìn)行了日內(nèi)和日間重復(fù)性的測(cè)定。
[0031]日內(nèi)重復(fù)性測(cè)定:按照試驗(yàn)4.3中檢出陽(yáng)性的18種氟喹諾酮類藥物牛奶樣品，分別取其濃度為100mg/kg,50mg/kg,0.05mg/kg的同種牛奶樣品,在同日內(nèi)不同時(shí)間，用同一臺(tái)MALD1-TOF-MS 6次重復(fù)測(cè)定高、中、低3種藥物濃度的樣品，求得日內(nèi)(批內(nèi))重復(fù)性。每次測(cè)定在各自的m/z附近出現(xiàn)一個(gè)最高的分子離子峰，且每種藥物每次測(cè)定的m/z差值在
0.1-0.5之間。個(gè)別藥物在各自的m/z附近出現(xiàn)兩個(gè)相近的分子離子峰，可判斷為有假陽(yáng)性存在。
[0032]日間精密度測(cè)定:取濃度為100mg/kg，50mg/kg, 0.05mg/kg的2.4.3中檢出陽(yáng)性的18種氟喹諾酮類藥物，在一周內(nèi)不同三日內(nèi)，分別添加到三種不同品牌牛奶中，用同一臺(tái)MALD1-TOF-MS 6次重復(fù)測(cè)定高、中、低3種藥物濃度的牛奶樣品，求得日間(批間)重復(fù)性。每次測(cè)定在各自的m/z附近出現(xiàn)一個(gè)最高的分子離子峰，且每種藥物每次測(cè)定的m/z差值在0.1-0.5之間。個(gè)別藥物在各自的m/z附近出現(xiàn)兩個(gè)相近的分子離子峰，可判斷為有假陽(yáng)性存在。而不同品牌的牛奶對(duì)結(jié)果影響不大。
[0033]通過(guò)重復(fù)性試驗(yàn)用MALD1-TOF-MS檢測(cè)4.3中18種氟喹諾酮類藥物，全部檢出，無(wú)假陰性現(xiàn)象。
[0034]結(jié)論
本試驗(yàn)成功的應(yīng)用MALD1-TOF-MS檢測(cè)到了牛奶中添加的濃度為0.05mg/kg麻保沙星、依諾沙星等18種氟喹諾酮類化合物，這18種藥物基本涵蓋了臨床上常用的氟喹諾酮類藥物，而篩選濃度基本符合不同進(jìn)口國(guó)對(duì)牛奶中喹諾酮類藥物最高殘留限量標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。該方法在低限附近雖然有一定的假陽(yáng)性，但做為一種快速篩選方法來(lái)分析牛奶中氟喹諾酮類藥物殘留，整個(gè)分析過(guò)程不需要傳統(tǒng)的復(fù)雜前處理過(guò)程，省時(shí)省力，可極大的提高分析效率。對(duì)于日常檢測(cè)中極低的檢出率，在檢出后使用其他方法再進(jìn)行準(zhǔn)確定量，可滿足進(jìn)出口檢驗(yàn)檢疫快驗(yàn)快放要求。
[0035]環(huán)丙沙星(純度95%)、單諾沙星(純度94%)、恩諾沙星(純度99%)、二氟沙星(純度98.5%)、麻保沙星(純度98.5%)、惡喹酸(純度97.5%)、萘啶酸(純度99.8%)、培氟沙星(純度99%)、司帕沙星(純度99%)、奧比沙星(純度99.8%)、洛美沙星(純度97.6%)、氟甲喹(純度98%)、依諾沙星(純度99%)、達(dá)氟沙星(純度94%)(來(lái)自Dr Ehrenstorfer公司),諾氟沙星(純度98%)、沙拉沙星(純度97%)、甲磺酸帕珠沙星(純度75.3%)、左氧氟沙星(純度98%)、批哌酸(純度99%)(來(lái)自Sigma公司)、莫西沙星(純度99%)、氟羅沙星(純度99.1%)、加替沙星(純度98%)、那氟沙星(純度92%)、妥舒沙星(純度98.9%)、巴洛沙星(純度99.5%)(中國(guó)獸藥監(jiān)察所友情提供)；三氟乙酸(TFA)、2、5-二羥基苯甲酸(DHB)和α-氰基_4_羥基肉桂酸(CHCA)(分析純，F(xiàn)luka (St.Louis，MO)公司)；甲苯、丙酮、無(wú)水乙醇、二氯甲烷(色譜純，天津科密歐)；甲醇(色譜純，F(xiàn)isher) ；8- (3-(三乙氧基)丙氧基)喹啉(8QSi)、介孔分子篩(長(zhǎng)春應(yīng)用化學(xué)研究所友情贊助)；純牛奶(伊利、蒙牛、光明品牌，樂(lè)購(gòu)超市)。水(二級(jí)水，實(shí)驗(yàn)室自制)。[0036]儀器與設(shè)備
AXIMA-T0F2型MALD1-T0F質(zhì)譜儀:日本島津公司產(chǎn)品，氮激光器，波長(zhǎng)337nm，采用離子延時(shí)引出及反射工作方式。
[0037]除非特別說(shuō)明，涉及到的百分比含量均為質(zhì)量百分比含量。
[0038]最后應(yīng)說(shuō)明的是:以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，盡管參照前述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說(shuō)明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，其依然可以對(duì)前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.牛奶中氟喹諾酮類藥物的MALD1-TOF-MS檢測(cè)方法，其特征在于:所述檢測(cè)方法包括以下步驟: 8-羥基喹啉功能化介孔分子篩，得到SBA-15-8羥基喹啉； 制備 MALD1-TOF-MS 樣品: 將牛奶用三氟乙酸稀釋，得到樣品目標(biāo)物； 將SBA-15-8羥基喹啉分散在乙醇溶液中并進(jìn)行超聲處理，得懸浮液； 取懸浮液加入樣品目標(biāo)物，室溫下自然干燥后得到MALDI基質(zhì)薄層； 取待測(cè)牛奶并置于MALDI基質(zhì)薄層上，溶劑自然蒸發(fā)后進(jìn)行MALD1-T0F-MS分析。
2.如權(quán)利要求1所述的牛奶中氟喹諾酮類藥物的MALD1-T0F-MS檢測(cè)方法，其特征在于:所述制備MALD1-T0F-MS樣品步驟包括: 取10 μ L牛奶以體積比1:100用0.1%的三氟乙酸稀釋，得到樣品目標(biāo)物；取Img的SBA-15-8羥基喹啉分散在ImL乙醇溶液中并進(jìn)行超聲處理，時(shí)間為3min，得懸浮液； 取IuL懸浮液加入樣品目標(biāo)物，即用三氟乙酸稀釋后的牛奶上，室溫放置5-10min，自然干燥后得到MALDI基質(zhì)薄層； 量取0.5 μ L待測(cè)牛奶并置于MALDI基質(zhì)薄層上，放置5_10min，溶劑自然蒸發(fā)后，將基質(zhì)薄層通過(guò)MALD1-T0F-MS進(jìn)行分析。
3.如權(quán)利要求1或2所述的牛奶中氟喹諾酮類藥物的MALD1-T0F-MS檢測(cè)方法，其特征在于:所述8-羥基喹啉功能化介孔分子篩步驟包括: 將介孔分子篩SBA-15置于馬弗爐中烘烤干燥； 取干燥后的介孔分子篩SBA-15置于混有8羥基喹啉的甲苯溶液中，攪拌，然后將溫度在10分鐘內(nèi)升至120°C并保持，再進(jìn)行過(guò)濾，清洗過(guò)濾后得到的固體，在真空下干燥，得到SBA-15-8羥基喹啉。
4.如權(quán)利要求1所述的牛奶中氟喹諾酮類藥物的MALD1-T0F-MS檢測(cè)方法，其特征在于:MALD1-T0F-MS分析后得待測(cè)牛奶的質(zhì)譜圖，與純牛奶的質(zhì)譜圖進(jìn)行對(duì)比，判斷待測(cè)牛奶中是否含有氟奎諾酮藥物。
【文檔編號(hào)】G01N30/72GK103743847SQ201310746995
【公開(kāi)日】2014年4月23日 申請(qǐng)日期:2013年12月31日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月31日
【發(fā)明者】張金玲, 李凱, 孫軍, 田國(guó)寧, 趙晗 申請(qǐng)人:張金玲
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