久久一区二区免费播放,国产在线欧美日韩一区二区,国产综合色在线视频,精品伊人久久久香线蕉,精品视频麻豆网站,玖玖国产,国内精品久久久久影,在线观看精品视频一区二区三区,午夜久久影院,国产精品一区久久

專利名稱：一種使用冷凍干燥技術(shù)對(duì)生物樣品進(jìn)行前處理的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)、藥學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種使用冷凍干燥技術(shù)對(duì)生物 樣品進(jìn)行前處理的方法。
背景技術(shù)：
冷凍真空干燥也叫干燥。升華干燥或簡(jiǎn)稱凍干。它是干燥方法之一， 目的是為了貯存物品。
物品之所以會(huì)損壞、腐爛、變質(zhì)，主要是由于外因和內(nèi)因二個(gè)因素引
起的，外因者，空氣、水、溫度、生物等的作用；內(nèi)因者，主要是生物物 質(zhì)自身的新陳代謝作用。如果能使外因和內(nèi)因的作用減小到最低程度，則 能達(dá)到物品在一定時(shí)間內(nèi)保持不變的目的。
干燥法就是驅(qū)除物品內(nèi)部所含的水份，因?yàn)樗菔且磺猩锷L(zhǎng)的必 要條件之一。生物體水份減少到一定程度，則生物不易或不能生長(zhǎng)繁殖。 因而能較長(zhǎng)時(shí)間的貯藏保存；另外，當(dāng)有水份存在時(shí)， 一些酸堿溶解其內(nèi) 還會(huì)發(fā)生一些化學(xué)作用而使物品變質(zhì)。
干燥的方法很多，如曬干、烘干、煮干、晾干、噴霧干燥、真空干燥、 冷凍干燥等。其中唯有冷凍干燥法是干燥生物活性物質(zhì)的最理想方法。
冷凍干燥技術(shù)是將含水物料冷凍到冰點(diǎn)以下，使水轉(zhuǎn)變?yōu)楸缓笤?較高真空下將冰直接轉(zhuǎn)變?yōu)檎魵舛サ母稍锓椒?。物料可先在冷凍裝置 內(nèi)冷凍，再進(jìn)行干燥。但也可直接在干燥室內(nèi)經(jīng)迅速抽成真空而冷凍。升 華生成的水蒸氣借冷凝器除去。升華過(guò)程中所需的汽化熱量， 一般用熱輻射供給。其主要優(yōu)點(diǎn)是(1)干燥后的物料保持原來(lái)的化學(xué)組成和物理性 質(zhì)(如多孔結(jié)構(gòu)、膠體性質(zhì)等)；(2)熱量消耗比其他干燥方法少。主要用于 千燥抗生素、蔬菜和水果等。
含水的生物樣品，經(jīng)過(guò)冷凍固定，在低溫高真空的條件下使樣品中的 水分由冰直接升華達(dá)到干燥的目的，在干燥的過(guò)程中不受表面張力的作 用，樣品不變形。
冷凍干燥技術(shù)是在第2次世界大戰(zhàn)期間，因大量需要血漿和青霉素而 發(fā)展起來(lái)的。現(xiàn)在已廣泛應(yīng)用于化學(xué)、制藥工業(yè)、食品工業(yè)和科學(xué)研究等 方面，特別是應(yīng)用于含有生物活性物質(zhì)的生物藥品方面最為普遍。
冷凍干燥屬于邊緣科學(xué)，它涉及到物理、化學(xué)、生物學(xué)等知識(shí)，包括 制冷、真空、電工、儀表等技術(shù)。因此也是一門綜合性的專業(yè)科學(xué)技術(shù)。
在臨床醫(yī)學(xué)、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)、法醫(yī)學(xué)、藥學(xué)等研究領(lǐng)域，生物樣品中的藥 物濃度檢測(cè)是一項(xiàng)十分重要的技術(shù)，廣泛應(yīng)用于毒物分析、藥物分析等研 究中。
傳統(tǒng)的對(duì)于全血、血漿、血清、尿液、糞便、組織或組織勻漿液等生 物樣品的處理方法為有機(jī)溶劑沉淀蛋白離心后使用氮?dú)饣蚩諝饬髟诩訜?條件下吹干有機(jī)溶劑再定容后進(jìn)行分析，或者使用與生物樣品不相混容的 有機(jī)溶劑如乙酸乙酯、乙醚等進(jìn)行液液萃取后使用氮?dú)饣蚩諝饬髟诩訜釛l 件下吹干有機(jī)溶劑定容后進(jìn)行分析。
在基礎(chǔ)研究或臨床藥物濃度監(jiān)測(cè)的過(guò)程中，常常會(huì)有大量的待檢測(cè)樣 品，使用傳統(tǒng)的樣品前處理方法，樣品中的內(nèi)源性成分容易對(duì)目標(biāo)藥物的 測(cè)定產(chǎn)生干擾，并且操作步驟較多，尤其是待測(cè)藥物為熱不穩(wěn)定化合物時(shí)， 處理過(guò)程需要在低溫或室溫條件下進(jìn)行，這必然會(huì)增加樣品處理所需要的時(shí)間。
傳統(tǒng)的生物樣品前處理方法存在操作步驟多、花費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)、存在較多 內(nèi)源性干擾等弊端。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種將成熟的冷凍干燥技術(shù)應(yīng)用到生物樣品 的前處理過(guò)程當(dāng)中，能夠同時(shí)處理大量生物樣品，使對(duì)熱不穩(wěn)定化合物在 生物樣品中的測(cè)定更簡(jiǎn)便和可靠的生物樣品進(jìn)行前處理的方法。
為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是將生物樣品進(jìn)行凍干處 理后，再使用有機(jī)溶劑對(duì)生物樣品凍干粉進(jìn)行目標(biāo)化合物提取。
其具體步驟如下
1) 取待測(cè)生物樣品移至容器中，冷凍干燥技術(shù)是指將含水物料冷凍 到冰點(diǎn)以下，使水轉(zhuǎn)變?yōu)楸缓笤谳^高真空下將冰轉(zhuǎn)變?yōu)檎魵舛サ?干燥方法。物料可先在冷凍裝置內(nèi)(冷阱)冷凍，再進(jìn)行干燥。但也可直接 在干燥室內(nèi)經(jīng)迅速抽成真空而冷凍。升華生成的水蒸氣借冷凝器除去。升 華過(guò)程中所需的汽化熱量， 一般用熱輻射供給。將裝有待測(cè)物的容器置于
冷凍干燥機(jī)的冷阱中預(yù)凍至-45。C并維持2 6小時(shí)后將其從冷阱中轉(zhuǎn)移至 凍干箱中，打開真空泵，經(jīng)0.5 3小時(shí)使真空度達(dá)到0.3mbar以下，對(duì)物 料盤進(jìn)行加熱，第一步根據(jù)待測(cè)生物樣品的共熔點(diǎn)加溫使待測(cè)生物樣品的 溫度低于共熔點(diǎn)的溫度，待生物樣品內(nèi)水份干完后進(jìn)行第二步加溫，加熱 至生物樣品允許的溫度并保持2 6小時(shí)，即可結(jié)束凍干；
2) 凍干結(jié)束后，取出樣品恢復(fù)至室溫后，加入凍干前待測(cè)生物樣品 體積0.2 1倍的有機(jī)溶劑作為提取溶劑，渦旋混合1 2分鐘后于12000 16000xg以上，離心10 30分鐘或通過(guò)0.22,的濾膜后，取上清液或?yàn)V液進(jìn)行相關(guān)分析測(cè)試。
凍干結(jié)束后根據(jù)測(cè)定目標(biāo)，也可以不使用溶劑萃取，而采用其他處理 方法進(jìn)行處理測(cè)定。
本發(fā)明的生物樣品為全血、血漿、血清、尿液、糞便、組織或組織勻
漿液；萃取有機(jī)溶劑為乙醚、氯仿、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、丙酮、氯仿 或乙腈。
生物樣品的最高允許溫度指的是保證生物樣品活性的最高溫度，其最 高允許溫度視生物樣品而定， 一般為1(TC 4(TC左右。病毒性樣品的允許' 溫度為25°C，細(xì)菌性樣品的允許溫度為30°C，血清、抗菌素的允許溫度 為40。C。
本發(fā)明將冷凍干燥技術(shù)應(yīng)用到生物樣品的前處理過(guò)程中，將生物樣品 (全血、血漿、血清、尿液、糞便、組織或組織勻槳液等)在凍干機(jī)中凍干 后加入提取有機(jī)溶劑(甲醇、乙腈等)混勻離心后即可進(jìn)行含量分析，由于 生物樣品(全血、血漿、血清、尿液、糞便、組織或組織勻漿液等)的凍干 粉中沒(méi)有水分，有機(jī)溶劑中也不含水分，大部分7JC溶性的內(nèi)源性物質(zhì)不會(huì) 進(jìn)入提取有機(jī)溶劑中對(duì)目標(biāo)藥物的測(cè)定產(chǎn)生干擾，同時(shí)由于凍干粉的顆粒 小，具有多孔性結(jié)構(gòu)，比表面積大，提取溶劑對(duì)藥物的提取率明顯高于傳 統(tǒng)的樣品前處理方法。整個(gè)處理過(guò)程不需要加熱處理，尤其適合對(duì)生物樣 品中熱不穩(wěn)定化合物進(jìn)行分析。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例l:以血漿樣品為例
分離待測(cè)血液樣品中的血漿，移取0.1 ml至1.5ml的ependoff管中， 置冷凍干燥機(jī)中預(yù)凍至-45。C并維持2小時(shí)，轉(zhuǎn)移至凍干箱中，打開真空泵，經(jīng)2小時(shí)后真空度達(dá)到0.3mbar，對(duì)物料盤進(jìn)行加熱并按照預(yù)定程序 升溫至10°C，凍干程序完成，恢復(fù)凍干箱壓力為大氣壓后取出凍干后的血 漿樣品，迅速蓋上ependoff管的蓋子，恢復(fù)至室溫后加入O.lml甲醇作為 提取溶劑，渦旋混合1分鐘后12000xg離心10分鐘取上清液進(jìn)行液相分 析。
例如血漿和組織勻槳，進(jìn)行凍干處理后，使用有機(jī)溶劑提取后進(jìn)行臨 床治療藥物監(jiān)測(cè)、藥物代謝研究、藥代動(dòng)力學(xué)研究、法醫(yī)學(xué)毒物分析等。
有些分析技術(shù)，如加速器質(zhì)譜(accderator mass AMS)技術(shù)，可以將凍 干樣品不經(jīng)溶劑萃取直接進(jìn)行其氧化、還原等前處理進(jìn)行分析，應(yīng)用于臨
床治療藥物監(jiān)測(cè)、藥物代謝研究、藥代動(dòng)力學(xué)研究、法醫(yī)學(xué)毒物分析。 實(shí)施例2:
1) 取尿液移至容器中，將裝有尿樣的容器置于冷凍干燥機(jī)的冷阱中 預(yù)凍至-45。C并維持4小時(shí)后將其從冷阱中轉(zhuǎn)移至凍干箱中，打開真空泵， 經(jīng)l小時(shí)使真空度達(dá)到0.3mbar以下，對(duì)物料盤進(jìn)行加熱，第一步加熱保 持尿樣的溫度低于共熔點(diǎn)的溫度，待尿樣內(nèi)水份被除去后進(jìn)行第二步加 溫，至20T保持3小時(shí)，即可結(jié)束凍干；
2) 凍干結(jié)束后，取出樣品恢復(fù)至室溫后，加入凍干前尿液體積1/2 的乙醚作為提取溶劑，渦旋混合1分鐘后于12000xg以上，離心10分鐘 取上清液進(jìn)行相關(guān)分析測(cè)試。
實(shí)施例3:
1)取組織移至容器中，將裝有組織的容器置于冷凍干燥機(jī)的冷阱中 預(yù)凍至-45。C并維持5小時(shí)后將其從冷阱中轉(zhuǎn)移至凍干箱中，打開真空泵， 經(jīng)1小時(shí)使真空度達(dá)到0.3 mbar以下，對(duì)物料盤進(jìn)行加熱，第一步保持組織的溫度低于共熔點(diǎn)的溫度，待水份干完后進(jìn)行第二步加t顯，加熱至io°c
保持5小時(shí)，即可結(jié)束凍干；
2)凍干結(jié)束后，取出樣品恢復(fù)至室溫后，加入凍干前組織體積1、 5 的乙酸乙酯作為提取溶劑，渦旋混合2分鐘后于12000xg以上，離心20 分鐘，取上清液進(jìn)行相關(guān)分析測(cè)試。
實(shí)施例4:
1) 取組織勻漿液移至容器中，將裝有組織勻漿液的容器置于冷凍干 燥機(jī)的冷阱中預(yù)凍至-45。C并維持6小時(shí)后將其從冷阱中轉(zhuǎn)移至凍干箱中， 打開真空泵，經(jīng)3小時(shí)使真空度達(dá)到0.3mbar以下，對(duì)物料盤進(jìn)行加熱， 第一步保持組織勻漿液的溫度低于共熔點(diǎn)的溫度，待產(chǎn)品內(nèi)水份干完后進(jìn) 行第二步加溫，加熱至10。C保持4小時(shí)，即可結(jié)束凍干；
2) 凍干結(jié)束后，取出樣品恢復(fù)至室溫后，加入凍干前組織勻漿液體 積1/3的乙腈作為提取溶劑通過(guò)0.22 u m的濾膜后，取濾液進(jìn)行相關(guān)分析 測(cè)試。
權(quán)利要求
1、一種使用冷凍干燥技術(shù)對(duì)生物樣品進(jìn)行前處理的方法，其特征是，將生物樣品進(jìn)行凍干處理后，再使用有機(jī)溶劑對(duì)生物樣品凍干粉進(jìn)行目標(biāo)化合物提取。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的使用冷凍干燥技術(shù)對(duì)生物樣品進(jìn)行前處理 的方法，其具體步驟如下1) 取待測(cè)生物樣品移至容器中，將裝有待測(cè)物的容器置于冷凍干燥 機(jī)的冷阱中預(yù)凍至-45。C并維持2 6小時(shí)后將其從冷阱中轉(zhuǎn)移至凍干箱 中，打開真空泵，經(jīng)0.5 3小時(shí)使真空度達(dá)到0.311*犯以下，對(duì)物料盤進(jìn) 行加熱，第一步根據(jù)待測(cè)生物樣品的共熔點(diǎn)加溫使待測(cè)生物樣品的溫度低 于共熔點(diǎn)的溫度，待生物樣品內(nèi)水份干完后進(jìn)行第二步加溫，加熱至生物 樣品最高允許溫度并保持2 6小時(shí)即可結(jié)束凍干；2) 凍干結(jié)束后，取出樣品恢復(fù)至室溫后，加入凍干前待測(cè)生物樣品 體積0.2 1倍的有機(jī)溶劑作為提取溶劑，渦旋混合1 2分鐘后于12000 16000xg以上，離心10 30分鐘或通過(guò)0.22jom的濾膜后，取上清液或?yàn)V液進(jìn)行相關(guān)分析測(cè)試。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的使用冷凍干燥技術(shù)對(duì)生物樣品進(jìn)行前 處理的方法，其特征是所說(shuō)的生物樣品為全血、血漿、血清、尿液、糞 便、組織或組織勻漿液。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的使用冷凍干燥技術(shù)對(duì)生物樣品進(jìn)行前 處理的方法，其特征是所說(shuō)的有機(jī)溶劑為乙醚、氯仿、乙酸乙酯、甲醇、 乙醇、丙酮、氯仿或乙腈。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種使用冷凍干燥技術(shù)對(duì)生物樣品進(jìn)行前處理的方法。利用凍干機(jī)將生物樣品制成凍干粉后使用有機(jī)溶劑提取樣品中目標(biāo)化合物后進(jìn)行分析。該方法完全除去了樣品中的水分，減少內(nèi)源性物質(zhì)的干擾，并且使樣品成為疏松的多孔性粉末，增大其比表面積，提高有機(jī)溶劑對(duì)目標(biāo)化合物的提取率，簡(jiǎn)化了操作步驟，由于凍干機(jī)能夠同時(shí)處理多個(gè)樣品，對(duì)大量生物樣品的分析檢測(cè)步驟得到了簡(jiǎn)化，能夠節(jié)省樣品前處理所需時(shí)間。
文檔編號(hào)G01N1/42GK101545839SQ20091002163
公開日2009年9月30日 申請(qǐng)日期2009年3月20日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月20日
發(fā)明者鑫 宋, 張繼業(yè), 曾愛(ài)國(guó), 楊廣德 申請(qǐng)人:西安交通大學(xué)